Geri Dön

Partial purification and characterization of B-1,4-endoxylanase from rhizopus oryzae

Rhizopus oryzae küfünden ksilanaz enziminin kısmen saflaştırılması ve biyokimyasal karakterizasyonu

  1. Tez No: 93398
  2. Yazar: FERDA GÜVENÇ
  3. Danışmanlar: PROF. DR. TÜLİN GÜRAY, DOÇ. DR. UFUK BAKIR
  4. Tez Türü: Yüksek Lisans
  5. Konular: Biyoteknoloji, Biotechnology
  6. Anahtar Kelimeler: Ksilan, Ksilanaz, Rhizopus oryzae, saflaştırma, biyokimyasal karakterizasyon. vı, Enzim saflaştırması, Küf, Xylan, Xylanase, Rhizopus oryzae, purification, biochemical characterization. IV, Enzyme purification, Xylanese, Mould
  7. Yıl: 2000
  8. Dil: İngilizce
  9. Üniversite: Orta Doğu Teknik Üniversitesi
  10. Enstitü: Fen Bilimleri Enstitüsü
  11. Ana Bilim Dalı: Biyoteknoloji Ana Bilim Dalı
  12. Bilim Dalı: Belirtilmemiş.
  13. Sayfa Sayısı: Belirtilmemiş.

Özet

oz Rhizopus oryzae KÜFÜNDEN p-l,4-ENDOKSİLANAZ ENZİMİNİN KISMEN SAFLAŞTIRMASI VE KARAKTERİZE EDİLMESİ Güvenç, Ferda Yüksek Lisans, Biyoteknoloji Bölümü Tez Yöneticisi: Doç.Dr. Ufak Bakır Yardımcı Tez Yöneticisi: Prof. Dr. Tülin Güray Ocak 2000, 73 sayfa Ksilan, bitki hücre duvarlarında bulunan hemiselülozun önemli bir bileşeni olup bitkilerin kuru ağırlığının %35'ini oluşturmaktadır ve birçok yararlı ürünün hazırlanmasında substrat olarak kullanılabilen, yenilenebilir biyokütlenin önemli bir kaynağını temsil etmektedir. Ksilanaz kompleksinin en önemli bileşeni olan P-l,4-Endoksilanaz (P-l,4-D-ksilan ksilanohidrolaz; EC 3.2.1.8), P-l,4-D-ksilanı ksilooligosakkaritlerine ve ksiloza parçalayan hidrolitik bir enzimdir. Ksilanaz enzimi, Bacillus, Clostridium, Streptomyces, TC YÜKSEKÖĞRETİM KÜRÜLSJAspergillus, Trichoderma ve Penicillium gibi birçok değişik mikroorganizmadan izole edilmiştir. Bu çalışmada, P-l,4-endoksilanaz enzimi ipliksi bir küf olan R. oryzae (ATCC 9363) susundan ilk kez kısmen saflaştırılmış ve biyokimyasal olarak kısmen karakterize edilmiştir. Enzim, amonyum sülfat çöktürme tekniği ve iyon değiştirici filtre kullanılarak kısmen saflaştırılmış ve daha sonra enzimin biyokimyasal karakterizasyon çalışmaları yapılmıştır. P-1,4- endoksilanaz %40-75 amonyum sülfat fraksiyonunda çöktürülmüş ve bu basamakta 2-3 kat saflaşma elde edilmiştir. Fraksiyon daha sonra (Sartorius S5F) kuvvetli katyon-değiştirici filtreye uygulanmış ve saflaştırma yaklaşık 54 kata yükselmiştir. Enzim aktivitesi için optimum pH ve sıcaklık, sırasıyla 4.5 ve 55 °C olarak bulunmuştur, ve enzim 65 °C'de 20 dakika tutulduğunda aktivitesinin % 50'sinden daha fazlasını kaybetmiştir. p-l,4-Endoksilanaz enzimi, Michaelis-Menten tipi kinetiğe uymaktadır ve Lineweaver-Burk grafiği kullanılarak Km and Vmax değerleri sırasıyla 18.5 mg ksilan/ml and 90 u,mole ksiloz/min-mg protein olarak hesaplanmıştır. Kısmen saflaştırılmış p- 1,4-endoksilanaz enziminin moleküler ağırlığının, %12 SDS-poliakrilamit jel elektroforezi kullanılarak 40,000-45,000 Da civarında olduğu tahmin edilmektir.

Özet (Çeviri)

ABSTRACT PARTIAL PURIFICATION AND CHARACTERIZATION OF P-l,4-ENDOXYLANASE FROM Rhizopus oryzae Güvenç, Ferda M.S., Department of Biotechnology Supervisor : Assoc. Prof. Dr. Ufuk Bakır Co-supervisor : Prof. Dr. Tülin Güray January 2000, 73 pages Xylan is the major component of hemicellulose of plant cell walls and constitutes up to 35% of the total dry weight of higher plants. It represents a significant resource of renewable biomass which can be utilized as a substrate for the preparation of many useful products. P-1,4- Endoxylanase (P-l,4-D-xylan xylanohydrolase; EC 3.2.1.8), the main component of a xylanase complex, is a hydrolytic enzyme that catalyzes the breakdown of P-l,4-D-xylan to xylooligosaccharides and xylose. It has been misolated from several kind of microorganisms including Bacillus, Clostridium, Streptomyces, Aspergillus, Trichoderma and Penicillium. In this study, P-l,4-endoxylanase was partially purified and characterized for the first time from the filamentous fungi R. oryzae ATCC 9363. P-l,4-Endoxylanase has been purified partially by using ammonium sulfate fractionation and an ion-exchange filter and then biochemical characterization studies of the enzyme were partially performed. (3-1,4- Endoxylanase was precipitated between 40-75% ammonium sulfate saturation and approximately 2-3 fold purification was achieved at this step. The precipitate was then applied to a (Sartorius S5F) strong cation- exchanger and the purification fold was increased to approximately 54. Optimal pH and temperature of the enzyme activity were determined as pH 4.5 and 55 °C, respectively, and more than 50% of its activity was lost when incubated at 65 °C for 20 minutes. P-l,4-Endoxylanase obeys Michaelis- Menten type kinetics and the Km and Vmax values were calculated as 18.5 mg xylan/ml and 90 umole xylose/min-mg protein respectively, by plotting Lineweaver-Burk plot. The molecular weight of partially purified 1,4~P- endoxylanase was estimated as around 40,000-45,000 Da by using 12% SDS-polyacrylamide gel electrophoresis.

Benzer Tezler

  1. Tez No

    17609

    Ratlarda sentetik seks steroidlerinin lipid metabolizması üzerine etkileri

    Başlık çevirisi yok

    KADER KÖSE

    Doktora

    Türkçe

    Türkçe

    1991

    BiyokimyaErciyes Üniversitesi

    Biyoloji Ana Bilim Dalı

    PROF.DR. PAKİZE DOĞAN

  2. Tez No

    38638

    Partial purification and biochemical characterization of B-Lactamase from penicillin G resistant strains of streeptococcus thermophilus

    Penisillin G'ye dayanıklı streptococcus thermophilus susundan elde edilen B-Laktamazin kısmi saflaştırılması ve biyokimyasal karakterizasyonu

    LAURA-CRİSTİNA CHIRICA

    Yüksek Lisans

    İngilizce

    İngilizce

    1995

    KimyaOrta Doğu Teknik Üniversitesi

    PROF.DR. FARUK BOZOĞLU

  3. Tez No

    28303

    Partial purification and characterization of beta-galactosidase from streptococcus thermophilus strain RSKK 667

    Başlık çevirisi yok

    RESSA REJAEE

    Yüksek Lisans

    İngilizce

    İngilizce

    1993

    BiyolojiOrta Doğu Teknik Üniversitesi

    Biyoloji Ana Bilim Dalı

    PROF. DR. UFUK GÜNDÜZ

  4. Tez No

    28248

    Partial purification and characterization of sheep liver xanthine oxidase

    Başlık çevirisi yok

    HAKAN GÖNÜL

    Yüksek Lisans

    İngilizce

    İngilizce

    1993

    BiyolojiOrta Doğu Teknik Üniversitesi

    Biyoloji Ana Bilim Dalı

    DOÇ. DR. MESUDE İŞCAN

  5. Tez No

    76009

    Partial purification and characterization of NADH-cytochrame b5 reductase from mullet liver microsomes

    NADH-sitokrom b5 redüktaz enziminin kefal karaciğer mikroorganizmalarından kısmi olarak saflaştırılması ve karakterizasyonu

    ZAHİDE KABAKLAR

    Yüksek Lisans

    İngilizce

    İngilizce

    1998

    BiyokimyaOrta Doğu Teknik Üniversitesi

    Biyokimya Ana Bilim Dalı

    PROF. DR. EMEL ARINÇ

Geri Dön