Regeneration and agrobacterium mediated transformation studies in different tomato cultivars
Farklı domates kültürlerinde rejenerasyon ve agrobacteriuma dayalı transformasyon çalışmaları
- Tez No: 75764
- Danışmanlar: DOÇ. DR. HÜSEYİN AVNİ ÖKTEM
- Tez Türü: Yüksek Lisans
- Konular: Biyoloji, Biology
- Anahtar Kelimeler: Domates, Rejenerasyon, Agrobacterium, Transformasyon, neomisin fosfotransferase-II (npt-II), GUS. vı, Dönüşüm, Tomato, Regeneration, Agrobacterium, Transformation, neomycin phosphotransferase-II (npt-II), GUS
- Yıl: 1998
- Dil: İngilizce
- Üniversite: Orta Doğu Teknik Üniversitesi
- Enstitü: Fen Bilimleri Enstitüsü
- Ana Bilim Dalı: Biyoloji Ana Bilim Dalı
- Bilim Dalı: Belirtilmemiş.
- Sayfa Sayısı: Belirtilmemiş.
Özet
ÖZ FARKLI DOMATES (Lycopersicon esculentum Mill) KÜLTÜRLERİNDE REJENERASYON VE AGROBACTERIUMA DAYALI TRANSFORMASYON ÇALIŞMALARI BÜLBÜL, Yeter Yüksek Lisans, Biyoloji Bölümü Tez Yöneticisi: Doç. Dr. Hüseyin Avni ÖKTEM Ortak Tez Yöneticisi: Prof. Dr. Meral YÜCEL Ağustos 1998, 79 sayfa Bir bitki türünde, optimize edilmiş bir rejenerasyon yöntemi ve uygun bir gen aktarım sistemi, transjenik bitkilerin eldesi için gerekli olan en önemli öğelerdir. Sunulan çalışma, domates bitkisinde (Lycopersicon esculentum) rejenerasyon ve Agrobacterium 'a dayalı bir gen transfer sistemi oturtturmayı amaçlamıştır. Regenerasyon çalışmaları WC156, Pearson, H2274 ve SC2121 olmak üzere dört farklı domates çeşidinde yürütülmüştür. 10-20 günlük kotiledon, hipokotil ve toprakta büyümekte olan 2-3 aylık bitkilerden elde edilen yaprak diskleri olmak üzere üç farklı eksplant türü rejenerasyon yetenekleri açısından incelenmişlerdir.Bütün eksplant tipleri, 2.5 mg/L benzol adenine (BA) ve 0.2 mg/L indolasetik asid (IAA) içeren MS ortamında (MS tuzları, Gamborg vitaminleri, %3 sükroz (w/v), %0.7 agar, pH 5.7) kallus oluşturabilmişlerdir. Her dört çeşit domates türünün kotiledon eksplantları, 30-45 gün içerisinde iyi gelişmiş gövde oluşturmuşlardır. Öte yandan, diğer eksplantlarda, gövde oluşturma kapasitesi domates kültürünün türüne göre değişmektedir. Her kültürün kotiledon dokusundan gelişen gövdeler, kök oluşturma ortamında (MS tuzlan ve vitaminleri, %3 sükroz (w/v), %0.7 agar ve 0.1 mg/L IAA, pH 5.7) kök gelişimi göstermişlerdir. Köklenen bitkiler toprağa alınmış ve sera ortamında büyümüşlerdir. Rejenerasyon prosesi 5-6 aylık bir süreçte gerçekleşmektedir. Transformasyon çalışmaları, npt-II (kanamycin direnci) ve uida (GUS) genlerinin bulunduğu pGUSINT binary vektörünü taşıyan Agrobacterium tumefaciens' iri EHA105 susu kullanılarak yaprak diskleri, kotiledon ve hipokotillerde yürütülmüştür. Kontrol eksplantlara kıyasla, Agrobacterium ile muamele edilen eksplantlar, 50 mg/L kanamisinin varlığında daha yavaş kallus oluşumu ve daha az gövde oluşumu sergilemişlerdir. Sadece kotiledon eksplantlan kanamisine dirençli kallus oluşumu ve histokimyasal boyama yöntemiyle pozitif GUS aktivitesi göstermişlerdir.
Özet (Çeviri)
ABSTRACT REGENERATION AND AGROBACTERIUM MEDIATED TRANSFORMATION STUDIES IN DIFFERENT TOMATO (Lycopersicon esculentum Mill) CULTIVARS BTJLBUL, Yeter M.Sc., Department of Biology Supervisor: Assoc. Prof. Dr. Hüseyin Avni ÖKTEM Co-Supervisor: Prof. Dr. Meral YÜCEL August 1998, 79 pages An optimized regeneration protocol and a suitable transformation technique is a necessity for obtaining transgenic plants in a given plant species. This study aims to establish a regeneration and Agrobacterium based transformation system in cultivated tomato {Lycopersicon esculentum). Regeneration studies were carried out on four different tomato cultivars namely WC156, Pearson, H2274 and SC2121. Three different explants, namely aseptically grown 10-20 days old cotyledons, hypocotyls and leaf disks from 2-3 months old soil grown tomato plants were analyzed for their regeneration potencies.All explant types were capable of forming callus in MS based media (MS salts, Gamborg's vitamins, 3% sucrose (w/v), 0.7% agar, pH 5.7) supplemented with 2.5 mg/L benzyl adenine (BA) and 0.2 mg/L indoleacetic acid (IAA). Cotyledon explants from all four types of tomato cultivars formed well-developed shoots in 30-45 days. Shooting response in other explants, on the other hand, showed cultivar dependent variations. Shoots regenerated from cotyledon tissue of all cultivars showed root development in root inducing media (MS salts and vitamins, 3% sucrose (w/v), 0.7% w/v agar and 0.1 mg/L IAA, pH 5.7). Rooted plants transferred to soil and grown to maturity under greenhouse conditions. The entire regeneration process takes about 5-6 months. Transformation studies were carried out on leaf disks, cotyledon, and hypocotyl explants by using Agrobacterium tumefaciens EHA105 strain harbouring the pGUSINT binary vector carrying coding sequences for npt-II (kanamycin resistance) and uida (GUS) genes. Compared to controls, Agrobacterium treated explants exhibited slower callus formation and poor shooting response in the presence of 50 mg/L kanamycin. Only cotyledon explants gave rise to kanamycin resistant callus and positive GUS activity determined by histochemical staining assays.
Benzer Tezler
- Optimisation of tissue culture conditions and gene transfer studies in lentil
Mercimekte doku kültürü şartlarının optimizasyonu ve gen transfer çalışmaları
MEHRZAD MAHMOUDİAN
Doktora
İngilizce
2000
BiyoteknolojiOrta Doğu Teknik ÜniversitesiBiyoteknoloji Ana Bilim Dalı
PROF. DR. HÜSEYİN AVNİ ÖKTEM
PROF. DR. HALUK HAMAMCI
- Kolza (brassica napus L. ssp. oleifera) bitkisinde adventif sürgün rejenerasyonu ve agrobacterium tumefaciens aracılığıyla gen aktarımı
Adventitious shoot regeneration and agrobacterium tumefaciens metiated gene transfer in rapeseed (brassicanapus L. ssp. oleifera)
SEMRA MİRİCİ
Doktora
Türkçe
2000
BiyolojiGazi ÜniversitesiBiyoloji Eğitimi Ana Bilim Dalı
DOÇ. SEBAHATTİN ÖZCAN
PROF. ORHAN ARSLAN
- Populus tremula (Titrek kavak) doku kültürlerine peroksidaz genlerinin agrobacterium tumefaciens aracılığı ile aktarılması
Başlık çevirisi yok
K.ZELİHA İPEKÇİ
Yüksek Lisans
Türkçe
1997
Biyolojiİstanbul ÜniversitesiBiyoloji Ana Bilim Dalı
PROF. DR. NERMİN GÖZÜKIRMIZI
- Buğdayda (Triticum aestivum l.) gen transferi ile herbisite (Dalapon) dayanıklı bitkilerin elde edilmesi
Başlık çevirisi yok
HATİCE YÜCE
- Keten (linum usitatissimum L.) bitkisinde adventif sürgün rejenerasyonu ve agrobacterium tumefaciens aracılığıyla gen aktarımı
Adventitious shoot regeneration and agrobacterium tumefaciens-mediated gene transfer in flax (linum usitatissimum L.)
MUSTAFA YILDIZ