Pichia pastoris kullanılarak rekombinant anti troponin I antikor parçasının üretimi ve kısmi karakterizasyonu
Recombinant expression and partial charachterication of anti cardiac troponin ScFv in Pichia pastoris
- Tez No: 420568
- Danışmanlar: PROF. DR. GAYE ÖNGEN
- Tez Türü: Doktora
- Konular: Biyomühendislik, Bioengineering
- Anahtar Kelimeler: Antikorlar-monoklonal, DNA-rekombinant, Katlanmış proteinler, Teşhis, Antibodies-monoclonal, DNA-recombinant, Folded proteins, Diagnosis
- Yıl: 2016
- Dil: Türkçe
- Üniversite: Ege Üniversitesi
- Enstitü: Fen Bilimleri Enstitüsü
- Ana Bilim Dalı: Biyomühendislik Ana Bilim Dalı
- Bilim Dalı: Belirtilmemiş.
- Sayfa Sayısı: Belirtilmemiş.
Özet
Kalp ve damar hastalıkları %30 ile tüm ölüm sebepleri arasında ilk sırada yer almaktadır. Kalp krizinin teşhis edilmesi, müdahale imkânını ve hastanın hayatta kalma şansını çok büyük oranda artırmaktadır. İmmünoloji temelli hızlı teşhis test kitleri bu noktada önemli bir role sahiptir. Bu test kitleri akut miyokardiyal enfarktüsün tanısı için kardiyak biyomarkörlerin antikorlarından faydalanır. Kardiyak troponin I molekülünün kandaki varlığının tespit edilmesi için yararlanılan anti-cTnI antikoru ağırlıkla Çin Hemstır Yumurtası (Chinese Hamster Ovary – CHO) hücrelerinde rekombinant olarak ve/veya kısmen fare ve tavşan gibi konukçu hayvanlarda in vivo üretilmektedir. Ancak bu yöntemle üretilen antikorlar arasında görülen heterojenite, tanı testi kitlerinin oluşturulmasında sorunlar çıkarmaktadır. İyi tanımlanmış bir genetik yapıya sahip olması, güçlü ve teşvik edilebilir bir promotor ile rekombinant protein ifadesi üzerinde yüksek seviyede kontrol sağlaması, ökaryötik sistem olarak posttranslasyonel modifikasyonları yapabilmesi gibi önemli avantajlara sahip Pichia pastoris ekspresyon sistemini ekonomik ve etkin bir rekombinant protein üretim aracı kılmaktadır. Bu tez kapsamında anti-cTnI antikorunun hafif zincir değişken bölgesi Pichia pastoris ekspresyon sisteminde bir fragment olarak 12,3 mg/l konsantrasyonda biyoreaktörde üretilmiş ve immobilize metal afinitesi kromatografisi yöntemi ile saflaştırılmıştır. Troponin I proteini kullanılarak yapılan tespit çalışmasında pozitif sonuç alınmıştır. Altın nanopartikül ile konjuge ve konjuge olmayan rekombinant antikor fragmentlerinin troponin I proteinini tespit etme yetenekleri arasında belirgin bir fark gözlenmemiştir. Yapılan bu çalışma ile hızlı tanı kitlerinde kullanılmaya aday bir anti-cTnI antikor fragmentinin üretimi gerçekleştirilmiştir. Ulaşılan literatüre göre Pichia pastoris konukçu organizması kullanılarak rekombinant anti-kardiyak troponin I antikor fragmentinin ScFv formunda üretimi ve saflaştırılması ilk defa gerçekleştirilmiştir. Elde edilen veriler bu üretim sisteminin diğer tanı kitlerinde kullanılan antikorların da bu yöntemle üretilip kullanılabilmesine ilişkin bilgi kaynağı oluşturmuştur.
Özet (Çeviri)
Heart and vascular diseases are one of the major cause of all deaths around the world with 30% incidence. Therefore, detection of myocardial infarction has a great importance in responding to emergence cases for increasing the survival rate. Immune dependent quick diagnostic kits have a key role in this point. Anti-cTnI antibody is mostly produced in recombinant Chinese Hamster Ovary (CHO) cell lines and partly in host animals such as mouse and rabbit. However, heterogeneity of antibodies produced with these seras exhibit some disadvantageous difficulties for development of diagnostic test kits. In this study anti-cardiac troponin I (anti-cTnI) antibody, which is one of the best diagnostic antibodies used in myocardial infract diagnosis overall the world, was recombinantly expressed as an antibody fragment (hypervariable region) in Pichia pastoris at a concentration of 12.3 mg/l. Recombinant ScFv was purified using immobilized metal ion affinity chromatography. Its aplicability in these diagnostic kits before and after conjugation to gold nanoparticles was evaluated by enzyme linked immunosorbent assay. By utilization of Pichia expression system, it is intended to reduce variations (antibody heterogeneity) among whole antibodies. According to the literature, this is the first study where a recombinant anti-troponin I antibody fragment has been expressed to use in diagnostic kit development. The data obtained serve a guideway for a technology aiming to produce similar antibody fragments for diagnostic purposes.
Benzer Tezler
- Pichia pastoris mayasında rekombinant tibet öküzü kimozini ekspresyonu ve karakterizasyonu
Expression and characterization of recombinant chymosin in Pichia pastoris
ÖZGE ADIGÜZEL
Yüksek Lisans
Türkçe
2016
BiyoteknolojiAkdeniz ÜniversitesiGıda Mühendisliği Ana Bilim Dalı
PROF. DR. MEHMET İNAN
- Pichia pastoris mayalarından rekombinant ekspanzin üretiminin optimizasyonu
Optimization of recombinant expansin production from Pichia pastoris yeast
ASLİYE KARAASLAN
Doktora
Türkçe
2017
BiyoteknolojiHarran ÜniversitesiGıda Mühendisliği Ana Bilim Dalı
DOÇ. DR. HASAN VARDİN
- Pichia pastoris'te rekombinant insan dornaz alfa üretimi
Production of recombinant human dornase alfa in Pichia pastoris
AYÇA URAS
Yüksek Lisans
Türkçe
2023
Gıda MühendisliğiAkdeniz ÜniversitesiGıda Mühendisliği Ana Bilim Dalı
PROF. DR. MEHMET İNAN
- Pichia pastoris'te rekombinant laktaz enzimi üretimi
Recombinant lactase enzyme production in pichia pastoris
NESLİHAN CEYLAN
Yüksek Lisans
Türkçe
2025
BiyoteknolojiAkdeniz ÜniversitesiGıda Mühendisliği Ana Bilim Dalı
PROF. DR. MEHMET İNAN
- Pichia pastoris mayası ile rekombinant ksilanaz enzim üretiminin optimizasyonu
Pichia pastoris mayasi ile rekombinant ksilanaz enzim üretiminin optimizasyonu
HİLAL YILDIZ KURAL
Yüksek Lisans
Türkçe
2015
Gıda MühendisliğiAkdeniz ÜniversitesiGıda Mühendisliği Ana Bilim Dalı
PROF. DR. MEHMET İNAN