DNA taşıyıcı sistemler ile gen tedavisi üzerinde çalışmalar
Studies on gene therapy by DNA delivery systems
- Tez No: 80830
- Danışmanlar: PROF. DR. A. FİLİZ ÖNER (BULUT), DOÇ. DR. KEVSER PİŞKİN
- Tez Türü: Yüksek Lisans
- Konular: Eczacılık ve Farmakoloji, Pharmacy and Pharmacology
- Anahtar Kelimeler: Gen tedavisi, Katyonik lipid : DNA kompleksleri, Transformasyon, Zwitteriyonik ve noniyonik surfaktanlar, Aminoasitler iv, Amino asitler, DNA, Gene therapy, Cationic lipid : DNA complexes, Transformation, Zwitterionic and nonionic surfactants, Aminoacids, Amino acids, DNA
- Yıl: 1999
- Dil: Türkçe
- Üniversite: Hacettepe Üniversitesi
- Enstitü: Sağlık Bilimleri Enstitüsü
- Ana Bilim Dalı: Farmasötik Biyoteknoloji Ana Bilim Dalı
- Bilim Dalı: Belirtilmemiş.
- Sayfa Sayısı: Belirtilmemiş.
Özet
ÖZET Genetik kökenli hastalıklar üzerinde süregelen çalışmalar giderek artmakta olup, çalışmalar ex-vivo ve in-vivo gen tedavisi olmak üzere iki başlık altında yapılmaktadır. Yöntemlerden ex-vivo gen tedavisi zorluklan nedeniyle tercih edilmemektedir. Uygulaması çok daha kolay olan in-vivo gen tedavisi bir farmasötik formülasyon uygulaması şeklinde olduğu için diğer yöntemlere üstünlükler taşımaktadır. İn-vivo gen tedavisinde en önemli sorunlarından birisi, terapötik genler için uygun taşıyıcı ilaç formülasyonların geliştirilmesidir. Bugüne kadar basan ile uygulanan sistemler arasında en yaygın olarak araştırılan katyonik lipid-DNA kompleksleri gen tedavisi amacına yönelik olarak çalışılan başlıca formülasyonlardır. Bu tez çalışmasında, plazmid ve genomik DNA için katyonik lipid taşıyıcı sistemler hazırlanarak, formülasyonlar üzerinde etkili parametreler ve hücre transformasyon etkinliği değerlendirilmiştir. E.coli XL-1 blue hücrelerinden, Ampisilin'e karşı direnç oluşturan beta- laktamaz geni içeren pBluescribt plazmid DNA ve koyun kanından ise genomik DNA izole edilerek biyolojik materyal sağlanmıştır. Elde edilen plazmid ve genomik DNA'nın miktar ve saflık tayinleri spektrofotometrik olarak yapılmıştır. Formülasyonlarda ESCORTT katyonik lipid karışımı kullanılarak katyonik lipid-DNA kompleksleri hazırlanmış, farklı DNAılipid oranlarının ve inkübasyon sürelerinin komplekslerin oluşumuna etkisi değerlendirilmiş ve her iki parametrenin de kompleks oluşumu üzerinde etkili olduğu sonucuna varılmıştır. Farklı oranlarda DNAılipid kompleksleri hazırlanarak içerisindeki DNA'nın, DNaz I varlığındaki stabilitesine bakılmış ve katyonik lipid oranı fazla olan komplekslerdeki DNA'nın nükleaz enzimine karşı daha dayanıldı olduğu görülmüştür. E.coli XL-1 blue hücreleri 1:2, 1:1, 1:0.5, 1:0.25 ve 1:0.125 a/a oranlarında hazırlanan DNAkatyonik lipid kompleksleri ile transforme edilmiş ve katyonik lipidlerin transformasyon verimi üzerindeki etkisi değerlendirilmiştir. 1:1 a/a DNA: katyonik lipid oranına kadar, katyonik lipid miktarı arttıkça transformasyon verimi artmıştır. 1:1 a/a oranından sonra katyonik lipidlerin toksisiteleri nedeniyle transformasyon verimi azalmıştır. Noniyonik ve zwitteriyonik surfaktanlar ve aminoasitler içeren plazmid DNA : katyonik lipid formülasyonlarının transformasyon verimleri farklı yöntemler geliştirilerek incelenmiş ve en etkin formülasyonun plazmid DNA : katyonik lipid (1:1 a/a) + Zwittergent® (3-08) olduğu görülmüştür.
Özet (Çeviri)
ABSTRACT Recently, studies about genetic disorders, which are carried out under ex-vivo and in-vivo gene therapy categories are increasing. Ex-vivo gene therapy is not preferred, due to the difficulties of the method. In-vivo gene therapy, is an easy method and is more advantages than the other methods since, the method is administration of a gene in a pharmaceutical dosage form. One of the most important problems in the in-vivo gene therapy is to develop effective carrier pharmaceutical formulations for therapeutic genes. Cationic lipid - DNA complexes are the most widely investigated succesful systems among others studied for the purpose of gene therapy. In this study, cationic lipid carrier systems have been prepared for plasmid and genomic DNA and then effective parameters on formulations and cell transformation efficiences have been evaluated. The biological material was provided by isolating pBluescribt plasmid DNA (carries P-lactamase gene and resistant to Ampisilin) from E-coli XL-1 blue cells and by isolating genomic DNA from sheep blood. Assays and purity determinations on the isolated plasmid DNA and genomic DNA, were done spectrofotometrically. In these formulations; cationic lipid-DNA complexes have been prepared by using ESCORTT cationic lipid mixture, and effects of DNA:Lipid ratios and incubation times on the formation of the complexes have been evaluated. Both of the parameters have been found effective on the complex formation. Stability of the DNA was investigated by using different DNA:Lipid complexes in the presence of DNase I enzyme. The DNA in the complexes with higher cationic lipid contents was found more resistant to nuclease digestion. E-coli XL-1 Blue Cells,were transformed with DNALipid complexes prepared at 1:2, 1:1, 1:0.5, 1:0.25 and 1:0.125 w/w ratios, and effect of the lipid on transformation efficiency was evaluated. Transformation efficiency of the complexes increased as the cationic lipid ratio increased, but above l:l(a/a) DNAlipid amounts transformation efficiency decreased due to the toxicity of the lipids. Transformation efficiency of the plasmid DNA: cationic lipid formulations; which include nonionic and zwitterionic surfactants and aminoacids; studied by applying various methods, and among investigated formulations plasmid DNA: cationic lipid (1:1 a/a) + Zwittergent®(3-08) formulation has been found to be the most effective one.
Benzer Tezler
- Gen tedavisine yönelik, katyonik yüzey etkin madde içeren emülsiyon şeklinde taşıyıcı sistem üzerinde çalışmalar
Studies on a carrier system of emulsion containing a cationic surfactant for the purpose of gene therapy
K. DİLŞAD BARUT
Yüksek Lisans
Türkçe
2001
Eczacılık ve FarmakolojiHacettepe ÜniversitesiFarmasötik Biyoteknoloji Ana Bilim Dalı
YRD. DOÇ. DR. F. FİLİZ ARI
PROF. DR. FİLİZ ÖNER
- DNA'nın aljinatla kuvvetlendirilmiş kitozan boncuklar içinde enkapsülasyon ve serbestleşme özelliklerinin incelenmesi
Investigation of encapsulation and release properties of DNA encapsulated in alginate reinforced chitosan beaos
CENK ARAL
Yüksek Lisans
Türkçe
1999
Eczacılık ve FarmakolojiMarmara ÜniversitesiFarmasötik Biyoteknoloji Ana Bilim Dalı
DOÇ. DR. JULİDE AKBUĞA
- İnsülinin oral mikroemülsiyon formülasyonunun geliştirilmesi ve in vivo olarak değerlendirilmesi
Development of oral microemulsion formulation of insulin and in vivo evaluation
AYŞE ÇİLEK
Yüksek Lisans
Türkçe
2001
Eczacılık ve FarmakolojiGazi ÜniversitesiFarmasötik Teknoloji Ana Bilim Dalı
PROF.DR. NEVİN ÇELEBİ
- Sitozin-adenin tekrar polimorfizmi ile“Duchenne/Becker Muscular Dystrophy”(DMD/BMD) ailelerinde bağlantı analizi yapılarak taşıyıcı tespiti
Carrier detection in Duchenne and Becker Muscular Dystrophy (DMD/BMD) families by linkage analysis using CA repeat polymorphisms
HÜNER TALAT ARİF AĞAOĞLU
Yüksek Lisans
Türkçe
2000
Tıbbi Biyolojiİstanbul ÜniversitesiGenetik Ana Bilim Dalı
DOÇ. DR. NİHAN ÜNALTUNA
- Frajil-x skorlama sisteminin frajil-x sendromlu olguları saptamadaki etkinliği
Başlık çevirisi yok
MEHTAP ATAMAN