Doğal maya suşlarının mevcut fermantasyon yeteneklerinin mutasyonla geliştirilmesi ve bacillus sp. amilaz geninin maya hücrelerine transferi
Improvement of fermantation abilities presents in wild type yeast strains by mutation and transfer of amylase gene from bacillus sp. to yeast cells
- Tez No: 95575
- Danışmanlar: DOÇ. DR. BURHAN ARIKAN
- Tez Türü: Doktora
- Konular: Biyoloji, Biology
- Anahtar Kelimeler: Maya, Fermantasyon Verimi, Mutasyon, Elektrofüzyon, Fermentasyon, Mayalar, Yeast, Fermentation Efficency, Mutation, Electrofusion II, Electrofusion, Fermentation, Yeasts
- Yıl: 2000
- Dil: Türkçe
- Üniversite: Çukurova Üniversitesi
- Enstitü: Fen Bilimleri Enstitüsü
- Ana Bilim Dalı: Biyoloji Ana Bilim Dalı
- Bilim Dalı: Belirtilmemiş.
- Sayfa Sayısı: Belirtilmemiş.
Özet
DOKTORA TEZİ DOĞAL MAYA SUŞLARININ MEVCUT FERMANTASYON YETENEKLERİNİN MUTASYONLA GELİŞTİRİLMESİ VE BACILLUS SP. AMİLAZ GENİNİN MAYA HÜCRELERİNE TRANSFERİ MUTLU NİSA UNALDI ÇUKUROVA ÜNİVERSİTESİ FEN BİLİMLERİ ENSTİTÜSÜ BİYOLOJİ ANABİLİM DALI Danışman: Doç.Dr. Burhan ARIKAN Yıl: 2000, Sayfa: 106 Jüri :Prof.Dr. Ömer ÇOLAK, Prof. Dr. Nedim UYGUN, Doç.Dr. Haluk ERTAN, Yrd.Doç.Dr. Hatice GÜVENMEZ Bu çalışmada, doğal ortamlardan izole edilen yaban tip maya suşlarının mevcut fermantasyon yeteneklerinin mutasyonla artırılması ve termofil Bacillus sp. amilaz geninin maya suşlarına elektrofüzyon tekniği ile aktarılması amaçlanmıştır. İzole edilen yaban tip maya suşlarının fermantasyon verimlerini saptamak amacıyla alkol toleransları ve osmotik stabiliteleri araştırılmıştır. Fermantasyonun çeşitli aşamalarında izole edilen izolatların alkol toleranslarının %5-%9 (v/v) arasında olduğu, osmotik stabilitelerinin de maksimum %30 olduğu bulunmuştur. Y2 olarak isimlendirilen suş fermantasyonu hızlı gerçekleştirmesi ve alkol toleransının yüksek olması nedeniyle genetik çalışmalar için seçilmiştir. Yİ, Y2, Y7, Y9, Y12, Y14, Y15, Y18, Y19 ve Y23 suşlarında termotolerans davranışın varlığı araştırılmıştır. Termotolerans davranış bulunan suşlardan total protein izolasyonu yapılmış ve Hsp (Heat-Shock protein)'lerinin varlığı araştırılmıştır. Total proteinlerin SDS-PAGE analizinde Y2 suşunda yaklaşık 100.000 D'luk farklı bir protein bandı tespit edilmiş ve Hsp proteini olarak değerlendirilmiştir. Genetik çalışmalar için seçilen Y2 suşu 20, 30, 40 ve 50 saniyelerde UV ışını ile muamele edilmiş ve dirençli koloniler seçilerek fermantasyon verimlerindeki değişiklik araştırılmıştır. Başlangıçtaki %9'luk alkol toleransının UV muamelesinden sonra %12'ye, %30'luk osmotik stabilitenin %35'e çıktığı bulunmuştur. Gen transferi çalışmaları için termofil Bacillus sp. suşları izole edilmiş ve amilaz ve selülaz enzim aktiviteleri araştırılmıştır. Amilaz ve selülaz aktivitesi yüksek bulunan ÇTB-2 suşundan kromozomal DNA izolasyonu gerçekleştirilerek lipozomlara yüklenmiştir. DNA yüklü lipozom ile Y2M suşu arasında protoplast elektrofüzyonu gerçekleştirilmiştir. YPS agar besiyerine ekilen füzantlarda amilaz aktivitesi saptanırken, CMC'li besiyerinde selülaz aktivitesi saptanamamıştır. Füzantlar 1 'er haftalık aralıklarla YPS besiyerine ekilmiş ancak 3. denemeden sonra enzim aktivitesi gözlenememiştir.
Özet (Çeviri)
ABSTRACT PhD THESIS IMPROVEMENT OF FERMENTATION ABILITIES PRESENT IN WILD TYPE YEAST STRAINS BY MUTATION AND TRANSFER OF AMYLASE GENE FROM BACILLUS SP. TO YEAST CELLS MUTLU NİSA ÜNALDl DEPARTMENT OF BIOLOGY INSTITUTE OF NATURAL AND APPLIED SCIENCES UNIVERSITY OF ÇUKUROVA Supervisor: Assoc. Prof. Dr. Burhan ARIKAN Year:2000, Pages: 106 Jury : Prof. Dr. Ömer ÇOLAK, Prof. Dr. Nedim UYGUN, Assoc. Prof. Dr. Haluk ERTAN, Assist. Prof. Dr. Hatice GÜVENMEZ In this study, it was aimed to improve the fermentation ability of wild type yeast strains isolated from nature by mutation and to transfer of amylase gene from thermophile Bacillus sp. to yeast strains by electrofusion technique. Alcohol tolerance and osmotic stability of the wild type yeast strains were investigated to determine fermantation efficiency. It was found that alcohol tolerance of the yeast strains isolated at various stages of fermantation was 5-9% (v/v) and osmotic stability was 30%. The strain which was named as Y2 was chosen for genetic applications due to high alcohol tolerance and rapid fermantation ability. Thermotolerance behavior of Yl, Y2, Y7, Y9, Y12, Y14, Y15, Y18, Y19 and Y23 strains were investigated and Hsp proteins were investigated. On SDS-PAGE analysis, a protein band approximately 100.000 D of molecular weight was determined and it was estimated as a Hsp protein. Y2 strain which was chosen for genetic applications was treated with UV light with intervals of 20, 30, 40 and 50 seconds. By selecting resistant colonies, changes of fermentation efficiency were investigated. It was found that alcohol tolerance increased from 9% (v/v) to 12% (v/v), osmotic stability increased from 30% to 35%. Thermophile Bacillus sp. strains were isolated for gene transfer tests and amylase and cellulase activity were investigated. Chromosomal DNA was isolated from ÇTB-2 strain having high amylase and cellulase activity and DNA was loaded to liposomes. Protoplast electrofusion was performed between DNA loaded liposom and Y2M strain. Amylase activity was determined on fusants spreaded on YPS medium, but cellulase activity was not determined on CMC medium. Fusants were spreaded on YPS medium with 1 week interval. After third inoculation, enzyme activity couldn't been detected.
Benzer Tezler
- Turizmin kırsal toplumda aile içi ilişkilere etkisi Antalya'nın üç köyünde karşılaştırmalı bir araştırma
Başlık çevirisi yok
HÜSEYİN BAL
- Doğal hücresel sitotoksisitenin kolorimetrik bir yöntem ile ölçümü
Measurement of natural cell-mediated cytotoxicity by a colorimetric assay
ZEYNEP GÜLAY
- Candida türleri kullanılarak doğal hücresel sitotoksisitenin ölçümü
Measurement natural cellular cytotoxicity by using candida species
HÜLYA SEYED OSKOVİ(ÖZKAN)
Tıpta Uzmanlık
Türkçe
1989
MikrobiyolojiGazi ÜniversitesiMikrobiyoloji Ana Bilim Dalı
PROF. DR. TURGUT İMİR
- Fare lenfosit doğal sitotoksisitesinin kolorimetrik yöntem ile ölçülmesi
Measurement of murine natural cell-mediated cytotoxicity of colorimetric assay
SAİED MİRSHAHİDİ
Yüksek Lisans
Türkçe
1992
MikrobiyolojiGazi ÜniversitesiMikrobiyoloji Ana Bilim Dalı
PROF. DR. TURGUT İMİR
- Stabilization of yeast invertase
Maya invertazının dayanıklılığının arttırılması
ÖZLEM KAPLAN
Yüksek Lisans
İngilizce
1996
Gıda MühendisliğiOrta Doğu Teknik ÜniversitesiGıda Mühendisliği Ana Bilim Dalı
YRD. DOÇ. DR. UFUK BAKIR