Activity of protein kinase C as a function of in-vivo and in-vitro ageing in human skin fibroblast and the role of antioxidants
İn-vivo ve in-vitro yaşlanmanın bir fonksiyonu olarak insan deri fibroblastlarında protein kinaz C aktivitesi ve antioksidanların rolü
- Tez No: 76444
- Danışmanlar: PROF. DR. S. HÜVEYDA BAŞAĞA
- Tez Türü: Yüksek Lisans
- Konular: Biyoloji, Biology
- Anahtar Kelimeler: Antioksidanlar, Protein kinaz C, İn vitro, İn vivo, Antioxidants, Protein kinase C, In vitro, In vivo
- Yıl: 1998
- Dil: İngilizce
- Üniversite: Boğaziçi Üniversitesi
- Enstitü: Fen Bilimleri Enstitüsü
- Ana Bilim Dalı: Moleküler Biyoloji ve Genetik Ana Bilim Dalı
- Bilim Dalı: Belirtilmemiş.
- Sayfa Sayısı: Belirtilmemiş.
Özet
VI ÖZET Protein kinaz C (PKC), serin - treonine özel kinazlann bir ailesidir. PKC ailesinin üyeleri, hücre büyümesi ve farklılaşması, gen ekspresyonu ve hormon salgılamasını da içine alan çeşitli hücresel fonksiyonlarda önemli bir rol oynamaktadır. Son zamanlardaki çalışmalar, PKC'nin hücresel yaşlanmada da önemli bir rolü olabileceğini göstermiştir. PKC aktivitesinin, 19, 37, 61 ve 71 yaşlarında olan vericilerden elde edilen insan deri fibroblastlarında, yaşın bir fonksiyonu (in vivo yaşlanma) ve 5, 7, 9, 12, 14 numaralı pasajlarda, pasaj sayısının bir fonksiyonu olarak (in vitro yaşlanma) saptanması, esas ilgi alanımızı oluşturmuştur. Elde edilen sonuçlar, PKC aktivitesinin vericinin yaşıyla paralel olarak arttığını ve 61 yaşında en yüksek değere ulaştığını göstermiştir. PKC aktivitesinin, pasaj sayısına bağlı olarak da arttığı bulunmuştur, başka bir deyişle, daha yüksek sayılara pasajlanan hücrelerde, PKC aktivitesi de artmıştır. Buna göre, in vivo ve in vitro yaşlanmayı, PKC aktivitesi bazında karşılaştırmak mümkündür. Bütün deneylerde, PKC aktivitesi forbol miristat asetat (PMA) ilave edilerek ölçülmüş ve sonuçlar pmol/dakika/106 hücre olarak gösterilmiştir. PKC aktivitesi hücre evrelerinin bir fonksiyonu olarak 24 saat boyunca araştırılmıştır. Elde edilen sonuçlara göre, enzim aktivitesi yaklaşık 15 saat içinde, DNA replikasyonundan önceki periyodu göstermek üzere, en yüksek değerini bulmuştur. Bu sonuçlar [3H] timidin katılımı ile daha ileri düzeyde kontrol edilmiş ve 15 saat geçtikten sonra yükselmeye başlayan, 24 saat civarında en yüksek seviyesine ulaşan cpm (sayım / dakika) değerleri elde edilmiştir. Son olarak, antioksidan maddelerin bu sistemdeki rolünü belirlemek amacıyla, silibin dihemisaksinat (SDH) ve alfa-tokoferolün hücre bölünmesindeki rolü araştırılmıştır. Elde edilen sonuçlara göre 50 uM alfa-tokoferol kullanımı, konsantrasyona bağlı olarak hücre bölünmesini yüzde 40 engellemiştir. 1 mM konsantrasyonda SDH kullanılması durumunda ise hücre bölünmesi yüzde 49.67 engellenmiştir. Elde edilen bulgular, PKC'nin hücresel işlemlerde ve yaşlanma fenomenindeki önemi yönüyle tartışılmıştır.
Özet (Çeviri)
ABSTRACT Protein kinase C (PKC) is a family of serine and threonine-specific kinases. Members of the PKC family play a key role in a variety of cellular functions including cell growth and differentiation, gene expression and hormone secretion. Recent reports have shown that it may also play an important role in cellular ageing. Our specific area of interest was the determination of PKC activity as a function of age in human skin fibroblasts obtained from different age donors; 19, 37, 61, 71 years old (in vivo ageing) and as a function of passage number; 5, 7, 9,12, 14 (in vitro ageing). Our results indicated that PKC activity increased with the age of the donor, reaching its maximum value at the age of 61. Passage dependent changes on PKC activity were also observed, namely cells which have undergone higher number of passages, showed an increased activity of PKC. In this respect in vivo and in vitro ageing can be correlated in terms of PKC activity. In all cases PKC activity was measured in the presence of phorbol 12-myristate 13-acetate PMA and results were expressed as cpm/min/106 cell. We have further investigated the activity of PKC as a function of cell cycle for 24 hours. We have found that the activity of the enzyme reached its maximum value in approximately 15 hours, indicating the period before DNA replication. These results were further checked by [3H] incorporation which also gave increasing counts per minute (cpm) after 15 hours with a peak around 24 hours. Finally, in order to study the role of antioxidants on this system, we have performed experiments with silibin dihemisuccinate (SDH) and a-tocopherol to investigate their role on cell proliferation. Our results showed that a-tocopherol inhibited cell proliferation by 40 percent in a concentration dependent manner when used at 50 uM. SDH, also inhibited cell proliferation by 49.67 percent at 1 mM concentration. The results are discussed in view of the importance of PKC in cellular processes and cellular ageing phenomena.
Benzer Tezler
- Düşük E vitaminli diyetle beslenen tavşanların aortalarında gözlenen değişiklikler
Spontenous changes in the aortas of vitamin E deficient rabbits
NUSRET ENGİN KAYA
- Purification of casein kinase II from sheep lung tissue and kinetic characterization using MYC oncoproteins as sustrate
Koyun akciğer dokusundan kazein kinaz II`nin saflaştırılması ve MYC onkoproteini substratı ile kinetik karakterizasyonu
NESRİN GÜNDOĞUŞ
- D-alfa-Tokoferol`ün düz kas hücresi üzerine olan etkisinin in vivo olarak incelenmesi ve bunun aterosklerozdaki önemi
Başlık çevirisi yok
ÖNDER ŞİRİKÇİ
- Partial purification and characerization of neutral trehalase from baker's yeast
Nötral trehalaz enziminin ekmek mayası Saccharomyces cerevisiae' den kısmen saflaştırılması ve karakterizasyonu
SANİYE YARAR
Yüksek Lisans
İngilizce
1997
BiyokimyaOrta Doğu Teknik ÜniversitesiBiyokimya Ana Bilim Dalı
PROF. DR. HALUK HAMAMCI
- In vivo effect of epinephrine on rabbit liver and lung microsomal cytochrome P-450-dependent drug metabolising enzymes
Başlık çevirisi yok
İSSAM KHALİL ABU SA'DA
