Glukoz-6-fosfat dehidrogenaz enziminin insan plasentasından saflaştırılması ve bazı özelliklerinin tanımlanması
Başlık çevirisi mevcut değil.
- Tez No: 24990
- Danışmanlar: PROF.DR. NAZMİ ÖZER
- Tez Türü: Yüksek Lisans
- Konular: Biyokimya, Biochemistry
- Anahtar Kelimeler: Doku ekstreleri, Glükozfosfat dehidrogenaz, Plasenta, Tissue exraction, Glucosephosphate dehydrogenases, Placenta
- Yıl: 1992
- Dil: Türkçe
- Üniversite: Hacettepe Üniversitesi
- Enstitü: Sağlık Bilimleri Enstitüsü
- Ana Bilim Dalı: Biyokimya Ana Bilim Dalı
- Bilim Dalı: Belirtilmemiş.
- Sayfa Sayısı: Belirtilmemiş.
Özet
Plasental Glukoz-6-fosfat Dehidrogenaz plasentadan DEAE- Sepharose (iyon değiştirici) ve 2 *, 5 ' -ADP-Sepharose (afinite kolonu) kullanılarak % 31 verim ve 222 U/nıg proteinlik özgül aktivite ile saflaştırıldı. Enzim aktivite boyamasında ve SDS'li poliakrilamid jel elektroforezinde de tek bant verdi. SDS-PAGE'den altbirim molekül ağırlığı 54000 dalton olarak saptandı. Enzimin kinetik analizinden; G-6-P ve NADP için Km değerleri sırasıyla 40 ve 10-28 uM bulundu. G-6-PD'nin optimum pH'sı 7.8 olarak belirlendi. Enzimin aktivasyon entalpisi 7545 kalori/mol olarak hesaplanırken aktivasyon enerjisinin sıcaklıkla ilişkisinin doğrusal olduğu ve sıcaklık artışına bağlı olarak enzimin molekül yapısında ve buna bağlı olarak aktivitesinde değişiklik olmadığı saptandı. Plasental G-6-PD'ın aktivasyon enerjisi, Ea 8162 kalori/mol, sıcaklık artma faktörü do ise 1.565 olarak bulundu. Hill grafiklemesinden yararlanılarak G-6-PD'ın G-6-P ve NADP için Hill değişmezi, nH 0.84 ve 0.86 bulundu ve enzimin substrat ve koenzimi ile kooperativite göstermediği saptandı. G-6-PD, substrat analogları Gal-6-P'ı % 25, 2-dG-6-P'ı % 2 oranında kullanırken koenzim analoglarından d-ANADP'ı % 71 verimle kullandığı, NAD* yi ise kullanmadığı saptandı. G-6-PD'ı NADPH'nin NADP ile 2,3-DPGA'in de G-6-P'la kompetitif inhibe ettiği ve Ki'lerin sırasıyla 24 uM ve 18 mM olduğu bulundu.
Özet (Çeviri)
Glucose-6-phosphate dehydrogenase < E.C. 1.1.1.49, 0-D- Glucose-6-phosphate:NADP*-oxidoreductase) was purified from human placenta, using DEAE Sepharose CL-6B (exchange) and 2',5'-ADP Sepharose 4B (affinity) columns. The enzyme was obtained with 31 percent yield and had a specific activity of 222 Units per miligram protein. The purified placental glucose-6-phosphate dehydrogenase gave a single activity and protein band on native and SDS/PAGE gels, respectively. The subunit molecular weight. M^. for glucose-6-phosphate dehydrogenase, was found to be 54000 daltons from SDS/PAGE. The Michaelis-Menten constants, Km's, for substrate, glucose-6-phosphate and coenzyme NADP* were 40 and 10-28 pM, respectively. The pH optimum of placental glucose-6- phosphate dehydrogenase was 7.S. Activation enthalpy of the enzyme was calculated as 7545 cal/mole. Activation energy, Em, and temperature increasing coefficient, Qm. of placental glucose-6-phosphate dehydrogenase were obtained as 3162 cal/mole and 1.565, respectively. From Hill plots for glucose-6-phosphate and NADP* the values of 0.84 and 0.86 for Hill constants <nM) were found. Placental glucose-6-phosphate dehydrogenase did not show any cooperativity with its specific substrate, glucose-6-phosphate and coenzyme, NADP*. Substrate analogues, galactose-6-phosphate and 2-deoxyglucose-6- phosphate were used by glucose-6-phosphate dehydrogenase with an efficiency of 25 and 2 percent, respectively. The coenzyme analogue, deamino-NADP* was used with an efficiency of 71 percent, whereas, placental glucose-6-phosphate dehydrogenase did not used NAD* as coenzyme. The Ki values for competitive inhibitors NADPH (with NADP*) and 2. 3-diphosphoglycerate (with glucose-6-phosphate) were found to be 24 pM and IS mM, respectively.
Benzer Tezler
- Bazı ilaçların insan eritrositlerinde bulunan glukoz 6-fosfat dehidrogenaz enzimi üzerine etkilerinin incelenmesi
Investigation of inhibition effects of some drugs on the glucose 6-phosphate dehydrogenase enzyme in human erythrocyte
MEHMET ÇİFTÇİ
- Glukoz-6-fosfat dehidrogenaz eksikliğinin moleküler patolojisinin DNA dizi analizi ile saptanması
The Detection of molecular pathology of glucose-6-phosphate dehydrogenase deficiency with DNA sequence analysis
CEREN ACAR
- Erzurum bölgesi 0,5-6 yaş grubu çocuklarında eritrosit hekzokinaz ve karbonik anhidraz enzimleri için ortalama aktivite değerlerinin belirlenmesi ve bazı ilaçların insan eritrosit hekzokinaz enzimi üzerine etkisinin incelenmesi
Determination of average activity values of hexokinase and carbonic anhidrase enzyme in erythrocytes obtained from 0,5-6 year-old children in the region of Erzurum and investigation the effects of some drugs onhexokinase enzyme in human erythrocytes
FARUK ŞENYAYLA
- Ameliyatlarda kullanılan anestezik maddelerin eritrosit ve lökosit G6PD enzimi üzerine olan etkileri
Başlık çevirisi yok
ERTUĞRUL KAHRAMAN
- Bazı ilaç ve kimyasal maddelerin eritrosit glukoz 6-fosfat dehidrogenaz enzimine in vivo ve in vitro etkilerinin araştırılması
The investigation of in vivo and in vitro effects of some drugs and chemicals on erythrocyte glucose 6-phosphate dehidrogenase enzyme
SAYİT ALTIKAT
