Protease secretion by torula thermophila on cellulose - containing media
Selülaz içeren ortamda torula thermophila'nın proteaz üretimi
- Tez No: 93229
- Danışmanlar: DOÇ. DR. ZÜMRÜT BEGÜM ÖGEL, PROF. DR. FARUK T. BOZOĞLU
- Tez Türü: Yüksek Lisans
- Konular: Gıda Mühendisliği, Food Engineering
- Anahtar Kelimeler: Torula thermophila, selülaz, endoglukanaz, proteaz. vı, Peptid hidrolazlar, Üretim, Torula thermophila, cellulase, endoglucanase, protease, Peptide hydrolases, Production
- Yıl: 2000
- Dil: İngilizce
- Üniversite: Orta Doğu Teknik Üniversitesi
- Enstitü: Fen Bilimleri Enstitüsü
- Ana Bilim Dalı: Gıda Mühendisliği Ana Bilim Dalı
- Bilim Dalı: Belirtilmemiş.
- Sayfa Sayısı: Belirtilmemiş.
Özet
Bu çalışmada, T. thermophila' mn selüloz içeren ortamdaki proteaz üretimi ve selülaz aktivitesi üzerindeki etkileri araştırılmıştır. Bu amaçla T. thermophila, karbon kaynağı olarak Avicel (mikrokristalin selüloz), çim kırpığı ve elma posası üzerinde, 45°C ve 155 rpm'de büyütülmüş ve proteaz ile endoglukanaz aktivitelerine bakılmıştır. Proteaz aktivitesi ölçümlerinden önce, aktivite ölçüm deneyinin sıcaklık ve pH optimizasyonu yapılmıştır. Buna göre, T. thermophila tarafından üretilen proteazlar nötr ve alkali pH'ta ve 37-45°C arasındaki sıcaklıkta aktiftir. Enzim aktivitesi ölçümlerinde kullanılacak pH ve sıcaklık, 7.5 ve 40°C olarak seçilmiştir. Selüloz içeren ortamda maksimum proteaz üretimi, endoglukanaz aktivitesinin düşük olduğu 3. günde görülmüştür. Ayrıca, maksimum endoglukanaz üretimi, proteaz aktivitesinin çok düştüğü 6. günde görülmüştür. Maksimum proteaz ve endoglukanaz üretiminin farklı günlerde olması, iki enzim arasında bir ilişki olabileceğini %C VUKSEKOCiiUTIW KÜREMgöstermektedir. Bu hipotezi test etmek için, büyümenin 3., 6. ve 9. günü alman kültür ortamları karıştırılarak, proteaz ve endoglukanaz aktiviteleri takip edilmiştir. Buna göre, proteaz aktivitesindeki artışa rağmen, proteazın hücredışı endoglukanaz aktivitesi üzerinde önemli bir etkisinin olmadığı görülmüştür. Bu çalışmalara ek olarak, T. thermophila tararından avicel üzerinde üretilen proteazların türünü belirlemek amacıyla inhibisyon çalışmaları yapılmıştır. Phenyl methyl sulfonyl fluoride (PMSF), p-chloromercury benzoate (pCMB), antipain, ethylene diamine tetraacetate (EDTA) ve pepstatin A, inhibitor olarak denenmiştir. Proteazların, PMSF, pCMB ve antipain tarafından kısmen inhibe edilmesi göz önünde bulundurularak, T. thermophila 'nın“serine”ve“cysteine (thiol)”proteaz ya da“thiol”grubu içeren“serine”proteaz ürettiği sonucuna varılmıştır.
Özet (Çeviri)
In this work, Torula thermophila protease production was analyzed in cellulose-containing media and effect on cellulase activity was investigated. In this respect, T. thermophila was cultivated on media containing Avicel (microcrystalline cellulose), grass clippings and apple pomace as the carbon source in shake flask cultures at 45°C and 155 rpm, and protease as well as endoglucanase activities were determined. Prior to protease activity measurements, the temperature and pH of enzyme assays were also optimized. Accordingly, proteases produced by T. thermophila were active at neutral and alkaline pH and at a temperature range of 37-45°C. As a result, the assay pH and temperature were selected as pH 7.5 and 40°C. On cellulose-containing media, the maximum production of proteases was on the 3rd day of cultivation where endoglucanase activity was low. While, endoglucanase production was maximum on the 6 day where protease activity was declining. The production m DOKUMANTXSVnN limniof proteases and endoglucanases on different days suggested a possible negative effect of proteases on endoglucanase activity. To test tins hypothesis, experiments were carried out by mixing supernatants from the 3rd, 6th and 9th day of cultivations and by measuring changes in protease and endoglucanase activities. It was observed that proteases have little effect on extracellular endoglucanase activities in the sample supernatants, despite an increase in protease levels. Further experiments were made to determine the type of proteases secreted by T. thermophila on avicel-containing media. Inhibition experiments were performed using phenyl methyl sulfonyl fluoride (PMSF), p- chloromercury benzoate (pCMB), antipain, ethylene diamine tetraacetate (EDTA) and pepstatin A as inhibitors. Proteases were partially inhibited by the inhibitors PMSF, pCMB and antipain, indicating the presence of both serine and cysteine (thiol) proteases or the presence of thiol-containing serine proteases in the culture filtrates of T. thermophila.
Benzer Tezler
- Bacillus subtilis'te üreme plazmid ve amilaz sekresyonu üzerine kalsiyum kanal blokörlerinin ve ağır metallerin etkisi
The Effects of heavy metals and calcium chanal blockers on bacillus subtilis's growth, plasmid and amylase secretion
FİKRET UYAR
- PCR amplification, cloning and sequencing of the gene coding for salivaricin B and partial characterisation of the bacteriocin produced by Lactabacillus salivarius M7
Başlık çevirisi yok
OSMAN ÇATALOLUK
Doktora
İngilizce
1999
BiyoteknolojiOrta Doğu Teknik ÜniversitesiBiyoteknoloji Ana Bilim Dalı
YRD. DOÇ. DR. CANDAN GÜRAKAN
- Pulmonary amfizem ve karaciğer hastalığı ile ilgili seyrek görülen kalıtsal alfa 1 proteinaz inhibitör eksikliğinin moleküler temeli
The Molecular basis of the rare human genetic disorder alpha 1 proteinase inhibitor deficiency associated with pulmonary emphysema and liver disease
SHAHLA PARVİNGHODS
Doktora
Türkçe
1997
BiyokimyaHacettepe ÜniversitesiBiyokimya Ana Bilim Dalı
PROF. DR. İNCİ ÖZER
PROF. DR. JERRY L. BROWN
- Alfa-Amilaz, üreten bazı bacıllus suşlarının gelişme parametreleri, enzim özellik ve üretim koşullarının optimizasyonu
Optimization of growth parameters, enzyme characteristics and production conditions of some alpha-amylase producing bacillus strains
ELİF SARIKAYA
- Protease activities of thermophilic microorganisms isolated from hot springs in Turkey: Detection of alkaline serine protease gene sequences by polmerase chain reaction (PCR)
Türkiye'deki sıcak su kaynaklarından izole edilen termofilik mikroorganizmaların proteaz aktiviteleri: Alkali serin proteaz gen dizilerinin polimeraz zincir reaksiyonu (PCR) ile belirlenmesi
BİLGE ERDEM
Yüksek Lisans
İngilizce
1999
BiyolojiOrta Doğu Teknik ÜniversitesiBiyoloji Ana Bilim Dalı
PROF. DR. SEMRA KOCABIYIK