Cloning, expression and purification of recombinant elongation factor ts from hyperthermophilic bacteria geobacillus anatolicus
Hipertermofilik geobacillus anatolicus bakterilerinden rekombinant elongasyon faktörü Ts'nin klonlanması, ekspresyonu ve saflaştırılması
- Tez No: 181238
- Danışmanlar: PROF. DR. NEŞE BİLGİN
- Tez Türü: Yüksek Lisans
- Konular: Biyomühendislik, Mikrobiyoloji, Bioengineering, Microbiology
- Anahtar Kelimeler: Belirtilmemiş.
- Yıl: 2006
- Dil: İngilizce
- Üniversite: Boğaziçi Üniversitesi
- Enstitü: Fen Bilimleri Enstitüsü
- Ana Bilim Dalı: Moleküler Biyoloji ve Genetik Ana Bilim Dalı
- Bilim Dalı: Belirtilmemiş.
- Sayfa Sayısı: Belirtilmemiş.
Özet
Geobacillus anatolicus elongasyon faktörü Ts His kuyruklu bir rekombinant proteinolarak Escherichia coli içerisinde klonlanmış, ekpresyonu yapılmış ve saflaştırılmıştır. Buçalışmanın ilk adımı Geobacillus anatolicus tsf geninin nükleik asit dizisininbelirlenmesidir. Bu amaç için, Geobacillus anatolicus'a filogenetik olarak en yakınbakterilerin tsf ve tsf'ye komşu genleri kullanılarak tsf genini taşıyan kromozomal bölgeninçoğaltılması amacıyla uygun oligonükleotit primerleri tasarlanmıştır. Daha sonra, bu dizibilgisi kullanılarak, C terminal bölgesinde 6 ek Histidin amino asiti olan tam tsf geniniuygun bir ekspresyon vektörüne klonlamak amacıyla uygun primerler tasarlanmıştır. Buekspresyon vektörü, proteinin Escherichia coli içinde yüksek miktarda ekspresyonununsağlanması için kullanılmış ve proteinin saflaştırılması yapılmıştır. Rekombinant proteinihomojen bir şekilde saflaştırabilmek amacıyla Ni-afinite kromatografisi kullanılmıştır.Geobacillus anatolicus EF-Ts proteininin Escherichia coli EF-Tu proteinine bağlanmadatam olarak aktif olduğu bulunmuştur.
Özet (Çeviri)
Elongation factor EF-Ts from Geobacillus anatolicus was cloned, expressed andpurifed as a His-tagged recombinant protein in Escherichia coli. The first step in this studywas the determination of the nucleic acid sequence of the tsf gene of Geobacillusanatolicus. In order to achive this first goal, sequence data for the tsf gene and theneighbouring genes of the the bacteria phylogenetically related to Geobacillus anatolicuswere used to design the appropriate oligonucleotide primers to amplify the chromosomalregion carrying the tsf gene. This sequence information was then used to design primers toclone the complete tsf gene including 6 additional histidine residues at its C-terminal intoan appropriate expression vector. This vector was used to express and purify the protein inhigh quantities in Escherichia coli. Ni-affinity chromotography was then used to purify therecombinant protein to homogeneity. Geobacillus anatolicus EF-Ts was found out to befully active in binding Escherichia coli EF-Tu.
Benzer Tezler
- Cloning, expression and purification of recombinant elongation factor tu from hyperthermophilic bacteria geobacillus anatolicus
Hipertermofilik geobacillus anatolicus bakterilerinden rekombinant elongasyon faktörü tu'nun klonlanması, ekspresyonu ve saflaştırılması
BARIŞ AKALIN
Yüksek Lisans
İngilizce
2006
BiyolojiBoğaziçi ÜniversitesiMoleküler Biyoloji ve Genetik Ana Bilim Dalı
PROF. DR. NEŞE BİLGİN
- Cloning, expression and purification of the recombinant DNA polymerase I from the hyperthermophilic bacteria Geobacillus anatolicus
Hipertermofilik Geobacillus anatolicus bakterilerinde rekombinant DNA polimeraz I'in klonlanması, ekspresyonu ve saflaştırılması
MELİKE ÇAĞLAYAN
Yüksek Lisans
İngilizce
2005
Tıbbi BiyolojiBoğaziçi ÜniversitesiMoleküler Biyoloji ve Genetik Ana Bilim Dalı
PROF. NEŞE BİLGİN
- Hepatit C virusunun“core”proteinin prokaryotik hücrede ifade ettirilip saflaştırılması
The expression and purification of hepatitis C virus core protein in prokaryotic cells
ERTAN ÇAKMAK
Yüksek Lisans
Türkçe
2007
MikrobiyolojiDokuz Eylül ÜniversitesiMikrobiyoloji ve Klinik Mikrobiyoloji Ana Bilim Dalı
PROF.DR. Y. HAKAN ABACIOĞLU
Y.DOÇ.DR. İ. MEHMET ALİ ÖKTEM
- Cloning of Taql endonuclease gene into E.coli and its expression
Taql endonükleaz geninin E.coli'ye klonlanması ve ekspresyonu
İZZET ENÜNLÜ
- Cloning of thermostable glucose isomerase of thermus thermophilus in escherichia coli
Thermus themophilus'ün ısıl kararlı glikoz izomerazının escherichia colı'ye klonlanması
BERNA SARIYAR