Development and validation of in-house elisa prototypes for anti-F5 (K99) antibody detection in neonatal calf diarrhea and total IgG detection in immune sera
Sığır immun serumlarında total IgG ve yenidoğan buzağı ishallerinde anti-F5 (K99) antikor tespitine yönelik ın-house elısa prototipleri geliştırilmesi ve valıdasyon çalışmaları
- Tez No: 809548
- Danışmanlar: PROF. DR. OKTAY GENÇ
- Tez Türü: Yüksek Lisans
- Konular: Veteriner Hekimliği, Veterinary Medicine
- Anahtar Kelimeler: Sığır IgG, ELISA, Pasif transfer yetmezliği (FPT), fanC, Yenidoğan buzağı ishali, Buzağılar, Diyare, Enzime bağlı immünosorbent testi, Sığırlar, Veteriner hekimlik, İmmünoglobülin G, Bovine IgG, ELISA, Failure of passive transfer (FPT), fanC, Neonatal calf diarrhea, Calves, Diarrhea, Enzyme-linked immunosorbent assay, Cattles, Veterinary medicine, Immunoglobulin G
- Yıl: 2023
- Dil: İngilizce
- Üniversite: Ondokuz Mayıs Üniversitesi
- Enstitü: Lisansüstü Eğitim Enstitüsü
- Ana Bilim Dalı: Veterinerlik Mikrobiyolojisi Ana Bilim Dalı
- Bilim Dalı: Belirtilmemiş.
- Sayfa Sayısı: Belirtilmemiş.
Özet
Hem anti-F5 (K99) antikoru hem de sığır IgG tespiti için sırasıyla in house iELISA ve sandviç ELISA prototipleri geliştirilmiştir. Reaktif antijen olarak fimbrial K99 (fanC) rekombinant proteini kullanıldı ve K99 antikor tespiti için kalibre edildi. Optimal FanC konsantrasyonu SPSS 17.0 ile kalibrasyon eğrisi tahmininden 500 ng/ml olarak belirlendi. Optimal monoklonal antikor konsantrasyonu ve test serum dilüsyonu sırasıyla >0.5ug/ml ve 1:100 olarak belirlendi. Prototip, fanC antijeninin reaktivitesini değerlendirmek için iyi bilinen aşı serumlari ile değerlendirilmiştir. Tukey testi ile ilk aşılanan grup ile ikinci aşılanan grup arasında fark belirlendi ve ilk aşılanan grubun ikinci defa aşılanan gruptan daha iyi olduğu istatistiksel olarak gösterildi (p<0.05). Sığır IgG tespitine yönelik sandviç ELISA optimizasyonunda, 3 bloking solüsyon, bloking içermeyen PBS solüsyonu ile test edildi. Antijen, balık jelatini, yağsız süt ve sığır serum albümini dahil tüm bloke edici ajanlara reaktif bulunduğundan test bloking yerine PBS ile gerçekleştirildi. Doğrusallığı değerlendirmek için optimizasyon süreci boyunca bir kalibratör kullanıldı. Sandviç ELISA'nın analitik duyarlılığı 150-800 ng/ml olarak belirlendi. Kesinlik, %10'luk bir varyasyon ile belirlendi. Ancak referans örnekler ve iyi tanımlanmış serumlar ile doğrulama yapılmadı. Bu nedenle, bu çalışmada optimize edilen prototipler, saha ve referans örneklerle değerlendirilmelidir. Sandviç ELISA optimizasyonu başarıyla tamamlanırken, yeterli referans numunenin bulunmaması nedeniyle doğrulaması yapılamamıştır. Testlerin tanısal özellikleri henüz tamamlanmamış olsa da, prototipleryeni doğan buzağı ishali ve pasif transfer yetmezliği olan olgularda veya deneysel veriler ile değerlendirilebilir.
Özet (Çeviri)
For the detection of anti-F5 (K99) antibodies and bovine IgG, In-house ELISA ELISA prototypes known as iELISA and sandwich ELISA were developed respectively. Fimbrial K99 (fanC) recombinant protein was used and calibrated as the reactive antigen for K99 antibody detection. The optimal FanC concentration was determined as 500 ng/ml from the curve estimation by SPSS 17.0. And the monoclonal antibody concentration and test serum dilution were determined as >0.5ug/ml and 1:100, respectively. The prototype has been employed to assess the reactivity of fanC antigen with the reference vaccinated bovine sera. The difference has been observed between the first and boosted vaccinated groups with Tukey's test and boosted vaccinated group was better than the primary vaccinated ones and the difference was important (p<0.05). In sandwich ELISA optimization for bovine IgG detection, 3 blocking solutions and PBS with no blocking solution of PBS were tested. Of all the blocking reagents including fish gelatine, skimmed milk, and bovine serum albumin were found reactive. A calibrator was used throughout the optimization process to asses the linearity. Analytic sensitivity of sandwich ELISA was 150-800 ng/ml. Precision was within the range with a 10% coefficient variation. However, test validation with the samples and reference sera was not evaluated. Therefore, the prototype optimized in this study should be evaluated in field and reference samples. While the sandwich ELISA optimization has been succesfully completed, the validation was not confirmed due to the non-availability of sufficient reference samples. Although the diagnostic properties of the tests have not been completed the prototypes can now be evaluated in cases with neonatal calf diarrhea and passive transfer failure, or with experimental data.
Benzer Tezler
- Atların EHV-1/4 enfeksiyonunun serolojik tanısı için in-House ELISA geliştirilmesi
Development of in-House ELISA for serological diagnosis of EHV-1/4 infection in horses
İLKER ŞAHİNKESEN
Doktora
Türkçe
2024
Veteriner HekimliğiAnkara ÜniversitesiVeterinerlik Viroloji Ana Bilim Dalı
PROF. DR. SEVAL BİLGE DAĞALP
- İdrarda LC-MS/MS ile nitel ve nicel NPS analizi için işletme içi yöntem geliştirilmesi ve validasyonu
Development and validation of an in-house method for qualitative and quantitative NPS analysis in urine using LC-MS/MS
KEMAL KURAL
- Gıda, yem ve tohumda multipleks GDO tarama testi geliştirilmesi ve validasyon çalışmaları
Development and validation of multiplex GMO screening test in food, feed and seed
NİHAL AKMAN
Yüksek Lisans
Türkçe
2022
Gıda MühendisliğiBursa Teknik ÜniversitesiGıda Mühendisliği Ana Bilim Dalı
DR. ÖĞR. ÜYESİ ADNAN FATİH DAĞDELEN
- Kolorimetrik yöntem ile 5-hidroksimetilfurfural'ın kantitatif tayini ve kağıt tabanlı tek kullanımlık belirteç üretimi
Colorimetric quantitative determination of 5- hydroxymethylfurfural and development of a disposable indicator based on paper
AYŞEGÜL BEŞİR
Doktora
Türkçe
2022
Gıda MühendisliğiOndokuz Mayıs ÜniversitesiGıda Mühendisliği Ana Bilim Dalı
PROF. DR. FEHMİ YAZICI
- Development and implementation of a local algebraic transition model in k-w-SST formulation
k-w-SST modeli için yerel cebirsel türbülansa geçiş modeli geliştirilmesi ve uygulanması
BİLAL OKUMUŞ
Yüksek Lisans
İngilizce
2023
Makine MühendisliğiOrta Doğu Teknik ÜniversitesiMakine Mühendisliği Ana Bilim Dalı
DR. ÖĞR. ÜYESİ ÖZGÜR UĞRAŞ BARAN
DR. ÖĞR. ÜYESİ ONUR BAŞ