Identification of inositol 1,4,5-trisphosphate (IP3) receptors in wheat (Triticum aestivum)
Buğdayda (Triticum aestivum) inositol 1,4,5-üçfosfat (IP3) reseptörlerinin tanımlanması
- Tez No: 76063
- Danışmanlar: DOÇ. DR. HÜSEYİN A. ÖKTEM
- Tez Türü: Doktora
- Konular: Biyoloji, Biology
- Anahtar Kelimeler: Buğday, Fosfatlar, Reseptörler, İnositol, Wheat, Phosphates, Receptors, Inositol
- Yıl: 1998
- Dil: İngilizce
- Üniversite: Orta Doğu Teknik Üniversitesi
- Enstitü: Fen Bilimleri Enstitüsü
- Ana Bilim Dalı: Biyoloji Ana Bilim Dalı
- Bilim Dalı: Belirtilmemiş.
- Sayfa Sayısı: Belirtilmemiş.
Özet
Inositol 1,4,5-üçfosfat (IP) hücre içindeki stoklardan kalsiyumun hareketlerini sağlayan fosfoinositol sisteminin ikincil habercisidir. Hayvan IP reseptörlerin bağlanma özelliklerinin üzerine çok çalışılmış olmasına rağmen, bugüne kadar bitkilerdeki IP reseptörlerinin profiliyle ilgili sadece bir literatür bulunmaktadır. Bu çalışmada, IP reseptörlerin 15 günlük buğday fidelerinin yaprak ve kök dokularından elde edilmiş hücre zarı preparatlarında ve deterjan ile çözünür hale getirilmiş mikrozomal 3 fraksiyonlarda, [3 H]IP bağlanma deneyleri ile araştırılmıtır. Hücre zarı ve deterjan ile çözündürülmüş fraksiyonlarda 4°C de yapılan deneylerde [ H]IP özgün bağlanmasının denge haline yaprak dokusunda 2 dakikada, ve kökde 4 dakikada ulaştığı gözlenmiştir. Hücre zarı fraksiyonlarında çözündürülme işlemi 4°C de %1.5 Triton X-100 kullanarak 30 dakikadasağlanmıştır. [3H]IP bağlanmasının %1.5 Triton X-100 ile kısmen engellendiği olduğu görülmüştür. Diğer taraftan, deterjan derişimi, %0.1'e düşürüldüğünde solübilize fraksiyonlarda [ H]IP3 bağlanmasının arttığı gözlenmiştir. [ H]IP özgün bağlanmasının yaprakda ve kökde, pH' ya bağımlı olduğu görülmüş. En yüksek bağlanma değerinin pH 8.0 de elde edildiği gözlenmiş, bu pH değerlerinin altında ve üstünde çok düşük bağlanma değerleri elde edilmiştir. Bağlanma bölgeleri, yaprağın hücre zarı ve deterjan ile çözündürülmüş fraksiyonlarında, düşük moleküler ağırlığa sahip heparin (3000) kullanarak tanımlanmıştır. Sonuçlar heparin eklendiği zaman [ H]IP3' ün özgün bağlanma olduğunu göstermiştir. Farklı derişimlerde Ca2+ (IO^M^xIO^M), Mg2+ (10“5M-10”2M), ve ATP (10“5M-10”M), kullanılanarak, buğday'ın yaprağı ve kökünden deterjan ile çözündürülmüş fraksiyonlar üzerinde yapılan bağlanma deneyleri yapılmıştır. Elde edilen sonuçlar sıçan serebelümü hücre zarındaki 3 reseptörlerle yapılan [ H]IP3 bağlanma deneylerinin sonuçlarıyla karşılaştırılmıştır. bu reseptörler aynı zamanda IP bağlanma bölgelerinin araştırmasında bir model sistem olarak kullanılmaktadır. Yapılan bağlanma 3 deneylerinde, [ H]IP3 bağlanmasının derişime bağlı olarak engellendiği görülmüştür. Bu çalışma, buğday'da da IP reseptörlerin bulunduğunu göstermekte, aynı zamanda IP1 ün bitki hücrelerinde ikincil haberci olduğuna işaret etmektedir.
Özet (Çeviri)
Inositol 1,4,5-trisphosphate (IP3) is a second messenger of the 2+ phosphoinositol system which can mobilize Ca2+ from intracellular stores. Allthough. binding characteristics of animal IP3 receptors have been studied extensively, up-to-date there is only one literature study concerning the binding profiles of IP3 receptors in plants. In the present study, IP3 receptors have been identified in crude membrane preparations and detergent- solubilized microsomal fractions from leaf and root tissues of 15-days old 3 wheat seedlings employing 3 [ H]IP3 binding assays. Equilibrium binding of 3 3 [ H]IP3 was reached after 2 minutes of incubation in leaf and 4 minutes in root for both crude membrane and detergent-solubilized fractions at 4°C. Solubilization was achieved by the treatment of crude membranes fractionswith 1.5% (v/v) Trition X-100 for 30 minutes at 4°C. [3 H]IP3 binding appeared to be partially inactivated by 1.5% Triton X-100, however, when the 3 detergent concentration was reduced to 0.1% (v/v), [3 H]IP3 binding to 3 solubilized fraction was retained. Specific binding of [ H]IP3 was found to be pH-dependent, in both leaf and root tissues. At neutral or acidic pH values, 3 very little [3 H]IP3 binding was observed and the optimum pH was found to be 8.0. The binding sites were further identified by using low molecular weight 3 (3000) heparin in [3 H]IP3 binding assays to both crude and detergent- solubilized fractions of leaf tissue. The results showed considerable amount 3 of [3 H]IP3 specific binding by the addition of heparin. Furthermore, binding experiments were conducted in the presence of varying concentrations of Ca^lO^M - 2x10_3M), Mg2+ (10*5M-10*2M), and ATP (10“5M-10”3M), on the 3 3 [ H]IP3 binding sites in detergent-sol ubi I ized microsomal fractions isolated from leaf and root tissues of wheat. The results were compared with the 3 3 [ H]IP3 binding results to the receptors in crude membrane preparations from rat cerebellum, which provided a usefull model system for studying IP3 binding sites. Under varying concentrations of Ca2+, Mg2+, and ATP, the 3 binding of 3 [ H]IP3 to its receptor were inhibited in detergent-solubilized fractions in both leaf and root tissues as well as in cerebellar membranes. The presented results were the first direct evidence for the presence of IP3 receptors in wheat, and would support the idea that IP3 functions as a second messenger in plant cells.
Benzer Tezler
- Identification of a theoretical framework for the natural-essential properties of settlements bound to human identity
Yerleşmelerin doğal-özge özelliklerinin insan kimliğine bağlı olarak kavramsal çerçevesinin tanımlanması
YUNUS EŞKİNAT
Yüksek Lisans
İngilizce
1990
MimarlıkOrta Doğu Teknik ÜniversitesiMimarlık Ana Bilim Dalı
DOÇ. DR. HALUK PAMİR
- Identification of motives for language study at the Police Academy
Başlık çevirisi yok
NECAT KUMRAL
Yüksek Lisans
İngilizce
1990
Eğitim ve Öğretimİhsan Doğramacı Bilkent ÜniversitesiYabancı Dil Olarak İngilizce Öğretimi Ana Bilim Dalı
DR. AARON S. CARTON
- Sakaryabaşında yetiştirilen aynalı sazan ve yerli sazan populasyonlarında hemoglobin tiplerinin ve polimorfiziminia belirlenmesi
Identification of hemoglobin types and the study of polymorphism in mirror carp and common carp populations which are raised in Sakaryabaşı
NESRİN DOĞAN
- Kandidoz yapan candidaların salmonella cholerae suis 211 antiserumu yardımı ile tiplendirilmesi
Identification of candidas cause to candidiasis by using salmonella cholerae suis 211 immuno sera
SERPİL EKENER
- Identification of the reading comprehension needs of the freshman students at the university of Gaziantep
Başlık çevirisi yok
MEHMET SEMİH SUMMAK
