Hiperimmün at plazmasindan yüksek verimlilikte immünoglobülinG (IgG) elde edilmesinde yöntem optimizasyonlarinin sağlanmasi
Providing method optimization in high efficiency immunoglobulin G (IgG) from hyperimmune horse plasm
- Tez No: 692529
- Danışmanlar: PROF. DR. UYGAR HALİS TAZEBAY, DR. ARZU EKİZ
- Tez Türü: Yüksek Lisans
- Konular: Allerji ve İmmünoloji, Allergy and Immunology
- Anahtar Kelimeler: Pasif bağışıklık, Bacillus anthracis, Antiserum, Amonyum sülfat, Kaprilik asit, Protein-A kromatografis, Passive immunity, Bacillus anthracis, Antiserum, Ammonium sulfate, Caprylic acid, Protein-A chromatography
- Yıl: 2021
- Dil: Türkçe
- Üniversite: Gebze Teknik Üniversitesi
- Enstitü: Fen Bilimleri Enstitüsü
- Ana Bilim Dalı: Moleküler Biyoloji ve Genetik Ana Bilim Dalı
- Bilim Dalı: Kimyasal Biyolojik Radyolojik ve Nükleer Tıbbi Savunma Bilim Dalı
- Sayfa Sayısı: Belirtilmemiş.
Özet
Pasif bağışıklık, başka bir kaynaktan elde edilen immunoglobülinlerin vücuda verilmesi ile kazanılan bağışıklıktır. İmmünize edilen hayvanlardan toplanan plazmalardan saflaştırıltırma sonrası elde edilen immunoglobülin G (IgG)'ler hastalık halinde antiserum tedavisi ve pasif immünoterapi için kullanılmaktadır. Bacillus anthracis, kötü çevre koşularına oldukça dirençli toprakta uzun süre bulunabilen sporlar üreten, kapsüllü, gram pozitif ve çubuk şeklinde bir bakteridir. Bu bakteri sporları solunum, gastrointestinal ve deri yolu ile canlı vücuduna girerek antraks hastalığına sebep olmaktadır. Sporlar vücuda girdikleri anda vejetatif forma geçmekte ve toksinleri olan koruyucu antijen (PA), lethal faktör (LF) ve ödem faktör (EF) salgılamakta olup PA'nın LF ve EF ile oluşturduğu kombinasyonlar ölümcül olmaktadır. Bu çalışmada, antraks hastalığına karşı antiserum üretilmesi amaçlanmıştır. Bu amaçla, ülkemizde hayvan aşısı olarak temin edilebilen Ant Etvac Anthrax spor aşısı kullanılarak atların belirli aralıklar ile immünizasyonları sağlanmıştır. İmmün yanıt varlığı ELISA yöntemi ile belirlendikten sonra hiperimmün atlardan plazmaferez yolu ile toplanan plazmalardan IgG saflaştırılmak üzere amonyum sülfat, kaprilik asit ve bunların kombine yöntemleri optimize edilmiştir. Yöntemde konsantrasyon miktarı, pH, seyreltme, diyaliz tamponu, karıştırma süresi, filtre, santrifüj ve saflaştırma etkileri SDS-PAGE, WESTERN BLOT ve ELISA yöntemleri ile incelendikten sonra optimal yöntem olan %4 kaprilik asit uygulaması sonucu %81 saflıkta IgG elde edilmiştir. Bu yöntemdeki albümin kalıntıları ve diğer küçük safsızlıkların giderilmesi için Protein-A kromatografisi için kullanılan Hi Trap mAb Select Sure kolonu kullanılarak IgG saflığı %97'ye çıkarılmıştır. Antiserum üretimi için araştırma ve geliştirme çalışmaları tamamlanmış endüstriyel boyutta üretim için hazır hale getirilmiştir.
Özet (Çeviri)
Passive immunity is the immunity acquired by the administration immunoglobulins obtained from another body. Immunoglobulin G (IgG) obtained after purification plasma collected from immunized animals are used for antiserum and passive immunotherapy in case disease. Bacillus anthracis, which may be present in the soil long time producing highly resistant spores to environmental effects, encapsulated, gram-positive, rod-shaped bacterium. These bacterial spores cause anthrax disease by entering the living body through respiratory, gastrointestinal, skin routes. Soon the spores enter the body, they pass into vegetative form and secrete protective antigen (PA), lethal (LF), edema factor (EF), which are toxins, the combinations of PA with LF and EF are fatal. This study, it aimed produce antiserum against anthrax disease. Horses were immunized certain intervals using the Ant Etvac Anthrax spore vaccine, which is available an animal vaccine in our country. ELISA After determining presence of immune response, ammonium sulfate, caprylic acid and combined method, hyperimmune IgG from plasma collected plasmapheresis of the horses were optimized to purify. After examining concentration amount, pH, dilution, dialysis buffer, mixing time, filter, centrifugation, purification effects in the method by SDS-PAGE, WESTERN BLOT, and ELISA methods, 81% purity IgG was obtained consequently 4% caprylic acid application, which is optimal method. IgG purity was increased to 97% using the Hi Trap mAb Select Sure column used for Protein-A chromatography remove albumin residues and other minor impurities in this method. Research and development studies for production antiserum have been completed and it has been made ready for industrial production.
Benzer Tezler
- Hiper-immün at plazmasından F(ab')2 antiserum eldesi ve saflaştırılması
Production and purification of F(ab')2 antiserum from hyper-immune horse plasma
MERVE MÜCAHİDE UĞUR
Yüksek Lisans
Türkçe
2021
BiyoteknolojiGebze Teknik ÜniversitesiMoleküler Biyoloji ve Genetik Ana Bilim Dalı
PROF. DR. UYGAR HALİS TAZEBAY
DR. ARZU EKİZ
- Hiperimmun serumların et türü tayininde kullanılabilirliğinin araştırılması
Investigation of the usability of hyperimmuneserums in meat TYPE determination
AŞKIN NUR DERİNÖZ
Yüksek Lisans
Türkçe
2020
Veteriner HekimliğiErciyes ÜniversitesiVeteriner Besin Hijyeni ve Teknolojisi Ana Bilim Dalı
PROF. DR. NAİM DENİZ AYAZ
- Farelerde deneysel yolla oluşturulan atopik dermatit üzerine kaplıca çamurunun iyileştirici etkilerinin araştırılması
Investigation of healing effects of thermal spring mud on experimentallyinduced atopic dermatitis in mice
SİNEM ODABAŞI
Yüksek Lisans
Türkçe
2019
DermatolojiAfyon Kocatepe ÜniversitesiVeterinerlik İç Hastalıkları Ana Bilim Dalı
DOÇ. DR. BÜLENT ELİTOK
- Koyun çiçek aşısının vero hücre kültüründe üretimi ve bağışıklık çalışmaları
The pripagation of sheeppox vaccine on the vero cell culture and immunity studies
VELİ GÜLYAZ
Doktora
Türkçe
2003
Veteriner Hekimliğiİstanbul ÜniversitesiVeterinerlik Mikrobiyolojisi Ana Bilim Dalı
PROF. DR. ATİLLA ILGAZ
- Kırım kongo kanamalı ateş hastalığı (KKKAH) virüsü nükleoproteinin (NP) prokaryotik sistemde açıklanması ve biyolojik aktivitesinin araştırılması
Prokaryotic expression of crimean-congo hemorrhagic fever(CCHF) virus nucleoprotein (UP) and investigation of its biological activity
HAZEL YETİŞKİN
Yüksek Lisans
Türkçe
2016
MikrobiyolojiErciyes ÜniversitesiTıbbi Mikrobiyoloji Ana Bilim Dalı
PROF. DR. AYKUT ÖZDARENDELİ