Erişkin insan normal hemoglobinine karşı faj gösterim yöntemi ile rekombinant antikor geliştirilmesi
Başlık çevirisi mevcut değil.
- Tez No: 91467
- Danışmanlar: PROF. DR. BEYAZIT ÇIRAKOĞLU
- Tez Türü: Doktora
- Konular: Tıbbi Biyoloji, Medical Biology
- Anahtar Kelimeler: Belirtilmemiş.
- Yıl: 1999
- Dil: Türkçe
- Üniversite: Marmara Üniversitesi
- Enstitü: Sağlık Bilimleri Enstitüsü
- Ana Bilim Dalı: Tıbbi Biyoloji ve Genetik Ana Bilim Dalı
- Bilim Dalı: Belirtilmemiş.
- Sayfa Sayısı: Belirtilmemiş.
Özet
IX ÖZET Son zamanlarda geliştirilen“Faj Gösterim Teknikleri”ile farklı sınıflara ait birçok molekül için algılayıcı yapıların oluşturulması sağladığı gibi bağışıklama yapılmaksızın antikor geliştirilmesi de mümkün olmaktadır. Faj gösterim teknolojisinin bu özellikleri bilim adamlarına, tanı amaçlı hayvan antikorları geliştirilmesinde zaman kazanımı, tedaviye yönelik insan antikorları geliştirme olanağı ve aynı zamanda immünojen olmayan moleküller ve haptenler için antikor üretim şansı sağlar. Bu çalışmada, kolon kanserinin bir işareti olabilecek dışkıdaki gizli kanın ve hemoglobinopatilerde populasyon taraması çalışmalarında diğer hemoglobin tiplerinin tespit edilmesinde kullanılmak üzere nihai hedef olan immünokitlerin geliştirilmesi amacıyla faj gösterim teknolojisi kullanarak scFv ( tek zincir değişken parça) formunda rekombinant anti-hemoglobin A elde edildi. Hemoglobin A'ya karşı scFv üretimi için, ticari olarak satılan liyofilize hemoglobin A ile Balb/CJ soyuna ait fare bağışıklandı ve antikor molekülünün fonksiyonel değişken ağır ve hafif zincir genleri antijenle uyarılmış B lenfosit mRNA'larından elde edildi. Immunglobulin değişken ağır ve hafif zincirleri PCR yardımıyla scFv formunda bir arayagetirilerek pCANTAB5E vektörüne klonlandı. Beş tur yapılan“biopanning”işlemi sorasında rastlantısal olarak seçilen 93 adet klon hemoglobine karşı faj ELİSA yöntemi ile tarandı ve beş adet klon pozitif olarak kabul edildi. Faj ELİSA sonuçlarına göre pozitif olan klonlar klonlama bölgeleri ve insert büyüklükleri polimeraz zincir reaksiyonu ve enzim kesimleriyle ile test edildi. BerHb77 olarak isimlendirilen klonun nükleotid dizisinin tespit çalışmaları yapıldı. BerHb77' ye ait olan nükleotid dizisinin nükleotid dizi bankasında ( GENBANK) yapılan karşılaştırmaları sonucunda aynı diziye rastlanmadı. Sonuçlar diğer hemoglobin tiplerinin saha tespit çalışmasında kullanılacak olan immüntanı kitlerinin geliştirilmesinde faj gösterim teknolojisinin kullanılabilirliğini göstermektedir.
Özet (Çeviri)
vıı SUMMARY Recently developed“phage display techniques”are used to find ligands for many molecules of different classes which can be applied in purification schemes, diagnostics or therapeutics.presenting great potential in the field of the development of antibodies. These characteristics of the“Phage DisplayTechnology”can givethe opportunity to the scientists time- saving in the case of animal antibodies, the chance for the development of human antibodies and also providing antibody production for non- immunogenic molecules and haptens or self antigens in all cases. In this study we obtained recombinant anti-human hemoglobin A in the form of scFv ( single chain variable fragment ) by using phage display technology with the ultimate aim of developing immunodiagnostic kits for the detection of occult blood in the feces which could be a sign of the column cancer and other hemoglobin types for population screening studies in hemoglobinopathies. In the production of anti-hemoglobin A scFv, Balb/CJ mice were immunized with lyophilized commercial human hemoglobin A and the functional variable heavy and light chain genes of antibody were obtained from antigen stimulated B-lymphocyte mRNAs. Variable Ig heavy and light chain genes were assembled together in the form of scFv by polymerase chain reaction and cloned into the vector pCANTAB5E ( purchase from Pharmacia). After the five round of“biopanning”.randomly selected 93 clones were tested against human hemoglobin by phage ELISA and five clones were accepted as positive. According to the phage ELISA results ; positive clones were tested with respect to its multiple cloning site and its insert size with polymerase chain reaction and restriction enzyme digestion. The clone coded as BerHb77 was sequenced to identify its nucleotide composition. The nucleotide sequence of BerHb77scfv was compared with nucleotide data bank ( GENBANK) by using BLAST and couldn't be found same nucleotide sequence in data bank.vııı The results show that application of phage display technology is possible for developing immunodiagnostic kits for detection other hemoglobin types for population screening studies in hemoglobinopaties.
Benzer Tezler
- Erişkin Türk erkeklerinde antropometrik kulak ölçümleri ve standartların oluşturulması
Başlık çevirisi yok
CEM ARI
- Çocuklarda normal, aplastik anemi, akut lösemi kemik iliklerinin ve kemik iliğinden perifere hücre çıkışının“scanning”elektron mikroskobu ile incelenmesi
Başlık çevirisi yok
LEYLA AĞAOĞLU
Tıpta Uzmanlık
Türkçe
1997
Çocuk Sağlığı ve Hastalıklarıİstanbul ÜniversitesiÇocuk Sağlığı ve Hastalıkları Ana Bilim Dalı
- Epidermal growth faktör reseptörlerinin pankreas dokusundaki dağılımının immünohistokimyasal olarak gösterilmesi
Başlık çevirisi yok
GÜLÇİN ABBAN
Doktora
Türkçe
1999
MorfolojiGazi ÜniversitesiHistoloji ve Embriyoloji Ana Bilim Dalı
PROF. DR. MÜFİDE GÖRGÜN
- Çocuklar üzerindeki tıbbi araştırmaların etik açısından değerlendirilmesi
Evaluation of medical researchs on children in respect of ethics
HAFİZE ÖZTÜRK
Doktora
Türkçe
2000
Deontoloji ve Tıp TarihiAnkara ÜniversitesiDeontoloji ve Tıp Tarihi Ana Bilim Dalı
PROF. DR. BERNA ARDA
- Sıçanlarda Kadmiyumklorür'ün (CdCl2) testis dokusuna etkisi
The Effect of cadmiumchloride (CdCl2) on rat testes
SEVİM KARATAŞ
Yüksek Lisans
Türkçe
1998
MorfolojiEskişehir Osmangazi ÜniversitesiHistoloji ve Embriyoloji Ana Bilim Dalı
PROF. DR. CENGİZ BAYÇU