Geri Dön

Production of Taq I restriction and modification enzymes by using two different expression systems

Taq I restriksiyon ve modifikasyon enzimlerinin iki farklı ekspresyon sistemi kullanılarak üretilmesi

PDF İndir

  1. Tez No: 95438
  2. Yazar: EBRU TOKSOY
  3. Danışmanlar: PROF. DR. BETÜL KIRDAR, PROF. DR. ZEYNEP İLSEN ÖNSAN
  4. Tez Türü: Doktora
  5. Konular: Kimya Mühendisliği, Chemical Engineering
  6. Anahtar Kelimeler: Enzimler, Modifikasyon, Protein ekspresyonu, Tag I, Enzymes, Modification, Protein expression, Tag I
  7. Yıl: 2000
  8. Dil: İngilizce
  9. Üniversite: Boğaziçi Üniversitesi
  10. Enstitü: Fen Bilimleri Enstitüsü
  11. Ana Bilim Dalı: Kimya Mühendisliği Ana Bilim Dalı
  12. Bilim Dalı: Belirtilmemiş.
  13. Sayfa Sayısı: Belirtilmemiş.

Özet

Taq I restriksiyon-modifikasyon sistemi, iki farklı ekspresyon sistemi kullanılarak klonlanması ve ekspresyonu sağlanmıştır. Birinci ekspresyon sisteminde, Taq I restriksiyon endonükleazı maltoza-bağlanan protein ile füzyon protein oluşturarak üretilmiştir. Oluşturulan MBP-Taq I füzyon proteini rekombinant hücrelerin periplazma bölgelerine yönlendirilmiş olmasına rağmen, toplam Taq I endonükleaz aktivitesinin yüzde 80-90'ımn hücreler parçalanmadan sıvı besi ortamına çıktığı anlaşılmıştır. MBP-Taq I füzyon proteini, recombinant E. coli hücrelerinin sitoplazma, periplazma ve sıvı besi ortamlarından amiloz afinite kromatografisi yöntemi ile saflaştınlmıştır. Kontrollü fermentör koşullarında, Taq I metilaz enziminin koekspresyonu plazmid kararlılığım ve füzyon proteinin periplazma bölgesine ve hücre dışma salgılanmasını arttırmıştır ve E. coli XLl(pH185, pETMET) hücrelerinin sıvı besiyerinden 0.6xl06 U/L Taq I endonükleaz aktivitesi elde edilmiştir. ikinci sistemde, Taq I restriksiyon endonükleaz geninin T7 RNA polimeraz promotörü altında ekspresyonu sağlanmıştır. Korunmayan ve metilaz aktivitesi ile korunan E. coli hücrelerinin büyüme özellikleri ve enzim üretimleri, değişik fermentasyon koşullannda çalkalayıcı ve fermentörde incelenmiştir. Metilaz geninin koekspresyonu enzim üretiminin daha hızlı ve uzun süreli olmasını sağlamış ve E. coli BL21(DE3)[pTaqR, pMETaq]hücrelerin özütlerinden 250x1 06 U/L Taq I endonükleaz aktivitesi elde edilmiştir.

Özet (Çeviri)

Taq I restriction-modification system has been cloned and expressed using two different expression systems. In the first system, Taq I restriction endonuclease was expressed as a fusion protein with the maltose-binding protein. Although the MBP-Taq I fusion protein was targeted to the periplasmic space, 80-90 per cent of Taq I endonuclease activity was found to be excreted to the growth medium without cell lysis. The fusion protein was also purified via amylose affinity chromatography from the cytoplasm, periplasm and medium of recombinant E. coli cells. Co-expression of the Taq I methylase gene improved the plasmid stability and the periplasmic and extracellular transport of the fusion protein under controlled bioreactor conditions resulting in 0.6x1 06 U/L extracellular Taq I endonuclease activity yield in E. coli XLl(pH185, pETMET) culture. For the second system, Taq I endonuclease gene was expressed under the control of the T7 RNA polymerase promoter. Growth and enzyme productivity of the unprotected and methylase protected E. coli cultures were analyzed under various fermentation conditions in shake flasks and bioreactor. Co-expression of the methylase gene resulted in higher enzyme production rates for longer periods yielding 250x1 06 U/L Taq I endonuclease activity in crude cellular extracts of E. coli BL21(DE3)[pTaqR, pMETaq] cells.

Benzer Tezler

  1. Tez No

    95404

    Production of MBP-Taq I restriction endonuclease fusion protein by recombinant Escherichia coli harboring pETMET

    MBP-Taq I restriksiyon endonükleaz füzyon proteininin pETMET plazmidi içeren rekombinant escherichia coli harboring pETMET

    BAHAR BİLGEN

    Yüksek Lisans

    İngilizce

    İngilizce

    2000

    Kimya MühendisliğiBoğaziçi Üniversitesi

    Kimya Mühendisliği Ana Bilim Dalı

    PROF. BETÜL KIRDAR

  2. Tez No

    76483

    Cloning and expression of TaqI restriction endonuclease gene using pmal-c2 vector system in different straints of escherichia coli

    TaqI restriksiyon endonükleaz geninin pmal-c2 vektör sistemi kullanılarak değişik escherichia coli suşlarında klonlanması ve ekspresyonu

    ELİF ÖZKIRIMLI

    Yüksek Lisans

    İngilizce

    İngilizce

    1998

    Kimya MühendisliğiBoğaziçi Üniversitesi

    Kimya Mühendisliği Ana Bilim Dalı

    PROF.DR. BETÜL KIRDAR

  3. Tez No

    50542

    Cloning of TaqI endonuclease gene into E.coli and isolation of the enzyme by using pMAL-p2 vector system

    pMAL-p2 vektör sistemi kullanılarak TaqI restriksiyon enzim geninin E.coli'ye klonlanması ve enzimin izolasyonu

    PEMBE HANDE ÖZDİNLER

    Yüksek Lisans

    İngilizce

    İngilizce

    1996

    BiyolojiBoğaziçi Üniversitesi

    PROF.DR. BETÜL KIRDAR

  4. Tez No

    50512

    Cloning and expression of TagI endonuclease in E.coli by using the cloning vector pUC18

    TaqI endonükleazının pUC18 klonlama vektörü kullanılarak E.coli'ye klonlanması ve üretimi

    ZEYNEP PETEK ÇAKAR

    Yüksek Lisans

    İngilizce

    İngilizce

    1996

    Kimya MühendisliğiBoğaziçi Üniversitesi

    PROF.DR. BETÜL KIRDAR

    PROF.DR. ZEYNEP İLSEN ÖNSAN

  5. Tez No

    50482

    Studies on the fermentation characteristics of the bacterium thermus aquaticus in a batch system and purification of its enzyme Taql

    Thermus aquaticus bakterisinin fermentasyon karakteristiğinin saptanması ve TaqI enziminin thermus aquaticus hücrelerinden saflaştırılması

    MEHMET METE ALTINTAŞ

    Yüksek Lisans

    İngilizce

    İngilizce

    1996

    Kimya MühendisliğiBoğaziçi Üniversitesi

    Y.DOÇ.DR. KUTLU ÜLGEN

Geri Dön