Fermantation and recovery of ecori endonuclease using two different genetically enginereed E.coli strains
Başlık çevirisi mevcut değil.
- Tez No: 65059
- Danışmanlar: PROF. DR. BETÜL KIRDAR, PROF. DR. Z. İLSEN ÖNSAN
- Tez Türü: Doktora
- Konular: Mühendislik Bilimleri, Engineering Sciences
- Anahtar Kelimeler: Enzimler, Escherichia coli, Saflaştırma, Suşlar, Enzymes, Escherichia coli, Purification, Strains
- Yıl: 1997
- Dil: İngilizce
- Üniversite: Boğaziçi Üniversitesi
- Enstitü: Fen Bilimleri Enstitüsü
- Ana Bilim Dalı: Belirtilmemiş.
- Bilim Dalı: Belirtilmemiş.
- Sayfa Sayısı: Belirtilmemiş.
Özet
EcoRI restriksiyon endonükleazını saflaştırmak için geliştirilen ufak ölçekli saflaştırma yöntemi iki farklı rekombinant Esherichia coli susuna uygulanmıştır. Saflaştırma sonucunda E.coli M5248 için 1.3xl05 U/g-hücre ve E.coli 294 için 3.3xl06 U/g-hücre verim elde edilmiştir. EcoRI endonükleazının her iki rekombinant E.coli susundan üretim verimini arttırmak amacıyla indüklenme parametreleri incelenmiştir. Ecoli 29 A (pPG430) susundan 595 nm dalga boyunda 1.2 optik yoğunluğa erişildiğinde eklenen 0.1 mM IPTG ile 6 saatlik indüklenmenin enzim üretimi için optimum koşullan sağladığı saptanmıştır. Ecoli M5248 (pSCC2) susundan EcoRI eldesi için optimum koşullar 590 nm dalga boyunda 1.0 optik yoğunluğa erişildiğinde fermentasyon sıcaklığını 32°C den 42°C ye yükselterek 5 saat süre ile indüklenmesi olarak bulunmuştur. Plasmid pPG430 ve pSCC2'nin kararlığına ilişkin çalışmalar, Ecoli 294 (pPG430) susu için, minimal besi ortamında büyütüldüğünde enzim üretkenliğinin ve plasmid kararlılığının azaldığını, E.coli M5248 (pSCC2) susu için ise, sıcaklık artışının plasmid kararlılığının ve EcoRI üretkenliğinin azalmasına neden olduğunu göstermiştir. Ecoli 29 A ve Ecoli M5248 hücrelerinin büyüme kinetiğinin yapısal olmayan sübstrat-kısıtlaması içeren modeller ile tanımlanabildiği belirlenmiştir. 3-kademeli bir yapısal model kullanılarak E.coli 29 A hücrelerinin hücre içi bileşenlerinin değişimini tanımlayan bir kinetik model geliştirilmiş ve 10g/L başlangıç glikoz derişiminde elde edilen deneysel verilere uygunluğu saptanmıştır.
Özet (Çeviri)
A laboratory scale procedure developed for the purification of EcoBl restriction endonuclease has been applied to two different overproducing Escherichia coli strains. The yields obtained at the final stage of the purification are 1.3x10s U/g cells for Ecoli M5248 and 3.3xl06 U/g cells for Ecoli 294. Induction parameters were optimized in order to increase the yield of the EcoKL endonuclease isolated from both recombinant E.coli strains. For the Ecoli 294 (pPG430) strain, 0. 1 mM IPTG concentration at an optical density of 1.2 at 595 nm over an induction period of 6 hours were determined to be the optimum conditions for induction. For the Ecoli M5248 (pSCC2) strain, the induction of EcoKL endonuclease was achieved by a temperature-shift from 32°C to 42 °C at an optical density of 1.0 at 590 nm over an induction period of 5 hours. Investigation of the stability of plasmids pPG430 and pSCC2 showed that in the case oîE.coli 294 (pPG430), minimal medium results in a decrease in enzyme productivity and plasmid stability, and in the case of Ecoli M5248 (pSCC2) cells, temperature-upshift leads to a decrease in the percentage of plasmid-containing cells and in EcoKL productivity. The unstructured modeling of cell growth has shown that substrate-inhibited kinetics is successful in predicting the growth behavior of both Ecoli 294 and Ecoli M5248. A three-compartment model was developed to describe the dynamic changes in the intracellular components of Ecoli 294 cells. The model gives a good description of the growth kinetics with an initial glucose concentration of 10 g/L.
Benzer Tezler
- Melastan laktik asit üretimi
Başlık çevirisi yok
ŞEBNEM HARSA
Yüksek Lisans
Türkçe
1986
Gıda MühendisliğiEge ÜniversitesiGıda Mühendisliği Ana Bilim Dalı
DOÇ. DR. ULGAR GÜVENÇ
- Kimyasal çöktürme ile sülfat giderilmesinde yaklaşımlar ve uygulama esasları
The Appoaches and applicational bases for sülfate treatment by chemical precipitation
IŞIK KABDAŞLI
- Şarap taslarından potasyum hidrojen tartarat, tartarik asit ve rochelle tuzunun kazanılması
The Recovery of potassium hydrogen tartrate, tartaric acid and rochelle salt from wine-stones
FİLİZ UTLU
Yüksek Lisans
Türkçe
1993
Kimya MühendisliğiFırat ÜniversitesiKimya Mühendisliği Ana Bilim Dalı
DOÇ. DR. İBRAHİM PEKER
- Tarımsal kaynaklı atıklardan aktif karbon üretimi
Başlık çevirisi yok
İLKNUR ÇİÇEK
Yüksek Lisans
Türkçe
1998
Kimya Mühendisliğiİstanbul Teknik ÜniversitesiKimya Mühendisliği Ana Bilim Dalı
PROF. DR. NURSEN İPEKOĞLU
