Hiper-immün at plazmasından F(ab')2 antiserum eldesi ve saflaştırılması
Production and purification of F(ab')2 antiserum from hyper-immune horse plasma
- Tez No: 690244
- Danışmanlar: PROF. DR. UYGAR HALİS TAZEBAY, DR. ARZU EKİZ
- Tez Türü: Yüksek Lisans
- Konular: Biyoteknoloji, Biotechnology
- Anahtar Kelimeler: Antiserum, Poliklonal antikor, Protein saflaştırma, Antiserum, Polyclonal antibody, Protein purification
- Yıl: 2021
- Dil: Türkçe
- Üniversite: Gebze Teknik Üniversitesi
- Enstitü: Fen Bilimleri Enstitüsü
- Ana Bilim Dalı: Moleküler Biyoloji ve Genetik Ana Bilim Dalı
- Bilim Dalı: Belirtilmemiş.
- Sayfa Sayısı: Belirtilmemiş.
Özet
Bacillus anthracis bakterisinin üretmiş olduğu toksinlerin şarbon adı verilen ölümcül hastalığa sebep olduğu bilinmektedir. Bu bakterinin sporları toprakta uzun süre canlılığını koruyabilmektedir. Sporlar insanlara kontamine besin ve su tüketimi, sporların solunması veya derideki açık yaralardan sporların vücuda girmesiyle bulaşabilmektedir. Bakterinin toksinlerine veya sporlarına ani ve devamlı maruziyet oluşması halinde, ivedilikle tedavi uygulanması hayati önem taşımaktadır. Şarbona karşı antiserum tedavisinin, antibiyotik tedavisi ve aşıyla birlikte kombine olarak ya da tek başına hastalığın seyrinin hafifletilmesi konusunda önemli role sahip olduğu düşünülmektedir. Üretim basamaklarının az, verimin yüksek olduğu hızlı ve ekonomik tekniklerle poliklonal antiserum geliştirilmesi günümüzde mümkündür. Geliştirilen poliklonal antikorlar antijenin birden çok sayıda epitopunu çok düşük konsantrasyonlarda bulunsalar dahi yüksek hassasiyetle tanıma özelliğine sahiptir. Bu sebeple antijen yapısında meydana gelecek küçük değişimlere karşı toleransları da yüksektir. Bu tez çalışmasında; iki sağlıklı kardeş at seçildikten sonra Ant Etvac Anthrax spor aşısı ile immünize edilmişlerdir. İmmünizasyon takvimi süresince atlardan düzenli olarak kan örnekleri alınarak geliştirilen immün yanıtlar kontrol edilmiştir. IgG yanıtı istenilen düzeye geldiğinde, hayvanlardan plazmaferez tekniği ile büyük miktarlarda plazma toplanmıştır. Antiserum tedavisi esnasında alıcı canlıda yan etkilere sebep olabilecek plazma proteinleri kaprilik asitle çöktürme yapılarak plazmadan uzaklaştırılmıştır. Alıcı canlıda anaflaktik etkiye sebep olduğu bilinen ve antijen bağlama işleminde görev almayan Fc fragmenti IgG molekülünden pepsin enzimiyle kesim yapılarak ayrılmıştır. Optimize koşullarda elde edilen F(ab')2 antikorların PA' yı bağlama kapasitesi ELISA yöntemi ile, PA' ya karşı özgüllüğü de Western Blot yöntemi ile gösterilmiştir. Elde edilen poliklonal F(ab')2 antiserumun iyon değişim kromatografisiyle saflaştırılması planlanmıştır.
Özet (Çeviri)
It is known that the toxins produced by Bacillus anthracis bacteria cause the deadly disease called anthrax. The spores of this bacterium can survive in the soil for a long time. Spores can be transmitted to humans through consumption of contaminated food and water, inhalation of spores, or entry of spores into the body through open wounds on the skin. In case of sudden and continuous exposure to the toxins or spores of the bacteria, prompt treatment is vital. Antiserum therapy against anthrax is thought to play an important role in alleviating the course of the disease, either alone or in combination with antibiotic therapy and vaccine. Today, it is possible to develop polyclonal antiserum with fast and economical techniques with low production steps and high efficiency. The developed polyclonal antibodies have the ability to recognize multiple epitopes of the antigen with high sensitivity even at very low concentrations. For this reason, their tolerance to small changes in the antigen structure is also high. In this thesis; after selecting two healthy sibling horses, they were immunized with Ant Etvac Anthrax spore vaccine. During the immunization calendar, blood samples were taken from horses regularly and the immune responses developed were checked. When the IgG response reached the desired level, large amounts of plasma were collected from the animals by the plasmapheresis technique. During the antiserum treatment, plasma proteins that may cause side effects in the recipient organism were removed from the plasma by precipitation with caprylic acid. The Fc fragment, which is known to cause anaphylactic effect in the recipient organism and does not take part in the antigen binding process, was separated from the IgG molecule by digesting with the pepsin enzyme. The PA binding capacity of F(ab')2 antibodies obtained under optimized conditions was demonstrated by ELISA method, and their specificity against PA was demonstrated by Western Blot method. It was planned to purify the polyclonal F(ab')2 antiserum by ion exchange chromatography.
Benzer Tezler
- Hiperimmün at plazmasindan yüksek verimlilikte immünoglobülinG (IgG) elde edilmesinde yöntem optimizasyonlarinin sağlanmasi
Providing method optimization in high efficiency immunoglobulin G (IgG) from hyperimmune horse plasm
ÖZGE AKSOY
Yüksek Lisans
Türkçe
2021
Allerji ve İmmünolojiGebze Teknik ÜniversitesiMoleküler Biyoloji ve Genetik Ana Bilim Dalı
PROF. DR. UYGAR HALİS TAZEBAY
DR. ARZU EKİZ
- Yaygın değişken immün yetersizlikte görülen genetik mutasyonlar ve bu mutasyonların hastalığın kliniği ve prognozu ile ilişkisi
Başlık çevirisi yok
HÜLYA YİLMAZ
Tıpta Uzmanlık
Türkçe
2018
Hematolojiİstanbul Üniversitesi-Cerrahpaşaİç Hastalıkları Ana Bilim Dalı
PROF. DR. MUHLİS CEM AR
- Humoral immün yetmezlik tanısı ile takip edilen hastaların retrospektif olarak değerlendirilmesi
Retrospective evaluation of patients with humoral immune deficiency
TÜRKAN PATIROĞLU
Tıpta Yan Dal Uzmanlık
Türkçe
2010
Çocuk Sağlığı ve HastalıklarıErciyes ÜniversitesiÇocuk Sağlığı ve Hastalıkları Ana Bilim Dalı
PROF. DR. AHMET GÖDEKMERDAN
- Humoral immun yetmezlikli hastalarda akciğer bulgularının değerlendirilmesi
Pulmonary evaluation of humoral immunodeficiencies.
ZUHAL KARALI
Tıpta Uzmanlık
Türkçe
2009
Çocuk Sağlığı ve HastalıklarıUludağ ÜniversitesiÇocuk Sağlığı ve Hastalıkları Ana Bilim Dalı
PROF. DR. S. ŞEBNEM KILIÇ
- Primer immün yetmezlik tanılı olgularda evde immünglobulin tedavisinin yaşam kalitesi ve bakım verme yüküne etkisi
The effect of home therapy immunoglobulin on health quality of life and caregiver burden in patients with primary immunodeficiencies
GÜLNİHAN ÜSTÜNDAĞ
Tıpta Uzmanlık
Türkçe
2019
Allerji ve İmmünolojiSağlık Bilimleri ÜniversitesiÇocuk Sağlığı ve Hastalıkları Ana Bilim Dalı
PROF. FERAH GENEL