Aspergillus niger'den ürikaz enziminin saflaştırılması ve kinetik özelliklerinin belirlenmesi
Determination of kinetic properties and purification of uricase enzyme from aspergillus niger
- Tez No: 77807
- Danışmanlar: PROF. DR. EROL AKGÖZ
- Tez Türü: Doktora
- Konular: Biyoloji, Biology
- Anahtar Kelimeler: Aspergillus niger, Enzimler, Ürikaz, Aspergillus niger, Enzymes, Uricase
- Yıl: 1998
- Dil: Türkçe
- Üniversite: Hacettepe Üniversitesi
- Enstitü: Fen Bilimleri Enstitüsü
- Ana Bilim Dalı: Biyoloji Ana Bilim Dalı
- Bilim Dalı: Belirtilmemiş.
- Sayfa Sayısı: Belirtilmemiş.
Özet
ÖZET Bu çalışma kapsamında, Aspergillus niger' den ürikaz enziminin tek aşamalı olarak üretilmesi, saflaştırılması ve bazı biyokimyasal özelliklerinin belirlenmesi amaçlanmıştır. A. niger' den ürikaz enziminin tek aşamada üretilmesi ve bunu etkileyen faktörler araştırıldığında, üretim süresinin 3 gün, üretim sıcaklığının 30 °C, başlangıç pH' ın 6.0 ve indüktör derişiminin % 0. 1 olduğu koşullarda ürikaz aktivitesi maksimum olarak saptanmıştır.Enzimin optimum çalışma koşullan ise;inkübasyon süresi 15 dakika, sıcaklık 35 °C, pH: 8.5 olarak belirlenmiştir. A. niger ürikazı, amonyum sülfat çöktürmesi, diyaliz, jel elemesi (Sephadex G - 200) ve iyon değiştirici kromatografı (DEAE - Cellulose) yöntemleri kullanılarak 40,4 kez saflaştırılmış,saflaştırılan enzimin ürik asit için Km değeri 1.25xl0“5 M, V max ise 3.3 jımol/ml/ dk olarak hesaplanmıştır. 10 mM, KCN ve PCMB' m enzim aktivitesini tamamen inhibe ettiği, +2 değerlikli metal iyonlarından 10”3 M, Hg+2 %95; Zn+2 %89 ve Cu"2,ın %48 inhibisyon meydana getirdiği bulunmuştur. A. niger ürikazının,herbiri 19.500 D molekül ağırlığına sahip özdeş veya benzer dört alt üniteden oluşmuş 78.000 D molekül ağırlığında tetramer yapılı bir enzim olduğu belirlenmiştir.
Özet (Çeviri)
ABSTRACT This study was undertaken to obtain uricase enzyme from Aspergillus niger by producting the enzyme in one - step, purification and also to determine its some biochemical properties. The results of the experiments, considering the one - step extraction of the uricase enzyme and the factors affecting the production, have demonstrated that the enzyme activity was maximum when the production time was 3 days at a temparature of 30°C with the initial pH at 6.0 and inductor concentration at 0.1%. The optimum conditions found for enzyme - substrate mixture are as follows: incubation time, 15 minutes; temparature, 35 °C; pH 8.5. A. niger uricase was purified 40.4 times by using amonium sulphate precipitation, dialysis, gel filtration ( Sephadex-G 200) and ion exchange chromatography ( DEAE-Cellulose) techniques.The Km and Vmax values of uricase for uric acid were 1.25xl0“5 M and 3.3 umol/ml/dk, respectively. 10 mM, KCN and PCMB completely inhibited the enzyme activity. Furthermore, the metal ions such as 10”3 M Hg+2 (%95), Zn+2 (%89) and Cu+2 (%48) were inhibited the activity. The molecular weigth of A. niger uricase was estimated to be 78.000 D. The enzyme appears to be composed of four subunits each of which is about 19.500 D which suggests that the enzyme is a tetramer.
Benzer Tezler
- Characterization of immobilized catalase and their application in the milk sterilization with H2O2
Başlık çevirisi yok
EMİNE AKERTEK
Yüksek Lisans
İngilizce
1994
KimyaDokuz Eylül ÜniversitesiKimya Eğitimi Ana Bilim Dalı
DOÇ. DR. LEMAN TARHAN
- Glucose oxidase enzimi substrat, inhibitör ve aktivatörlerine ait kinetik parametrelerin tayini
Başlık çevirisi yok
TEVFİK ATALAY
- Purification of glucose oxidase from Aspergillus niger
Glikoz oksidazın Aspergillus niger'den saflaştırılması
MAYDA GÜRSEL
Yüksek Lisans
İngilizce
1990
BiyolojiOrta Doğu Teknik ÜniversitesiBiyoloji Ana Bilim Dalı
DOÇ. DR. MERAL YÜCEL
- Lipaz ve proteaz enzimleri katılarak üretilen beyaz peynirlerin uygun olgunlaşma süresinin saptanması
Başlık çevirisi yok
A.SERDAR AYDEMİR
Yüksek Lisans
Türkçe
1988
Gıda MühendisliğiUludağ ÜniversitesiTarım Ürünleri Teknolojisi Ana Bilim Dalı
PROF. DR. OĞUZ KILIÇ