Pankreas kanserinde montmorillonit kiline yüklenmiş kapsaisinin anjiyogenez üzerine etkisi
The effect of capsaicin loaded montmorillonite clay on angiogenesis in pancreatic cancer
- Tez No: 891754
- Danışmanlar: PROF. DR. GÖRKEM KISMALI
- Tez Türü: Doktora
- Konular: Biyokimya, Biochemistry
- Anahtar Kelimeler: Anjiyogenez, Kapsaisin, Montmorillonit, Pankreas Kanseri, VEGFR-2, Angiogenesis, Capsaicin, Pancreatic Cancer, Montmorillonite, VEGFR-2
- Yıl: 2024
- Dil: Türkçe
- Üniversite: Ankara Üniversitesi
- Enstitü: Sağlık Bilimleri Enstitüsü
- Ana Bilim Dalı: Veterinerlik Biyokimyası Ana Bilim Dalı
- Bilim Dalı: Belirtilmemiş.
- Sayfa Sayısı: Belirtilmemiş.
Özet
Kapsaisin VEGF aracılı anjiyogenezi baskılayabilmektedir. Bununla birlikte yarılanma ömrü 1 saattir ve acı olması nedeniyle mideyi irrite edebilmektedir. Bu araştırma ile montmorillonit (MMT) kiline yüklenen kapsaisinin kontrollü salım profilinin elde edilmesi ve BalbC nu/nu atimik farelerde oluşturulan pankreas tümör modelinde anjiyogenez yolakları üzerine etkisinin araştırılması, kapsaisinin salımı ile kanda kalma süresinin uzatılması, anjiyogenez yolağını baskılaması ve son olarak kapsaisinin mideyi irrite edici etkisini azaltması ya da ortadan kaldırması amaçlanmıştır. Çalışmamızda bentonit kilinin saflaştırılmasıyla elde edilen saf MMT mineralinin ilaç taşıma sistemi olarak kullanımı tercih edildikten sonra, ham ve saf MMT killerinin katyon değişim kapasitesi ölçülmüştür. Ardından hiçbir toksik etkisi olmayan setiltrimetil amonyum bromid (CTAB) ile modifiye işlemine tabi tutulmuştur. CTAB ile modifikasyon işlemi sonucu, MMT mineralini oluşturan tabaka araları istenildiği üzere genişleyerek MMT'in adsorbsiyon kapasitesi arttırılmıştır. Elde edilen kil örneklerinin karakter analizlerinin değerlendirilmesi için XRF, XRD, FT-IR, SEM, tane boyut analizi ve zeta potansiyel analizleri gerçekleştirilmiştir. Karakter analizleri tamamlandıktan sonra saf MMT ve %50 CTAB ile modifiye edilen MMT'e kapsaisin kapsülleme verimlilikleri ve salım testlerini değerlendirebilmek için etanol ve DMSO içinde formülasyonlar hazırlanmıştır. Ardından DMSO ile sentezlenen Saf-MMT, %50C-Saf MMT ve deneme amaçlı olarak da Saf MMT-Kit-Cap formülasyonları sentezlenmiş olup, salım çalışmaları salım ortamında gerçekleştirilmiştir. Spektrofotometre ile spektrum taraması, kalibrasyon eğrilerinin çizilmesi ve salım testlerinde elde edilen konsantrasyonların belirlenmesi, UV Probe uygulamasında otomatik olarak hesaplanmıştır. Salım profillerine ait salım kinetikleri sıfırıncı dereceden salım kinetiği, birinci dereceden salım kinetiği, Higuchi modeli, Hixson Krowell Küp Kök Yasası ve Korsmeyer-Peppas modeli ile hesaplanmış olup R2 değerlerine göre her iki formülasyona en uygun modelin sıfırıncı dereceden salım kinetiği ve Korsmeyer-Peppas modeli olduğu belirlenmiştir. Ayrıca Korsmeyere Peppas modeline göre n değerleri <0,05 olarak tespit edilmiş olup Saf MMT-Cap ve %50C-Saf MMT-Cap ile yapılan salımlar Fick yasasına uygun bir şekilde kontrollü olarak gerçekleştiği ortaya koyulmuştur. Elde edilen sonuçlara dayanarak kapsaisinin anjiyogenez üzerindeki etkisinin araştırılması amacıyla in vivo çalışmalara %50C-Saf MMT-Cap formülasyonu ile devam edilmesine karar verilmiştir. BalbC nu/nu fareler, her grupta 7 adet olacak şekilde 3 farklı gruba ayrılmış olup, 200 uL'de 6x106 PANC-1 hücresi olacak şekilde her fareye subkutan enjeksiyon yapılmıştır. Tümör ölçümleri kumpas ile gerçekleştirilmiştir. Tümör boyutları 100 mm3'e ulaştığında tedavi protokolü başlatılmıştır. Tedavi sürecinde haftada 2 gün tümör ölçümleri gerçekleştirilmiştir. Kontrol grubuna fare başına %1 DMSO + %99 distile su, Cap grubuna %1 DMSO + %99 distile su içinde 5 mg/kg kapsaisin, %50C-Saf MMT-Cap grubuna ise %1 DMSO + %99 distile su içinde kapsaisin miktarı 5mg/kg olacak şekilde %50C-Saf MMT-Cap formülasyonundan 15 gün boyunca her gün 200 µL oral gavaj ile verilmiştir. Tedavi protokolüne bitişine takiben sakrifiye edilen farelerden gerekli dokular ve kan örnekleri toplanmış olup, tümör dokuları tartılmıştır. Ayrıca, tümör ile HE ve“p-VEGFR-2 (Tyr 1175), p-p38 MAPK (Thr180/Tyr182), p-Src (Tyr416), p-Akt (Ser473), p-FAK (Tyr397), p-PLCγ1 (Ser1248), p-ERK ½ (Thr202/Tyr204)”antikorları için IHC boyamaları gerçekleştirilmiştir. Mide üzerine kapsaisinin irrite edici etkisinin değerlendirilmesi için toplanan mide dokuları ile HE boyama yapılmıştır. Kan örnekleri ile tam kan analizleri gerçekleştirilmiştir. Tümör boyut ölçümleri, tümör ağırlıkları ve tam kan analizleri istatistiksel olarak değerlendirilmiştir. Tümör boyutlarının üçüncü ölçümlerinde kontrol (121,4729±20,806 mm3) ve kapsaisin grubu (89,6614±8,342 mm3) arasında, ayrıca kontrol ve %50C-Saf MMT-Cap (97,880±13,760 mm3) grubu arasında istatistiksel olarak anlamlı farklılık bulunmuştur ve P=0,003'tür. Dördüncü tümör boyut ölçümlerinde ise kontrol (134,5671±35,386 mm3) ve kapsaisin grubu (91,3186±16,733 mm3) arasında anlamlı farklılık bulunmuştur ve P=0,017 olarak tespit edilmiştir. Tam kan sayımlarında % eozinofil değeri kontrol grubu (7,8657±1,905) ve %50C-Saf MMT-Cap grubu (2,9186±0,750) arasında anlamlı farklılık bulunmuştur ve P değeri 0,049'dur. PLT değeri kontrol grubu (435,7143±102,827) ve %50C-Saf MMT-Cap grubu (904,8571±101,279) arasında anlamlı fark bulunmuştur ve P=0,04'tür.
Özet (Çeviri)
Capsaicin can suppress angiogenesis through VEGF mediation. However, it has a half-life of 1 hour and can potentially irritate the stomach due to its pungency. This research aims to achieve a controlled release profile of capsaicin loaded into montmorillonite (MMT) clay, investigate its effect on angiogenesis pathways in a pancreatic tumor model created in BalbC nu/nu athymic mice, extend the duration of presence in the bloodstream through capsaicin release, suppress angiogenesis pathways, and finally, reduce or eliminate the stomach-irritating effect of capsaicin. Following the purification of bentonite clay in our study to obtain pure MMT mineral for use in drug delivery systems, the cation exchange capacities of raw and pure MMT clays were measured. Subsequently, a modification process with CTAB, which has no toxic effects, was applied. As a result of the Cetyltrimethylammonium Bromide (CTAB) modification process, the interlayer spaces of the layers forming the MMT mineral expanded as desired, increasing the adsorption capacity of MMT. Characterization analyses of the obtained clay samples were conducted using XRF, XRD, FT-IR, SEM, particle size analysis, and zeta potential analyses. After the completion of character analyses, formulations were prepared in ethanol and DMSO to evaluate the encapsulation efficiencies and release tests for pure MMT and MMT modified with 50% CTAB. Then, Pure MMT, 50C%-Pure MMT, and, for experimental purposes, Pure MMT-Kit-Cap formulations were synthesized with DMSO, and release studies were conducted in the release medium. Spectrum scanning with a spectrophotometer, drawing of calibration curves, and determination of concentrations obtained in release tests were automatically calculated in the UV Probe application. Release kinetics of the release profiles were calculated using zero-order release kinetics, first-order release kinetics, Higuchi model, Hixson Krowell Cube Root Law, and Korsmeyer-Peppas model. According to the R2 values, zero-order release kinetics and the Korsmeyer-Peppas model were determined as the most suitable models for both formulations. In addition, n values determined according to the Korsmeyer-Peppas model were <0.05, indicating that the releases conducted with Pure MMT-Cap and 50C%-Pure MMT-Cap were controlled according to Fick's law. Based on the obtained results, it was decided to continue in vivo studies to investigate the effect of capsaicin on angiogenesis with the 50C%-Pure MMT-Cap formulation. BalbC nu/nu mice were divided into three different groups with 7 mice in each group. Subcutaneous injections of 6x106 PANC-1 cells in 200 μL were administered to each mouse. Tumor measurements were performed using calipers. The treatment protocol was initiated when tumor sizes reached 100 mm3. During the treatment process, tumor measurements were conducted twice a week. The control group received 1% DMSO + 99% distilled water per mouse, the Cap group received 5 mg/kg capsaicin in 1% DMSO + 99% distilled water, and the 50C%-Pure MMT-Cap group received the 50C%-Pure MMT-Cap formulation in 1% DMSO + 99% distilled water, with a daily dose of 5 mg/kg capsaicin for 15 days via oral gavage. Using tumor tissues were performed HE staining and IHC staining for“p-VEGFR-2 (Tyr 1175), p-p38 MAPK (Thr180/Tyr182), p-Src (Tyr416), p-Akt (Ser473), p-FAK (Tyr397), p-PLCγ1 (Ser1248), p-ERK ½ (Thr202/Tyr204)”. For the evaluation of the irritating effect of capsaicin on the stomach, stomach tissues were collected and stained with HE. Complete blood analyses were conducted with blood samples. Tumor size measurements, tumor weights, and complete blood analyses were statistically evaluated. The third measurements of tumor sizes revealed a statistically significant difference between the control (121.4729±20.806 mm3) and the capsaicin group (89.6614±8.342 mm3), as well as between the control and 50C%-Pure MMT-Cap group (97.880±13.760 mm3) with a P value of 0.003. In the fourth tumor size measurements, a significant difference was found between the control (134.5671±35.386 mm3) and capsaicin group (91.3186±16.733 mm3) with a P value of 0.017. Regarding complete blood counts, there was a significant difference in the eosinophil percentage between the control group (7.8657±1.905) and the 50C%-Pure MMT-Cap group (2.9186±0.750) with a P value of 0.049. The platelet (PLT) value showed a significant difference between the control group (435.7143±102.827) and the 50C%-Pure MMT-Cap group (904.8571±10.279) with a P value of 0.04.
Benzer Tezler
- Pankreas kanserinde MDR (P-glycoprotein), Ki-67 ve survivin ekspresyonu ile apoptotik aktivitenin prognoz üzerine etkilerinin değerlendirilmesi
The effect of survivin, MDR (P-glycoprotein), Ki-67 and, apoptotic activity on prognosis
TUĞBA YAVUZŞEN
Tıpta Uzmanlık
Türkçe
2003
OnkolojiDokuz Eylül Üniversitesiİç Hastalıkları Ana Bilim Dalı
Y.DOÇ.DR. İLHAN ÖZTOP
- Pankreas kanserinde oksaliplatin temelli tedavi rejimlerinin değerlendirilmesi
Evaluation of oxaliplatin-based regimens in the treatment of pankreatic cancer
KEREM DERYAL
- Pankreas kanserinde kromogranin A düzeyi
Chromogranin A levels in pancreatic cancer
HAMİDE SEZGİN ŞENGÜL
Tıpta Uzmanlık
Türkçe
2013
GastroenterolojiEge Üniversitesiİç Hastalıkları Ana Bilim Dalı
DOÇ. DR. NEVİN ORUÇ
- Pankreas kanserinde DNA hasar ve onarımının incelenmesi
Investigation of DNA damage and repair in pancreatic cancer
FERİHA ÖZKAYA
Doktora
Türkçe
2015
Moleküler TıpDokuz Eylül ÜniversitesiMoleküler Tıp Ana Bilim Dalı
DOÇ. DR. ZEYNEP SERCAN
PROF. DR. FATOŞ GÜLDAL KIRKALI
- Pankreas kanserinde metastatik lenf nodu sayısı ve oranının sağ kalıma etkisi
Prognostic value of metastatic lymph node ratio in pancreatic cancer
AVNİ CAN KARACA
Tıpta Uzmanlık
Türkçe
2012
Genel CerrahiSağlık BakanlığıGenel Cerrahi Ana Bilim Dalı
PROF. DR. AHMET ÇOKER