Partial purification and characerization of neutral trehalase from baker's yeast
Nötral trehalaz enziminin ekmek mayası Saccharomyces cerevisiae' den kısmen saflaştırılması ve karakterizasyonu
- Tez No: 68809
- Danışmanlar: PROF. DR. HALUK HAMAMCI
- Tez Türü: Yüksek Lisans
- Konular: Biyokimya, Biochemistry
- Anahtar Kelimeler: Nötral Trehalaz, Trehaloz, Saccharomyces cerevisiae, Sıcaklık -şok proteinleri, strese dayanıklılık, Bira mayası, Neutral Trehalase, Trehalose, Saccharomyces cerevisiae, Heat, Yeast
- Yıl: 1997
- Dil: İngilizce
- Üniversite: Orta Doğu Teknik Üniversitesi
- Enstitü: Fen Bilimleri Enstitüsü
- Ana Bilim Dalı: Biyokimya Ana Bilim Dalı
- Bilim Dalı: Belirtilmemiş.
- Sayfa Sayısı: Belirtilmemiş.
Özet
oz Yarar, Saniye Yüksek lisans, Biyokimya Anabilim Dalı Tez Yöneticisi: Prof. Dr. Haluk Hamamcı Aralık 1997, 71 sayfa Trehaloz (a-D-ghıkopyranosyl-a-D-ğlukopyranoz), mayalardaki başlıca depo kafbonhidratlardandrr ve trehalaz enzimi (EC 3.2.1.28) tarafından glukoza hidroliz edilir. Fungus trehalaz enzimleri başlıca iki gruba ayrılır: Birinci grup trehalaz enzimleri asidik pH optimuma sahiptir (pH 3.5 ve 5.5) ve vakuolde yer alır. ikinci grup trehalaz enzimleri ise nötr pH de çalışır (pH 6 ve 7,5) ve sitozolde bulunur. Nötral trehalaz enzim aktivitesi, cAMP bağunh-protein kinaz tarafından düzenlenir ve in vitro olarak cAMP varlığında Mg ATP ve protein kinaz ile aktive edilebilir. Bu çalışmada, nötral trehalaz enzimi, ticari ekmek mayası Saccharomyces cerevisiae den kısmen saflaştırılmış ve karakterize edilmiştir.Ticari ekmek mayası susundan, nötral trehalaz enzimi amonyum sülfat ve DEAE-selüloz kolon kromatografisi kullanılarak kısmen saflaştırılmıştır. Trehalaz % 35-50 amonyum sülfat fraksiyonunda çökmüş ve yaklaşık 5-8 kat saflaştırma başarılmıştır. Mayaların cAMP'ye bağımlı protein kinaz enzimi de % 35-50 ammonyum sülfat fraksiyonunda bulunmaktadır ve bu iki protein DEAE-selüloz kolonunda ayrışmaktadır. İyon değiştirici kromatografiden sonra tamamen inaktif bale gelen trehalaz enzimi protein kin azın, cAMP ve ATP ile birlikte eklenmesi ile aktif hale gelir. Kolon kromatografisi üe 215-260 kat saflaştırma sağlanmıştır. Bir mM EDTA ham özütteM trehalaz aktjvitesini tamamıyla inhibe ederken, amonyum sülfat ve DEAE-Selüloz kromatografisinden sonraki inhibisyon dereceleri sırasıyla % 73.5 ve % 50 olarak bulunmuştur. Optimum pH aralığı ve sıcaklığı, sırasıyla pH 6-6.8 ve 30 °C olarak tayin edilmiştir. Km ve Vmax değerleri sırasıyla trehaloz için 11.78 mM ve 12.16 pmole glu/min/ mg protein olarak bulunmuştur. Enzimin moleküler ağırlığı, % 7.5 SDS-PAGE ile 80.000 Da civarında hesaplanmıştır.
Özet (Çeviri)
ABSTRACT PARTIAL PURIFICATION AND CHARACTERIZATION OF NEUTRAL TREHALASE FROM BAKER'S YEAST Saccharomyces cerevisiae Yarar, Saniye M. S., Department of Biochemistry Supervisor:Prof. Dr. Haluk Hamamcı December, 1997, 71 Pages Trehalose (a-D-glucopyranosyl-a-D-glucopyranose), a major reserve carbohydrate in yeast, mobilized by hydrolysis to glucose catalysed by trehalases (EC 3.2. 1.28). Fungal trehalases can be divided relatively easily into two groups: The first group contains trehalases with an acid pH optimum (between pH 3.5 and 5.5) and localized in the vacuole. A second type of trehalases have neutral pH optimum (between pH 6 and 7.5) and localized in the cytosole.Neutral trehalase activity is regulated through cAMP-dependeiit protein kinase and it can be activated by protein kinase in the presence of cAMP and MgATP //; vitro. In this study, neutral trehalase enzyme was partially purified and characterized from the commercial baker's yeast Saccharomyces cerevisiae. The neutral trehalase of a commercial baker's yeast ( S. cerevisiae) strain has been partially purified using ammonium sulfate fractionation and DEAE- Cellulose column chromatography techniques. Trehalase was precipitated between 35-50 % ammonium sulfate saturation and approximately 5-8 fold purification achieved. The yeast cAMP-dependent protein kinase was also precipitated in the same fraction and these two proteins were separated by DEAE-Cellulose column chromatography. Trehalase became totally inactive after ion exchange chromatography, (“ cryptic trehalase”(tre-c) ) which was later activated with the addition of protein kinase together with cAMP and ATP. A 215 to 260 fold purification was obtained after column chromatography. One mM EDTA caused the complete inhibition of enzyme in crude extract, however the inhibition levels in ammonium sulfate and DEAE-Cellulose fraction were 73.5 % and 50 %, respestively. Optimal pH range and temperature value of the enzyme were determined as pH 6-6.8 and 30 °C, respectively. The Km and Vmax values were found as 11.78 mM trehalose and 12. 16 umole glucose/ min/mg protein, respectively by using Lineweaver-Burk plot. The molecular weight of neutral trehalase was estimated as around 80.000 Da by 7. 5 % SDS-PAGE.
Benzer Tezler
- Partial purification and characterization of beta-galactosidase from streptococcus thermophilus strain RSKK 667
Başlık çevirisi yok
RESSA REJAEE
Yüksek Lisans
İngilizce
1993
BiyolojiOrta Doğu Teknik ÜniversitesiBiyoloji Ana Bilim Dalı
PROF. DR. UFUK GÜNDÜZ
- Partial purification and characterization of sheep liver xanthine oxidase
Başlık çevirisi yok
HAKAN GÖNÜL
Yüksek Lisans
İngilizce
1993
BiyolojiOrta Doğu Teknik ÜniversitesiBiyoloji Ana Bilim Dalı
DOÇ. DR. MESUDE İŞCAN
- Partial purification and characterization of NADH-cytochrame b5 reductase from mullet liver microsomes
NADH-sitokrom b5 redüktaz enziminin kefal karaciğer mikroorganizmalarından kısmi olarak saflaştırılması ve karakterizasyonu
ZAHİDE KABAKLAR
Yüksek Lisans
İngilizce
1998
BiyokimyaOrta Doğu Teknik ÜniversitesiBiyokimya Ana Bilim Dalı
PROF. DR. EMEL ARINÇ
- Partial purification and characterization of B-1,4-endoxylanase from rhizopus oryzae
Rhizopus oryzae küfünden ksilanaz enziminin kısmen saflaştırılması ve biyokimyasal karakterizasyonu
FERDA GÜVENÇ
Yüksek Lisans
İngilizce
2000
BiyoteknolojiOrta Doğu Teknik ÜniversitesiBiyoteknoloji Ana Bilim Dalı
PROF. DR. TÜLİN GÜRAY
DOÇ. DR. UFUK BAKIR
- Sarımsak filizinden asit fosfatazın kısmi saflaştırılması ve özelliklerinin incelenmesi
Partial purification and characterization of acid phosphatase from garlic seedling
SERDAR BAZAROV
