Hepatit B virüs yüzey antijeninin (HBsAg) saptanmasına yönelik HBsAg-ELISA tanı kiti yapılması ve değerlendirilmesi
Production and evaluation of HBsAg-ELISA diagnostic kit for detection of hepatitis B virus surface antigen (HBsAg)
- Tez No: 79719
- Danışmanlar: DOÇ. DR. CEMALETTİN AYBAY
- Tez Türü: Tıpta Uzmanlık
- Konular: Mikrobiyoloji, Microbiology
- Anahtar Kelimeler: Enzime bağlı immünosorbent testi, Hepatit B virüsü, Hepatit B yüzey antijenleri, Enzyme-linked immunosorbent assay, Hepatitis B virus, Hepatitis B surface antigens
- Yıl: 1999
- Dil: Türkçe
- Üniversite: Gazi Üniversitesi
- Enstitü: Tıp Fakültesi
- Ana Bilim Dalı: Mikrobiyoloji Ana Bilim Dalı
- Bilim Dalı: Belirtilmemiş.
- Sayfa Sayısı: Belirtilmemiş.
Özet
51 6. ÖZET Hepatit B infeksiyonunun serolojik tanısında sıklıkla ELISA testi kullanılmaktadır. Ancak tanı kitlerinin tamamı yurtdışından temin edilmektedir. Bu çalışmada niteliksel bir HBsAg-ELISA testinin yapılması planlandı. Bu amaçla, laboratuvanmızda daha önce üretilmiş olan anti-HBs IgM ve anti-HBs IgGl salgılayan hibridoma hücrelerinden elde edilen monoklonal antikorlar kullanıldı. Anti-HBs IgM ve anti-HBs IgGl monoklonal antikorlar hem“adw”ve“ayw”subtip antijenlere hem de“ad”+“ay”kaplı katı faza bağlanmaktadır. Anti-HBs IgM, fare asit sıvısından“size exclusion chromatography”sonrası bulaş IgG eliminasyonu için protein G kolonundan geçirilerek saflaştınldı. Anti-HBs IgGl için doğrudan hibridoma kültür süpernatanı kullanıldı. HBsAg-ELISA testi için 96 çukurlu plaklar anti-HBs IgM ile kaplandı. Serum örneklerinin inkübasyonu sonrasında çukurlara anti-HBs IgGl eklendi. Anti-HBs IgM- HBsAg-anti-HBs IgGl bağlanması ise peroksidaz işaretli“anti-mouse IgG”kullanılarak saptandı. Kemiluminesan sisteme dayalı Access otoanalizör ile HBsAg (+) olduğu saptanan 228, HBsAg (-) olan 72 serum örneği HBsAg ELISA testi ile tekrar çalışılarak karşılaştırma yapıldı. Laboratuvanmızda hazırlanan HBsAg-ELISA testinin tanısal duyarlılığı %96,5, tanısal özgüllüğü ise %100 olarak belirlendi. Sonuç olarak hazırlanan HBsAg-ELISA testinin tanısal duyarlılık oranı yükseltildikten sonra serolojik tanı amacıyla kullanılabileceği öngörüldü.
Özet (Çeviri)
52 7. SUMMARY ELISA is frequently used for serological diagnosis of Hepatitis B infection. However, all diagnostic kits are purchased from abroad. In this study we aimed to produce a qualitative HBsAg-ELISA test. Monoclonal antibodies purified from anti-HBs IgM or anti-HBs IgGl producing hybridoma cells, which were produced in our laboratory previously, were used for this purpose. Anti-HBs IgM and anti-HBs IgGl monoclonal antibodies reacted with“adw”and“ayw”subtype HBsAg and they bound to“ad”+“ay”coated solid phase as well. Anti-HBs IgM was purified from murine ascites fluid by using size-exclusion chromatography followed by protein G affinity chromatography in order to eliminate IgG contamination. Anti-HBs IgGl was directly used as the culture supernatant of hybridoma cells. High binding capacity 96 well plates were coated with anti-HBs IgM to capture HBsAg. After incubation with serum samples, anti-HBs IgGl was added into wells. AntiHBs IgM-HBsAg-antiHBs IgGl chain was detected by using peroxidase-labeled anti-mouse IgG. 228 HBsAg (+) and 72 HBsAg (-) serum samples, characterized by a chemiluminescence-based Access® autoanalyser, were re-tested with HBsAg-ELISA and the results were compared. Diagnostic sensitivity and diagnostic specificity of our lab-made HBsAg ELISA test were found to have ratios as 96,5% and 100% respectively. As a result, it was predicted that this HBsAg-ELISA test could be used for serologic diagnosis after an improvement in its diagnostic sensitivity.
Benzer Tezler
- Hepatit B virus yüzey antijeninin baculovirus sistemi ile böcek (trichoplusia ni) hücre kültüründe ekspresyonu
Expression of hepatitis B virus surface antigen in insect cells (trichoplusia) with a baculovirus system
MEHMET YAPAR
Doktora
Türkçe
2000
MikrobiyolojiGataMikrobiyoloji ve Klinik Mikrobiyoloji Ana Bilim Dalı
DOÇ.DR. AYHAN KUBAR
- Kronik B hepatit patogenezinde doku antijenlerinin rolü
Başlık çevirisi yok
MUSTAFA KEMAL BALCI
Tıpta Uzmanlık
Türkçe
1992
HematolojiAnkara Üniversitesiİç Hastalıkları Ana Bilim Dalı
PROF. DR. MURAT DUMAN
- Kronik Hepatit B'li hastaların karaciğerinde viral antijenlerinin immunohistokimyasal yöntemle gösterilmesinin tanısal değeri
The Diagnostic value of immunohistochemical detection of hepatic virus antigens in liver of patients with chronic hepatitis B
GÜNAY TUNCER
Tıpta Uzmanlık
Türkçe
1997
Enfeksiyon Hastalıkları ve Klinik MikrobiyolojiAnkara ÜniversitesiKlinik Bakteriyoloji ve Enfeksiyon Hastalıkları Ana Bilim Dalı
PROF. DR. İSMAİL BALIK
- Hepatit B virüsüyle enfekte sağlıklı taşıyıcılarda hepatit B virüs yüzey antijeni ile intradermal aşı tedavisi
Intradermal vaccine therapy in chronic healthy hepatitis B virus carriers
OĞUZ DİKBAŞ
Tıpta Uzmanlık
Türkçe
2000
Enfeksiyon Hastalıkları ve Klinik Mikrobiyolojiİstanbul Üniversitesiİç Hastalıkları Ana Bilim Dalı
PROF.DR. YILDIRIM AKTUĞLU
- Kronik B hepatitinde virüs antijenlerinin dokudaki yerleşim özellikleri; Viral replikasyon ve iltihabi aktivite ile ilişkisi
Patterns of cellular localization of viral antigens in chronic hepatitis B; Correlation with viral replication and inflammatory activity
CEM LEBLEBİCİ