Isolation and immunologic characterization of theta class glutathione S-transferase GSTT2-2 from bovine liver
Sığır karaciğerindeki teta-sınıfı glutatyon S-transferaz: GSTT2-2`in izolasyonu ve immünolojik karakterizasyonu
- Tez No: 153354
- Danışmanlar: DOÇ. DR. NURSEN ÇORUH, PROF. DR. MESUDE İŞCAN
- Tez Türü: Doktora
- Konular: Biyokimya, Biochemistry
- Anahtar Kelimeler: Glutatyon S-transferazIer, Teta sınıfı GST'ler, Saflaştırma, Western Blot, Karakterizasyon, Glutathione-S-transferases, Theta class GSTs, Purification, Western blotting, characterization
- Yıl: 2004
- Dil: İngilizce
- Üniversite: Orta Doğu Teknik Üniversitesi
- Enstitü: Fen Bilimleri Enstitüsü
- Ana Bilim Dalı: Biyokimya Ana Bilim Dalı
- Bilim Dalı: Belirtilmemiş.
- Sayfa Sayısı: Belirtilmemiş.
Özet
Glutatyon-S-transferazlar (GST) elektrofilik yapıdaki ksenobiyotikler ve bazı endojenlerin detoksifikasyonlannda rol oynayan aym zamanda reaktif oksijen metabolitlerinin nükleofil tutan tripeptid yapısındaki glutatyona konjugasyonunu sağlayarak vücudu koruyan bir enzim grubudur. Ökaryotlarda ve prokaryotlarda, sitoplazmada, mikrozomlarda ve mitokondride bulunurlar. Sitozolik GST 1er altı grupta toplanırlar; alfa, mu, pi, sigma, zeta ve teta Diğer GST'Ierle karşılaştırıldığında, teta sınıfı GST'lerin izolasyonuy ve karakterizasyonu oldukça zordur. İnsanda; GSTTl-1 ve GSTT2-2 olmak üzere iki, siçanda rGSTTl-1, rGSTT2-2 ve 13-13 olmak üzevvre üç, ve fare de bir tane teta sınıfı GST' leri tanımlanmıştır. Bu çalışmada, 1-MS ' a karşı yüksek aktivite içeren teta sınıfı GSTT2-2 izoziminin sığır karaciğerinden %3 lük ürün ve yine 3 kat saf olarak izolasyonu ve saflaştırılması gerçekleştirilmiştir. Saflaştırma protokolü 1-MS' a karşı yüksek saflaştırılması gerçekleştirilmiştir. Saflaştırma protokolü 1-MS' a karşı yüksek aktiviteye sahip sitozolik fraksiyonun sırasıyla DEAE anyon değişim, S- hexylglutatyon afmite, Oranj A ve kromatofokuslama kolonlanna uygulanmasıyla elde edilmiş, protein miktarı ve 1-MS' a karşı enzim aktivitesi son kolondan sonra hızla düşmüştür. Saflaştınlan numune sadece 1-MS'a karşı 77 nmole/min/mg değerinde aktivite göstermiştir. Saflaştınlan sığır karaciğeri GSTT2-2 izoziminin SDS-PAGE ile molekül ağırlığı (Mr) 28,200 olarak bulunmuş bu sonuç Western Blot sonucu ile de desteklenmiştir. Saflaştınlan numune diğer kolon fraksiyonlan ile beraber anti GSTT2-2, antiGST alfa, antiGST mu ve antiGST pi antikorlan ile test edilmiştir. Enzim aktivitesleri 1-MS, CDNB ve 4-NBC substartlan kullanılarak tayin edilmiştir.
Özet (Çeviri)
The glutathione-S-transferases (GSTs) (EC.2.5.1.18) are enzymes that participate in cellular detoxification of endogenous as well as foreign electrophilic compounds, function in the cellular detoxification systems and are evolved to protect cells against reactive oxygen metabolites by conjugating the reactive molecules to the nucleophile scavenging tripeptide glutathione (GSH, y-glu-cys-gly). The GSTs are found in all eukaryotes and prokaryotic systems, in the cytoplasm, on the microsomes, and in the mitochondria Cytosolic GSTs have been grouped into seven distinct classes as: alpha (a), mu (u,), pi (7t), sigma (a), omega, theta (9) and zeta (8). In comparison with other GSTs, class theta enzymes have proven difficult to isolate and characterize. Two distinct theta GSTs have been identified in man, GSTTl-1 and GSTT2-2 three in the rat rGSTl-1, rGSTT2-2 and 13-13 and one in the mouse, this study, a class theta GST (GSTT2-2), with high activity towards 1-MS was isolated and purified from bovine liver in 3% yield with a purification factor of 3 -fold. The purification protocol included a sequential DEAE cellulose anion exchanger liquid chromatography column, S-hexylglutathione agarose affinity column, dye binding orange A and chromatofocusing columns. The enzyme activity and protein content decreased rapidly after the last step of purification. The purified GSTT2-2 showed significant activity only towards 1-MS as 77 nmole/min/mg. The GSTT2-2 purified from bovine liver had a molecular weigth (Mr) value of about 28,200 which was also confirmed by Western Blott Analysis. The purified farctions of GSTT2-2 with other kolon farctions were tested with anti GSTT2-2, antiGST alfa, antiGST mu and antiGST pi antibodies. The enzyme activities towards CDNB, 4- nitrobenzylchloride (NBC) and 1-menapthyl sulfate were measured as described by Habig and Jacoby.
Benzer Tezler
- Cytochrome P4502B-type protein from feral leaping mullet (liza saliens) liver microsomes: Its isolation and biochemical and immunological characterization
Doğal kefal balığı (marvaki) karaciğerinden sitokrom P4502B-tipi protein: Saflaştırılması, biyokimyasal ve immunolojik karakterizasyonu
AZRA BOZCAARMUTLU
Doktora
İngilizce
2002
BiyokimyaOrta Doğu Teknik ÜniversitesiBiyokimya Ana Bilim Dalı
PROF.DR. EMEL ARINÇ
- Tükürük müsinleri MG1 ve MG2'nin izolasyonu ve müsin-bağlanan oral streptococ adezinlerinin tespiti ve tanımlanması
The Identification and characterization of salivary mucin-binding adhesins from oral streptococci
MEHMET KESİMER
- Erzurum ilinde ilköğretim çağı çocuklarındaki atopik dermatit insidansının araştırılması ve scorad indekslemesi
Başlık çevirisi yok
CİHANGİR ALİAĞAOĞLU
- Pankreas adacık beta hücrelerinin flow sitometrik ve immünomanyetik izolasyonu
Flow cytmetric and immunomagnetic isolation of pancreatic islet beta cell
BERRİN OĞUZHAN
Doktora
Türkçe
2004
Allerji ve İmmünolojiİstanbul Üniversitesiİmmünoloji Ana Bilim Dalı
PROF.DR. TEMEL YILMAZ
- Arı venom spesifik interferon-Y interlokin-4 ve interlokin-10 salgılayan T hücreleri ve periferik tolerans
Bee venom specific interferon-Y, interleukin-4 and interleukin-10 secreting T cells and peripheric tolerance
MÜBECCEL AKDİŞ
Doktora
Türkçe
2003
Allerji ve İmmünolojiİstanbul Üniversitesiİmmünoloji Ana Bilim Dalı
DOÇ. DR. GÜNNUR DENİZ