İnsan plasental ribonükleaz inhibitörünün heterolog ekspresyonu ve saflaştırılması
Heterologous expression and purification of human placental ribonuclease inhibitor
- Tez No: 695737
- Danışmanlar: DR. ÖĞR. ÜYESİ FATMA GEDİKLİ
- Tez Türü: Doktora
- Konular: Biyoteknoloji, Biyokimya, Biyoloji, Biotechnology, Biochemistry, Biology
- Anahtar Kelimeler: Belirtilmemiş.
- Yıl: 2021
- Dil: Türkçe
- Üniversite: Tokat Gaziosmanpaşa Üniversitesi
- Enstitü: Fen Bilimleri Enstitüsü
- Ana Bilim Dalı: Biyoloji Ana Bilim Dalı
- Bilim Dalı: Belirtilmemiş.
- Sayfa Sayısı: Belirtilmemiş.
Özet
İnsan plasental ribonükleaz inhibitörü (RI), in vivo olarak RNaz aktivitesini düzenleyen ve in vitro olarak RNaz kontaminasyonunun potansiyel bir problem olduğu çeşitli moleküler biyoloji uygulamalarında yaygın olarak kullanılan sitoplazmik bir proteindir. RI, hidrofobik lösin açısından zengin tekrar motiflerinden oluşması ve yüksek miktarda indirgenmiş sistein kalıntıları içermesi gibi benzersiz özellikleri ile ayırt edilmektedir. Rekombinant RI ekspresyonunun, Escherichia coli sitoplazmasında çözünür formda yüksek seviyelere ulaşması son derece zordur. Bu çalışmada RI' nın çözünür ifadesini geliştirmek için N-terminal füzyon ortağı, moleküler şaperonlar seti, indirgeyici ajanlar ve yeniden katlama prosedürleri kullanılmıştır. 6x-His etiketi, sfGFP füzyon etiketi ve TEV proteaz bölgesi içeren bir rekombinant ekspresyon vektörü oluşturularak, ekspresyon için konakçı organizma olarak E. coli BL21 (DE3) suşu tercih edilmiştir. Rekombinant plazmit, BL21 hücrelerine başarılı bir şekilde transforme edilmiştir. İnklüzyon cisimciklerinden geri kazanılan proteini saptamak için SDS-PAGE analizi gerçekleştirilmiştir. 78 kDa moleküler kütleye sahip tek bir bant gözlenmiştir. N terminal etiketi, doğal RI oluşturmak için üretilen TEV proteaz ile uzaklaştırılarak NiNTA agaroz ile protein saflaştırması yapılmıştır. RNA elektroforezi kullanılarak RI' nın aktif olduğu tespit edilmiştir.
Özet (Çeviri)
Human placental ribonuclease inhibitor (RI) is a wide spread cytoplasmic protein regulating RNase activity in vivo and extensively used in a variety of molecular biology applications in vitro where RNase contamination is a potential problem. The RI is distinguished by its unique features, such as being hydrophobic leucine-rich repeat motifs and containing a high amount of reduced cysteine residues. The expression of recombinant RI is extremely difficult to reach high levels in soluble form in the cytoplasm of Escherichia coli. Here, we utilized N-terminal fusion partner, the set of molecular chaperones, reducing agents and refolding procedures to improve the soluble expression of RI. By constructing a recombinant expression vector containing 6x-His tag, sfGFP fusion tag and TEV protease cleavege side, E. coli BL21 (DE3) was preferred as a host strain for expression. The recombinant plasmid was efficiently transformed into competent BL21 host cells. The SDS-PAGE analysis was carried out to detect the expression of protein which recovered from the inclusion bodies. A single band with a molecular mass of 78 kDa was observed. N terminal tags were removed by TEV protease digestion to generate native RI and its purification was performed with Ni-NTA agarose. The activity of RI was determined by using RNA electrophoresis.
Benzer Tezler
- İnsan plasental glutatiyon S-transferazının saflaştırılması ve bazı özellikleri
Başlık çevirisi yok
N. NURAY ULUSU
- İnsan plasental kültür ortamlarında, fibroblast hücre büyümesine etki eden faktörlerin analizi
Başlık çevirisi yok
MELTEM ARIKAN(ÇEVİK)
- İnsan plasental alkali fosfatazının kısmen saflaştırılması fizikokimyasal ve kinetik özelliklerinin incelenmesi
Physicochemical and kinetic properties of partially purified human placental alkaline phosphatase
AYTAÇ KESKİEĞE
Tıpta Uzmanlık
Türkçe
1997
BiyokimyaAnkara ÜniversitesiBiyokimya Ana Bilim Dalı
DOÇ. DR. KADİRHAN SUNGUROĞLU
- Serbest estriol ve insan plasental laktojenin riskli gebelerde radyoimmunoassay ile tayinleri ve hormon düzeylerinin biyofiziksel para metrelerle ilişkisi
Başlık çevirisi yok
DURİŞEHVAR ÖZER
Yüksek Lisans
Türkçe
1988
BiyokimyaHacettepe ÜniversitesiAnalitik Kimya Ana Bilim Dalı
DOÇ. DR. AYTEKİN TEMİZER
- Termdeki insan plasenta ve göbek kordonunda human plasental laktojen (hPL) hormonunun immunohistokimyasal dağılımı
Immunohistochemical distribution of human placental lactogen (hPL) hormone in term placenta and umblical cord
SEHER KIRBOĞA
Yüksek Lisans
Türkçe
2008
Histoloji ve EmbriyolojiKafkas ÜniversitesiVeterinerlik Histoloji ve Embriyoloji Ana Bilim Dalı
PROF. DR. NURHAYAT YECAN GÜLMEZ