Transferrin izoformları analizinde elektroforez ve sıvı kromatografi yöntemlerinin karşılaştırılması
Comparision of electrophoresis and liquid chromatography in analysis of transferrin isoforms
- Tez No: 534224
- Danışmanlar: DOÇ. DR. ASLI PINAR
- Tez Türü: Tıpta Uzmanlık
- Konular: Uyuşturucu Alışkanlığı ve Alkolizm, Biyokimya, Drug Addiction and Alcoholism, Biochemistry
- Anahtar Kelimeler: Transferrin izoform analizi, Kapiller elektroforez, HPLC, İnterferens, Monoklonal bant, Transferrin isoform analysis, Capillary electrophoresis, HPLC, Interference, Monoclonal Band
- Yıl: 2017
- Dil: Türkçe
- Üniversite: Hacettepe Üniversitesi
- Enstitü: Tıp Fakültesi
- Ana Bilim Dalı: Tıbbi Biyokimya Ana Bilim Dalı
- Bilim Dalı: Belirtilmemiş.
- Sayfa Sayısı: Belirtilmemiş.
Özet
Alyakut A., Transferrin izoformlarının analizinde elektroforez ve sıvı kromatografisi yöntemlerinin karşılaştırılması, Hacettepe Üniversitesi Tıp Fakültesi, Tıbbi Biyokimya, Uzmanlık tezi, 2017, Ankara. Transferrin (Tf), siyalik asit sayısına göre birçok izoformu bulunan bir serum glikoproteinidir. Tf izoformlarındaki patern değişiklikleri konjenital glikozilasyon defektlerinin tanısında kullanılmaktadır. Bu amaçla izoelektrik odaklama (İEO) elektroforezi, yüksek performanslı sıvı kromatografisi (HPLC) ve kapiller zon elektroforez (CE) yöntemleri ile Tf izoformları değerlendirilmektedir. Çalışma, Hacettepe Üniversitesi Hastaneleri Merkez Laboratuvarında Mayıs 2015-Mayıs 2016 tarihleri arasında Konjenital glikozilasyon sendromu (CDG) taraması amacıyla kabul edilen hasta numuneleri ile gerçekleştirildi. Çalışmamızda merkez laboratuvarda rutin analizlerde kullanılan 1. CE sistemi (Sebia 2 Capillarys™ Sebia, France), 2. CE sistemi (Helena Biosciences V8® E-class analizörü; Helena Biosciences Europe, UK) ve HPLC (CDT test kiti UV/VIS-FAST EUREKA reagent / Shimadzu Europe) sistemleri karşılaştırıldı. Her bir sistemin gün içi ve günler arası varyasyonları hesaplanarak karşılaştırıldı. Sistemler Tf izoformları analiz performansları ve çeşitli interferanslar (hemoliz, lipemi, bilirübin ve betada ilerleyen monoklonal pik) yönünden karşılaştırıldı. Her üç sistemin varyasyon katsayısı (%CV) değerleri karşılaştırıldığında gün içi ve günler arası varyasyon çalışmasında; disialo-Tf için en düşük değerler HPLC sisteminde diğer izoformlar için 1.CE sisteminde görüldü. Rutin Tf izoformları analiz karşılaştırmasında toplam 36 serum numunesi çalışıldı. 1.CE sistemi ile 36, 2.CE sistemi ile 29, HPLC sistemi ile de 35 numune değerlendirildi. Üç sistemin sınıf içi korelasyon analizi sonucunda yöntemler arasında uyum saptanmadı. Sistemler ikişerli sınıf içi korelasyon analizi ile karşılaştırıldığında en kabul edilebilir sonucun trisiyalo-Tf ölçümünde 1.CE ve 2.CE sistemleri arasında olduğu görüldü. Sistemler arasında her bir Tf izoformu için yapılan Bland-Altman analizlerinde disiyalo-Tf için sonuçlar uyumlu bulundu. Trisiyalo-Tf için sonuçların kabul edilebilir sınırlar içinde (<%10) ancak, 2. CE ve HPLC sisteminde artan konsantrasyonlarda negatif yönde bias gösterdiği saptandı. Tetrasiyalo-Tf'de sistemler arasında farklılığın arttığı ancak kabul edilebilir sınırlar içinde olduğu, pentasiyalo-Tf için arasındaki uyumun bozulduğu görüldü. Hemoglobin (Hb) interferansının özellikle disiyalo-Tf üzerinde negatif yönde etkisi saptandı. Transferrin izoform analizlerinde Hb'nin 125 mg/dL düzeylerinden itibaren hemolizin kabul edilmemesi gerektiği sonucuna varıldı. Hemolizli, lipemik ve bilirübinli numunelerden en az etkilenen sistemin 1. CE sistemi olduğu belirlendi. Beta bölgesinde ilerleyen monoklonal piklerin Tf izoformları analizine etkisi değerlendirildiğinde HPLC sisteminin genel olarak etkilenmediği saptandı. Buna ek olarak, HPLC sisteminde gözlenen az sayıda monoklonal pik interferansının immün eksiltme işlemi ile giderildiği saptandı. CDG şüpheli olarak saptanan hasta numuneleri HPLC ve 1. CE sistemlerinde uyumlu Tf izoform paternleri gösterdiği saptandı. Tf izoformları analizinde iyi bir performans elde edilebilmesi, kullanılan yönteme olduğu kadar hasta numunesinin bileşenlerine de bağlıdır. Bu nedenle yöntemi interfere eden etmenler tam olarak belirlenmelidir. Kullanılan analiz sisteminin bu değişkenlere verdiği yanıt bilinirse doğru sonuç elde etmek mümkün olacaktır.
Özet (Çeviri)
Alyakut A, Comparision of electrophoresis and liquid chromatography in analysis of transferrin isoforms, Hacettepe University Faculty of Medicine, Thesis in Medical Biochemistry, Ankara 2017. Transferrin (Tf) , is a serum glycoprotein with many isoforms based on number of sialic acid residues. Changes in Tf isoform patterns are used in diagnosis of congenital glycosylation defects. For this purpose, isoelectric focusing (IEF) electrophoresis, high performance liquid chromotography (HPLC) and capillary zone electrophoresis (CE) methods are used to evaluate Tf izoforms. The study was carried out in the Hacettepe University Hospitals Centeral Laboratory between May 2015- May 2016 with patient samples accepted for congenital disorders of glycosylation (CDG) screening. 1.CE system (Sebia 2 Capillarys™ Sebia, France) which is used in routine analyzes in the central laboratory was compared with 2. CE system (Helena Biosciences V8® E-class analyzer; Helena Biosciences Europe, UK) and HPLC sysem (CDT test kit UV/VISFAST EUREKA reagent / Shimadzu Europe). Intra-day and between-days variations were calculated and compared for each system. Systems were compared according to Tf isoform analysis performances and various interferences (hemolysis, lipemia, bilirubin, and beta migrating monoclonal components). When coefficient of variation (%CV) values of three systems were compared for each isoform, lowest value for disialo-Tf was found in HPLC system, for the other isoforms in 1.CE system. In comparison of routine Tf isoforms analysis, totally 36 serum samples were studied and 36 samples with 1.CE system, 29 samples with 2.CE system, 35 samples with HPLC system were analyzed. No accordance was detected in intra-class correlation analysis of three systems. When the three systems were compared by double pairs intra-class correlation analysis, the most acceptable result in measurement of threesialo-Tf measurement was found between 1.CE and 2.CE systems. According to Bland- Altman analysis for each Tf isoforms, results were compatible for disialo-Tf between the systems. The results for threesialo-Tf were found to be within the acceptable limits (<%10) but negative bias was detected for increasing concentrations in 2.CE and HPLC systems. For tetrasialo-Tf analysis, it was observed that the difference between the systems was within the acceptable limits, but for pentasialo-Tf analysis compatibility was impaired. Negative effect of hemoglobin (Hb) interference was observed in disialo-Tf analysis. It was concluded that Hb levels greater than 125 mg/dL were not acceptable in transferrin isoforms analysis. On the other hand it was determined that the system which is at minimally effected by hemolysed, lipemic and icteric samples is 1. CE system. When the effect of monoclonal peaks migrating in beta region was evaluated, it was observed that the HPLC system was generally uneffected. In addition, it was determined that a small number of monoclonal peak interferences observed in the HPLC system were eliminated by immune-substraction process. CDG suspected patient samples showed consistent Tf isoform patterns in HPLC and 1.CE systems. Achievement of a good performance in Tf isoform analysis, is based on patient sample constituents as well as the technique used. For this reason, all elements interfering with the method should be detected. Results will be correct, if the responses of the analysis systems are elucidated to these variables.
Benzer Tezler
- Çocukluk çağında malnutrisyonun glikozile transferrin izoformlarının dağılımına etkisi
The effect of malnutrition on transferin isoforms pattern in childhood
ÖZNUR BİLEN
Tıpta Uzmanlık
Türkçe
2010
BiyokimyaDokuz Eylül ÜniversitesiTıbbi Biyokimya Ana Bilim Dalı
PROF. DR. CANAN ÇOKER
- The ubiquitin/proteasome system related role of Bag-1L in breast cancer
Bag-1L'in ubikuitin/proteazom sisteminde rolünün meme kanserinde incelenmesi
SEVİLAY ACAR
Yüksek Lisans
İngilizce
2018
Genetikİstanbul Teknik ÜniversitesiMoleküler Biyoloji-Genetik ve Biyoteknoloji Ana Bilim Dalı (disiplinlerarası)
DOÇ. DR. GİZEM DİNLER DOĞANAY
- Sortaz A enzimine karşı inhibitör peptitlerin geliştirilmesi
Developing of inhibitor peptides against sortase A enzyme
MÜCAHİDE KÖKSAL
Yüksek Lisans
Türkçe
2017
Gıda MühendisliğiHacettepe ÜniversitesiGıda Mühendisliği Ana Bilim Dalı
YRD. DOÇ. FAHRİYE CEYDA DUDAK ŞEKER
- İnsan immünoglobülin G'sine karşı monoklonal antikor elde edilmesi
Development of monoclonal antibodies specific to human immunoglobuling G
ASLI ÜNSAL
Yüksek Lisans
Türkçe
2005
BiyoteknolojiAnkara ÜniversitesiBiyoteknoloji Ana Bilim Dalı (disiplinlerarası)
DOÇ. DR. ÖZLEM UĞUR
- Atheroskleroz patogenezinde transferrin desialilasyonu ve sialidaz aktivitesinin incelenmesi
Transferrin desialylation and sialidase activity in the pathogenesis of atherosclerosis
ZEYNEP BANU GÜNGÖR