İnsan plasental glutatiyon S-transferazının saflaştırılması ve bazı özellikleri
Başlık çevirisi mevcut değil.
- Tez No: 11431
- Danışmanlar: PROF.DR. NAZMİ ÖZER
- Tez Türü: Yüksek Lisans
- Konular: Biyokimya, Biochemistry
- Anahtar Kelimeler: Glütatyon transferaz, Plasenta, İnsan, Glutathione transferase, Placenta, Human
- Yıl: 1990
- Dil: Türkçe
- Üniversite: Hacettepe Üniversitesi
- Enstitü: Sağlık Bilimleri Enstitüsü
- Ana Bilim Dalı: Biyokimya Ana Bilim Dalı
- Bilim Dalı: Belirtilmemiş.
- Sayfa Sayısı: Belirtilmemiş.
Özet
Plasental glutatiyon S-transferaz normal plasentadan PBE94 (iyon değiştirici) ve S-hekzilglutatiyon Sepharose 4B (afinite kolonu) kullanılarak %71 verim ve 35 ünite/mg spesifik aktivite ile saf laştırıldı. Enzim preparatının saflığı; SDS/PAGE, kromatofokuslama ve“Ouchterlony double-diffusion”teknikleri kullanılarak gösterildi. Saflaştırılan enzim SDS/PAGE'de 24.000 daltona karşılık gelen tek bir protein bandı, kromatof okuslamada tek bir zirve (pl 4.82) ve“Ouchterlony double diffusion”plağında tek bir çökelme bandı verdi. Basit ardışık model kullanılarak yapılan“steady-state”kinetik analizinden GSH ve CDNB için enzimin Km değerleri sırasıyla 0.4, 0.8 ve 0.3, 2.0 mM olarak bulundu. Seyreltilmiş ve 37 C'de inköbe edilen enzimin iki fazlı inaktivasyona uğradığı ve inaktivasyonun birinci fazının yarı ömrünün 5 dakika, ikinci fazının yarı ömrünün ise 128 dakika olduğu ve inaktivasyonun seyreltme ortamında GSH veya GSSG varsa engellendiği bulundu. Ancak inaktivasyonun geri çevrilmesi ve çevrilme yüzdesinin bu ajanların ne zaman inkübasyon ortamına eklendiğine bağlı olduğu gözlendi. Nitekim %20 aktivite kaybetmiş enzimde reaktivasyon %100 iken, yaklaşık %60 aktivite kaybetmiş enzimde reaktivasyon %71'de kaldı. Bu sonuçlar dimerik enzimin ardışık tepkime mekanizması ile önce tersinir olarak aktif monomerlere daha sonra bu monomerlerin inaktif forma dönüştüğü şeklinde yorumlandı.
Özet (Çeviri)
Placental glutathione S-transferase was purified from a full-term placenta, using PBE94 anion exchanger and S-hexylglutathione coupled Sepharose 4B affinity columns. The enzyme obtained with 71% yield had a specific activity of 35 units per milligram protein. The purity of the preparation was tested using SDS/PAGE, chromatof ocusing and“Ouchterlony double-diffusion”techniques. The purified placental enzyme gave a single protein band or SDS/PAGE corresponding to 24000 daltons. It also gave a single peak on choromatof ocusing pi 4.82 and a single precipitation line on Ouchterlony double diffusion plate with antibody developed against it. Analysis of the steady-state kinetics, using a simple sequential model for the kinetic data obtained with GSH and CDNB as substrates gave Km values for glutathione (0.4 and 0.8mM) and for CDNB (0.3 and 2.0mM). Incubation of the diluted enzyme at 37°C and pH 6.5 resulted in inactivation (t^/p 5 min) which could be prevented by the addition of GSSG or GSH to the incubation medium. Reversal of inactivation was also observed with these agents. The extent of reactivation was found to depend on the time of addition of GSSG or GSH. An enzyme sample which had lost 20% of its initial activity could be fully reactivated where as at 60min of inactivation reversel could be achieved only to 70% of zero-time activity. The results were interpreted in terms of a consecutive mechanism involving potentially reversible dissociation of the dimeric enzyme to yield active monomers in a rate-limiting step, followed by conversion of the active monomers to an inactive form.
Benzer Tezler
- İnsan plasental kültür ortamlarında, fibroblast hücre büyümesine etki eden faktörlerin analizi
Başlık çevirisi yok
MELTEM ARIKAN(ÇEVİK)
- İnsan plasental alkali fosfatazının kısmen saflaştırılması fizikokimyasal ve kinetik özelliklerinin incelenmesi
Physicochemical and kinetic properties of partially purified human placental alkaline phosphatase
AYTAÇ KESKİEĞE
Tıpta Uzmanlık
Türkçe
1997
BiyokimyaAnkara ÜniversitesiBiyokimya Ana Bilim Dalı
DOÇ. DR. KADİRHAN SUNGUROĞLU
- Serbest estriol ve insan plasental laktojenin riskli gebelerde radyoimmunoassay ile tayinleri ve hormon düzeylerinin biyofiziksel para metrelerle ilişkisi
Başlık çevirisi yok
DURİŞEHVAR ÖZER
Yüksek Lisans
Türkçe
1988
BiyokimyaHacettepe ÜniversitesiAnalitik Kimya Ana Bilim Dalı
DOÇ. DR. AYTEKİN TEMİZER
- Glukoz-6-fosfat dehidrogenaz enziminin insan plasentasından saflaştırılması ve bazı özelliklerinin tanımlanması
Başlık çevirisi yok
YASEMİN AKSOY
- Piruvatkinazın plasentadan kısmi saflaştırılması ve kinetik özellikleri
Başlık çevirisi yok
ŞEBNEM KÖSEBALABAN