Maturasyon duraklaması bulunan azospermi hastalarında YY1 ve RKIP ilişkisinin değerlendirilmes
Evaluation of the relationship between YY1 and RKIP in azoospermia patients with maturation arrest
- Tez No: 973734
- Danışmanlar: PROF. DR. GÜLPERİ ÖKTEM
- Tez Türü: Yüksek Lisans
- Konular: Üroloji, Patoloji, Histoloji ve Embriyoloji, Urology, Pathology, Histology and Embryology
- Anahtar Kelimeler: Azospermi, Spermatogenez, Azoospermia, Spermatogenesis
- Yıl: 2025
- Dil: Türkçe
- Üniversite: Ege Üniversitesi
- Enstitü: Sağlık Bilimleri Enstitüsü
- Ana Bilim Dalı: Histoloji ve Embriyoloji Ana Bilim Dalı
- Bilim Dalı: Belirtilmemiş.
- Sayfa Sayısı: Belirtilmemiş.
Özet
Spermatogenez, testisin seminifer tübüllerde gerçekleşen spermatogonyal kök hücrelerin tam olgun spermatozoaya dönüşümünü içeren sıkı şekilde düzenleniş olan çok aşamalı biyolojik bir süreçtir. Bu süreç yalnızca germ hücrelerinin farklılaşma kapasitesine bağlı değildir, aynı zamanda somatik hücrelerin destekleyicisi olarak görev alan sertoli ve leydig hücreleri ve bu sürecin gerçekleşmesinde rol alan moleküler sinyal yolaklarına bağlıdır. Süreçte yaşanan aksaklıklardan kaynaklı olarak ejakülatta sperm yokluğu olarak bilinen azospermi ortaya çıkmaktadır. Bu süreç, obstrüktif azospermi ve non-obstrüktif azospermi olmak üzere iki aşamadan oluşmaktadır. Özellikle germ hücrelerinde meydana gelen aksaklıklar sebebiyle oluşan rahatsızlıklar non-obstrüktif azospermi tanısına sahiptir. Non-obstrüktif azospermi adı altında matürasyon duraklaması, hipospermatogenez ve sertoli hücre sendromu tanıları yer almaktadır. Bu çalışmada sperm elde etme yöntemi olan mikro-TESE (mTESE) işleminde yaşanan başarısızlıklardan kaynaklı azosperminin farklı alt tanılarına sahip hastalardan alınan testis biyopsileri incelenmiştir. Alınan biyopsilerde literatürde spermatogenez süreci ile bağlantılı görülen, Ying Yang 1 (YY1) ve Raf Kinaz İnhibitör Protein (RKIP)'in spermatogenez üzerindeki potansiyel düzenleyici roller ile birlikte string analizinde bağlantılı olarak görülen Mitojenle Aktive Olan Protein Kinaz 1 (MAPK1), Mitojenle Aktive Olan Protein 2 Kinaz 1 (MAP2K1), Zeste Arttırıcı Homolog 2 (EZH2) ve Alfa Globulin Transkripsiyon Faktörü (CP2c) genlerinin ekspresyon düzeyleri hem moleküler hem de immünohistokimyasal teknikler ile incelenmiştir. Çalışma kapsamında 2018-2023 yılları arasında Ege Üniversitesi Tıp Fakültesi üroloji Anabilim Dalı'nda mTESE sonrası alınan parafin bloklar içerisinde olan testis örnekleri, tanılarına göre hipospermatogenez, erken matürasyon duraklaması ve sertoli hücre sendromu olarak 3 gruba ayrılmış ve toplamda 27 hasta alınmıştır. Kantitatif Polimeraz Zincir Reaksiyonu (Quantitative Polymerase Chain Reaction-qPCR) her bir hasta ve gen için uygulanmıştır. Aynı hastaya ait parafin dokuya gömülmüş olan diğer testis örneği immünohistokimyasal olarak YY1, RKIP, EZH2, CP2c, MAPK1 ve MAP2K1 biyobelirteçleri ile analiz edilmiştir. İfadelenme düzeyi histolojik skorlama ( h-skor) ile hesaplanmıştır. Son olarak elde edilen immünoreaktivite değerleri istatistiksel olarak karşılaştırılmış ve sonuçlar hastaların yaş, FSH, LH ve testesteron hacim değerleri ile gruplar arasında değerlendirilmiştir. Deney sonucunda elde edilen immünohistokimyasal bulgular sonucunda MAPK1 ve MAP2K1 genlerinde hipospermatogenez grubunda anlamlı ifadelenmeler gözlemlenmiş ve sertoli hücre sendromuna ait hastalarda germ hücresi yokluğu sebebi ile sitoplazmik ifadelenmeler gerçekleşmiştir. RKIP, CP2c ve EZH2 genlerinde hipospermatogenez grubunda düşük düzeyde sitoplazmik pozitif ifadelenmeler gözlenirken, erken matürasyon ve sertoli hücre sendromunda lokalize ifadelenme ve yer yer negatif ifadelenmeler gösterilmiştir. YY1 da genel olarak tüm gruplarda ifadelenme bulunmamaktadır. Elde edilen qPCR sonuçlarına göre tek yönlü ANOVA (one way ANOVA) ve T-test analizi yapılmış ve sonuçlara göre sadece YY1 geni tüm gruplarda anlamlılık göstermiştir. Bu sonuçlara göre gen düzeyinde ifadelenen YY1 protein düzeyine geçemediğinden immünohistokimyada anlamlı çıkmamıştır. İmmünohistokimyada edinilen bilgilere göre gruplara göre germ hücre sayısının düşmesine bağlı olarak ifadelenme azalmış ve bu genlerin transkripsiyon faktörlerinin aktif olduğu spermatogenez sürecinin bozulma sürecinde bu genlerin baskılanması gereken faktörler üzerine yoğunlaşılması gerektiği gözlemlenmiştir.
Özet (Çeviri)
Spermatogenesis is a tightly regulated, multi-step biological process occurring in the seminiferous tubules of the testis, involving the transformation of spermatogonial stem cells into mature spermatozoa. This process depends not only on the differentiation capacity of germ cells but also on the supportive functions of somatic cells such as Sertoli and Leydig cells, and on molecular signaling pathways. Disruptions in this process may result in azoospermia, the absence of sperm in the ejaculate, which is classified into obstructive and non-obstructive azoospermia (NOA). Disorders resulting from intrinsic defects in germ cells are considered under NOA, including maturation arrest, hypospermatogenesis, and Sertoli cell-only syndrome. In this study, testicular biopsies were analyzed from patients with different NOA subtypes, collected following unsuccessful micro-TESE (mTESE) procedures. Genes previously associated with spermatogenesis, such as Ying Yang 1 (YY1) and Raf Kinase Inhibitor Protein (RKIP), along with MAPK1, MAP2K1, EZH2, and CP2c—identified through STRING analysis—were evaluated for their expression levels using both molecular (qPCR) and immunohistochemical (IHC) methods. A total of 27 patients diagnosed with hypospermatogenesis, early maturation arrest, or Sertoli cell-only syndrome between 2018 and 2023 at Ege University Faculty of Medicine were included. qPCR was performed for each gene in each patient, and corresponding paraffin-embedded samples were evaluated immunohistochemically using specific antibodies. Protein expression was scored using the H-score method. Protein expression (H-score) were compared in groups statistically using one-way ANOVA. Results were obtained with ages of patients and other clinical parameters such as FSH, LH and testesterone volume. Immunohistochemically, MAPK1 and MAP2K1 showed strong cytoplasmic expression in the hypospermatogenesis group, whereas Sertoli cell-only samples showed limited staining due to the absence of germ cells. RKIP, CP2c, and EZH2 showed low positivity in hypospermatogenesis, and mostly focal or negative staining in early maturation arrest and Sertoli cell-only groups. YY1 showed no detectable protein expression in any group. However, qPCR revealed that only YY1 showed significant differences among groups, suggesting transcriptional activity without protein translation, explaining the negative IHC results. These findings indicate that decreased expression correlates with germ cell loss, and highlight the potential roles of these genes in spermatogenesis. The suppression of key transcription factors in impaired spermatogenic processes may represent a critical regulatory mechanism worth further investigation.
Benzer Tezler
- Fare preimplantif embriyo gelişim sürecinde FOXO1, FOXO3 ve FOXO4 ekspresyonlarının değerlendirilmesi
The evaluati̇on of expressi̇ons of FOXO1, FOXO3,and FOXO4 duri̇ng prei̇mplantati̇on embryo development i̇n mi̇ce
NİLAY KUŞCU
Yüksek Lisans
Türkçe
2014
Histoloji ve EmbriyolojiAkdeniz ÜniversitesiHistoloji ve Embriyoloji Ana Bilim Dalı
DOÇ. DR. ÇİLER ÇELİK ÖZENCİ
- Akut ve kronik idiopatik trombositopenik purpuralı çocuklarda megakaryosit apoptozu
Investigation of megakaryocytes apoptosis in children with acute and chronic idiopathic thrombocytopenic
CANAN UÇAR
Tıpta Yan Dal Uzmanlık
Türkçe
2001
Çocuk Sağlığı ve HastalıklarıDokuz Eylül ÜniversitesiÇocuk Sağlığı ve Hastalıkları Ana Bilim Dalı
DOÇ. DR. HALE ÖREN
- Deneysel hayvan modelinde asetil l?karnitinin, sisplatine bağlı miyelosupresif etkiyi değiştirici rolünün araştırılması
The investigation of protective role of acetyl l-carnitine on cisplatin myelosuppression in experimental animal model
DENİZ KIZMAZOĞLU
Tıpta Uzmanlık
Türkçe
2011
Çocuk Sağlığı ve HastalıklarıDokuz Eylül ÜniversitesiÇocuk Sağlığı ve Hastalıkları Ana Bilim Dalı
DOÇ. DR. DİLEK İNCE
- Non-obstrüktif azoospermide sperm bulmayı predikte eden faktörler
Factors predicting sperm retrevial in non-obstructive azoospermic patients
RANA AWNİ KAMAL
Tıpta Uzmanlık
Türkçe
2014
Kadın Hastalıkları ve DoğumHacettepe ÜniversitesiKadın Hastalıkları ve Doğum Ana Bilim Dalı
PROF. DR. GALİP SERDAR GÜNALP