Karaciğer X reseptörlerinin (LXR) hava yolu inflamasyonu ve immün yanıt üzerindeki etkilerinin in vitro araştırılması
In vitro investigation of the effects of liver X receptors (LXRs) on airway inflammation and immune response
- Tez No: 986401
- Danışmanlar: PROF. DR. ÇİĞDEM KEKİK ÇINAR
- Tez Türü: Doktora
- Konular: Tıbbi Biyoloji, Allerji ve İmmünoloji, Genetik, Medical Biology, Allergy and Immunology, Genetics
- Anahtar Kelimeler: Belirtilmemiş.
- Yıl: 2025
- Dil: Türkçe
- Üniversite: İstanbul Üniversitesi
- Enstitü: Sağlık Bilimleri Enstitüsü
- Ana Bilim Dalı: Tıbbi Biyoloji Ana Bilim Dalı
- Bilim Dalı: Tıbbi Biyoloji Bilim Dalı
- Sayfa Sayısı: Belirtilmemiş.
Özet
Astım, epitel bariyer fonksiyonunun bozulması, artmış mukus üretimi ve inflamatuvar sitokinlerin düzensizliği ile karakterize kompleks bir hastalıktır. Bu çalışmada, karaciğer X reseptörlerinin (LXR) hava yolu inflamasyonu üzerindeki düzenleyici rolü, primer insan bronşiyal epitel hücrelerinde (HBEC) oluşturulan TNF-α aracılı inflamasyon modeli kullanılarak araştırılmıştır. Hücrelere TNF-α uygulanarak NF-κB yolağının aktivasyonu sağlanmış; ardından LXR agonistlerinden endojen oksisterol 25-hidroksikolesterol (25-OHC) ve sentetik GW3965'in etkileri değerlendirilmiştir. Çalışma kapsamında hücre canlılığı CCK-8 testi ile, hücre ölümü ise Annexin V/PI tabanlı akım sitometrisi ile analiz edilmiştir. İnflamasyon, lipid metabolizması ve epitel bariyer fonksiyonu ile ilişkili temel genlerin ekspresyonu qRT-PCR ile; sitokin düzeyleri ise ELISA yöntemiyle ölçülmüştür. Hücrelere uygulanan TNF-α'nın düşük ve orta dozları hücre canlılığını büyük ölçüde korurken, yüksek doz sitotoksisiteye sebep olmuştur. Annexin V/PI analizinde orta doz TNF-α'da sınırlı apoptoz, yüksek dozda anlamlı nekroz artışı izlendi. TNF-α, MUC5AC, ICAM-1, NLRP3 ve CASP-1 ekspresyonlarını anlamlı şekilde yükseltti (p <0.05). LXR agonistleri, LXR'e bağlı hedef genlerin (NR1H2, NR1H3 ve ABCA1) ekspresyonunu anlamlı düzeyde artırarak LXR yolağının etkin biçimde aktive olduğunu doğrulamıştır (p <0.001). 25-OHC ve GW3965, TNF-α aracılı inflamatuvar artışı baskılamış ve özellikle MUC5AC ile NLRP3 düzeylerinde anlamlı azalma sağlamıştır (25-OHC p <0.01; GW3965 p <0.05). Bu iki agonist aynı zamanda diğer inflamatuvar genlerde de TNF-α kaynaklı yükselişi azaltan bir eğilim göstermiştir. TNF-α uygulaması IL-6 düzeylerini 6.saat ve 24.saatte anlamlı düzeyde yükseltmiştir (p<0.001; p<0.05). İnflamatuvar grupta 25-OHC uygulaması IL-6 düzeylerinde anlamlı bir azalma sağlamış (p <0.05), buna karşın IL-1β düzeylerinde anlamlı bir değişim gözlenmemiştir (p>0.05). Bu da inflamazom aktivasyonunun yalnızca (sinyal 1) aşamasıyla sınırlı kaldığını desteklemektedir. Elde edilen bulgular, LXR aktivasyonunun TNF-α aracılı epitel inflamasyonunu baskılayan güçlü bir immünmodülatör mekanizma olduğunu ortaya koymakta ve LXR hedefli stratejilerin hava yolu inflamasyonu ile ilişkili hastalıklarda potansiyel bir terapötik yaklaşım olabileceğini düşündürmektedir.
Özet (Çeviri)
Asthma is a complex disease characterized by impaired epithelial barrier function, increased mucus production, and dysregulated inflammatory cytokines. In this study, the regulatory role of Liver X Receptors (LXRs) in airway inflammation was investigated using a TNF-α–induced inflammation model established in primary human bronchial epithelial cells (HBECs). TNF-α stimulation was used to activate the NF-κB pathway, followed by assessment of the effects of the endogenous oxysterol 25-hydroxycholesterol (25-OHC) and the synthetic LXR agonist GW3965. Cell viability and cytotoxicity were evaluated using the CCK-8 assay, whereas cell death was analyzed by Annexin V/PI-based flow cytometry. The expression of key genes associated with inflammation, lipid metabolism, and epithelial barrier function was measured by qRT-PCR, while Cytokine levels were quantified by ELISA. Low and moderate doses of TNF-α largely preserved cell viability, whereas the high dose resulted in marked cytotoxicity. Annexin V/PI analysis showed limited apoptosis at moderate dose TNF-α and a pronounced increase in necrosis at high dose. TNF-α significantly increased the expression of MUC5AC, ICAM-1, NLRP3, and CASP-1 (p <0.05). LXR agonists markedly upregulated LXR-dependent target genes (NR1H2, NR1H3, and ABCA1), confirming effective activation of the LXR pathway (p <0.001). Both 25-OHC and GW3965 attenuated the TNF-α–induced inflammatory response and produced significant reductions particularly in MUC5AC and NLRP3 levels (25-OHC p <0.01; GW3965 p <0.05). These agonists also exhibited a general tendency to reduce TNF-α–driven elevations in other inflammatory genes. TNF-α significantly increased IL-6 levels at both 6 and 24 hours (p <0.001; p <0.05). In inflamed group, 25-OHC treatment resulted in a significant reduction in IL-6 levels (p <0.05). In contrast, the absence of a significant change in IL-1β levels (p> 0.05) suggests that inflammasome activation remained restricted to the priming (signal 1) stage. Collectively, these findings demonstrate that LXR activation functions as a potent immunomodulatory mechanism that suppresses TNF-α–mediated epithelial inflammation and suggest that LXR-targeted strategies may represent a promising therapeutic approach for airway inflammation–related diseases.
Benzer Tezler
- Luteal regresyonda liver X reseptör yolağının araştırılması
Investigation of liver X receptor pathway in luteal regression
MUSTAFA HİTİT
- Hipertansiyon nedeniyle gelişen kardiyak işlev bozukluğunda“karaciğer X reseptörleri”nin (liver X receptor; LXR) rolü
The role of liver X receptors on cardiac dysfunction induced BY hypertension
NUR BANU BAL
Doktora
Türkçe
2016
Eczacılık ve FarmakolojiGazi ÜniversitesiFarmakoloji Ana Bilim Dalı
DOÇ. DR. MECİT ORHAN ULUDAĞ
PROF. DR. EMİNE DEMİREL YILMAZ
- Assessment of the effects of melatonin on the funtional deficits induced by cellular stress in obese donor derived mesenchymal STEM cells
Melatonin'in obez donor mezenkimal kök hücrelerinde hücresel strese bağlı olarak oluşan fonksiyon bozuklukları üzerindeki etkilerinin değerlendirilmesi
ECE GİZEM POLAT
Yüksek Lisans
İngilizce
2024
BiyolojiHacettepe ÜniversitesiKök Hücre Ana Bilim Dalı
DOÇ. DR. FATİMA SUSANNA FAUSTINA AERTS KAYA
- Polikistik over sendromlu hastalar ve obez hastalarda angiotensin konverting enzim,renin aldosteron düzeyi ile insülin direnci arasındaki ilişki
Başlık çevirisi yok
ZİYNET ALPHAN ÜÇ
Tıpta Yan Dal Uzmanlık
Türkçe
2011
Endokrinoloji ve Metabolizma HastalıklarıSağlık BakanlığıEndokrinoloji ve Metabolizma Bilim Dalı
DOÇ. DR. YALÇIN ARAL
- Karaciğer ve kanda büyüme hormonu (growth hormon)'na ait hücre reseptörlerinin radyoreseptör testi ile tayini
Başlık çevirisi yok
SADUN İ. AKTUNA