Live cell imaging of redox mediated nrf2 activity using transcription factor based biosensors and chemogenetic tools
Transkripsiyon faktorü tabanlı biyosensorler ve kemogenetik araçlar kullanarak redoks bağımlı nrf2 aktivasyonunun canlı hücrelerde görüntülenmesi
- Tez No: 765128
- Danışmanlar: PROF. DR. LEVENT ÖZTÜRK, DR. ÖĞR. ÜYESİ EMRAH EROĞLU
- Tez Türü: Yüksek Lisans
- Konular: Biyoteknoloji, Biyomühendislik, Biyokimya, Biotechnology, Bioengineering, Biochemistry
- Anahtar Kelimeler: Auranofin, Biyosensörler, Hidrojen peroksit, Nükleer faktör, Auranofin, Biosensors, Hydrogen peroxide, Nuclear factor
- Yıl: 2022
- Dil: İngilizce
- Üniversite: Sabancı Üniversitesi
- Enstitü: Fen Bilimleri Enstitüsü
- Ana Bilim Dalı: Moleküler Biyoloji, Genetik ve Biyoteknoloji Ana Bilim Dalı
- Bilim Dalı: Belirtilmemiş.
- Sayfa Sayısı: Belirtilmemiş.
Özet
Nükleer faktör eritroid 2-ilişkili faktör 2 (Nrf2), (pato)fizyolojik oksidan aracılı tepkileri düzenlemek için çoklu antioksidan tepki elemanına bağlı genlerin ekspresyonunu kontrol eden bir transkripsiyon faktörüdür. Auranofin altın(I) içeren bir ilaçtır ve bu ilacın farmakolojik aktivitesi, Nrf2 aktivasyonunu tetikleyebilmektedir. Bununla birlikte, auranofin aracılı Nrf2 aktivasyonunun altında yatan mekanizma belirsizliğini korumaktadır. Ayrıca auranofinin hücrede ROS üretimini de arttırdığı bilinmektedir. Bu çalışmada ROS üretiminin, özellikle hidrojen peroksitin (H2O2), auranofin aracılı Nrf2 aktivasyonu üzerindeki rolünü araştırdık. Ek olarak bu çalışmamızda, tek hücrelerde ve dokularda ROS seviyelerinin üretilmesine izin veren ve yüksek uzaysal-zamansal çözünürlüğe sahip kemogenetik D-amino asit oksidaz (DAAO) yaklaşımlarından yararlandık ve Nrf2 aktivasyonunu görselleştirmek için pLG4.mCherryNrf2 adlı transkripsiyon faktörü tabanlı biyosensör kullandık. HyPer olarak adlandırılan genetik olarak kodlanmış biyosensörü kullanarak, farklı hücre altı lokallerinde H2O2'yi izledik. Bulgularımız, auranofinin Nrf2 aktivitesini tetiklerken hücre içi H2O2 üretimini indüklediğini, ancak H2O2'nin hücreye dışarıdan verilmesi ve hücre içinde H2O2 üretilmesi durumunda Nrf2 aktivasyonunun değişmediğini gösterdi.
Özet (Çeviri)
Nuclear factor erythroid 2-related factor 2 (Nrf2) controls the expression of multiple antioxidant response element dependent genes to regulate the (patho)physiological oxidant mediated responses. Auranofin is a gold(I) containing drug of which the pharmacological activity is associated with its ability to induce Nrf2 activation. However, the mechanism of auranofin-mediated Nrf2 activation remains unclear. Auranofin also increases ROS production in the cell. We investigated the role of hydrogen peroxide (H2O2) on auranofin-mediated Nrf2 activation. In this study, we exploited chemogenetic D-amino acid oxidase (DAAO) approaches that permit the generation of H2O2 in single cells with high spatio-temporal resolution. we employed transcription factor-based biosensor called pLG4.mCherryNrf2 to visualize Nrf2 activation. By using genetically encoded biosensor HyPer7, we monitored H2O2 in different subcellular locales. Our findings showed that auranofin induces intracellular production of H2O2 while triggering Nrf2 activity, however, bolus administration of exogenous H2O2 or chemogenetically induced endogenous H2O2 generation did not change Nrf2 activation. Our findings draw new picture of oxidative stress dependent Nrf2 activation in cultured cells.
Benzer Tezler
- Glioblastoma tedavisinde kombin ilaç yüklü katmanlı nanolif yüzeylerin tasarımı ve kullanılabilirliğinin analizi
Design and analysis of usability of combined drug loaded layered nanofiber surfaces in glioblastoma treatment
MELİS ERÇELİK
Doktora
Türkçe
2024
GenetikBursa Uludağ ÜniversitesiTıbbi Biyoloji Ana Bilim Dalı
PROF. DR. BERRİN TUNCA
- Investigation of hydrogen peroxide and nitric oxide signaling utilizing genetically encoded biosensors
Genetik olarak kodlanmış biyosensörler kullanılarak hidrojen peroksit ve nitrik oksit sinyalizasyonunun incelenmesi
HAMZA YUSUF ALTUN
Doktora
İngilizce
2024
BiyokimyaSabancı ÜniversitesiMühendislik ve Doğa Bilimleri Ana Bilim Dalı
PROF. DR. MEHMET SELİM ÇETİNER
- Investigation on lithium salt-surfactant lyotropic liquid crystalline mesophases: Characterization, role of water, and electrochemical behaviors
Lityum tuzlarının oluşturduğu liyotropik sıvı kristal fazlar: Karakterizasyon, suyun rolü, ve elektrokimyasal davranışlar
EZGİ YILMAZ TOPUZLU
Doktora
İngilizce
2021
Kimyaİhsan Doğramacı Bilkent ÜniversitesiKimya Ana Bilim Dalı
PROF. DR. ÖMER DAĞ
DOÇ. DR. BURAK ÜLGÜT
- Characterization and fine-tuning of chemogenetic tools for high-resolution multiparametric live-cell imaging using genetically encoded biosensors
Kemogenetik araçların, genetik kodlanmiş biyosensörler kullanarak, yüksek çözünürlüklü multi-parametrik canlı hücre görüntülemeleri için karakterizasyonu ve optimizasyonu
YUSUF CEYHUN ERDOĞAN
Yüksek Lisans
İngilizce
2021
BiyokimyaSabancı ÜniversitesiMoleküler Biyoloji, Genetik ve Biyoteknoloji Ana Bilim Dalı
PROF. DR. LEVENT ÖZTÜRK
DR. ÖĞR. ÜYESİ EMRAH EROĞLU
- Shedding new light on intracellular signaling pathways -establishing live-cell fluorescence imaging techniques using genetically encoded fluorescent biosensors
Genetik kodlanmış floresan biyosensörler yardımıyla floresan görüntüleme teknikleri kullanılarak tek hücre analiz yaklaşımları
HAMZA YUSUF ALTUN
Yüksek Lisans
İngilizce
2020
BiyokimyaSabancı ÜniversitesiMoleküler Biyoloji, Genetik ve Biyoteknoloji Ana Bilim Dalı
DR. EMRAH EROĞLU