Gram pozitif bakteri sporlarının tespiti için monoklonal antikor geliştirilmesi
Development of monoclonal antibody for the detection of gram positive bacterial spores
- Tez No: 606253
- Danışmanlar: DR. ÖĞR. ÜYESİ CAN MURATHAN ERİŞTİ, DOÇ. DR. SELMA ÖZTÜRK
- Tez Türü: Yüksek Lisans
- Konular: Biyoloji, Biyoteknoloji, Mikrobiyoloji, Biology, Biotechnology, Microbiology
- Anahtar Kelimeler: Antikorlar-monoklonal, Bacillus anthracis, Gram pozitif bakteriler, Hibridoma teknolojisi, Antibodies-monoclonal, Bacillus anthracis, Gram positive bacteria, Hybridoma technology
- Yıl: 2020
- Dil: Türkçe
- Üniversite: Gebze Teknik Üniversitesi
- Enstitü: Fen Bilimleri Enstitüsü
- Ana Bilim Dalı: Moleküler Biyoloji ve Genetik Ana Bilim Dalı
- Bilim Dalı: Belirtilmemiş.
- Sayfa Sayısı: Belirtilmemiş.
Özet
Ülkemizin Güneydoğu ve Doğu bölgelerinde görülmeye devam eden şarbon, gram pozitif bir bakteri olan Bacillus anthracis'in neden olduğu, esas olarak otçulları etkileyen ancak insanlara da bulaşabilen bir hastalıktır. Bu bakteri sporlarının doğada uzun yıllar hayatta kalabilmesi nedeniyle şarbon sporları ile kontamine olan topraklarda tespitinin, eğitimli personel gerekmeksizin, çevresel örneklerden analiz yapılabilmesini mümkün kılacak hassas ve hızlı bir test sistemi ihtiyacı doğurur. Böyle bir test sisteminin geliştirilmesi, yüksek afiniteye sahip antikorların kullanılması ile mümkün olabilir. Tez çalışması kapsamında; B. anthracis sporuna karşı yüksek afiniteye sahip monoklonal antikor geliştirildi. Geliştirilen monoklonal antikorun çok miktarda üretimi, saflaştırılması ve karakterizasyonu yapıldı. Bu amaçla, 6-8 haftalık Balb/c cinsi dişi fareler intraperitonal yolla 34F2 canlı spor aşısı ile immünize edildi. Farelerin immün yanıtlarının kontrolleri ELISA (Enzim-bağlı immünosorbent) testi ile yapıldı. Yüksek immün yanıt gösteren farelerin lenf ve dalak hücreleri, hibridoma tekniği kullanılarak ile fare myeloma hücreleriyle füzyonu yapıldı. Bu füzyonlardan elde edilen antikorların karakterizasyon çalışmaları tamamlandı. Yapılan füzyon çalışmaları ile 6 adet hibrit hücre klonu elde edildi ancak tekrarlanan ELISA çalışmalarıyla B. anthracis aktif sporuna karşı özgün yanıt veren 2 adet hibridoma hücresi olduğu gösterildi. Karakterizasyon çalışmaları tamamlanan 7A11 monoklonal antikorunun, ticarileşmiş antikorlarla benzer deteksiyon limiti (LOD) sınırlarına sahip olduğu gösterildi. İlerleyen çalışmalarda tanı ve tespit kiti geliştirmek amacıyla kullanılabilecek özgüllük, duyarlılık ve afiniteye sahip olduğu tespit edildi.
Özet (Çeviri)
The anthrax, which continues to be seen in the Southeast and Eastern regions of our country, is a disease caused by Bacillus anthracis, a gram positive bacteria, that mainly affects herbivores, but also can be transmitted to humans. Since these bacterial spores can survive for many years in nature, a sensitive and rapid test system is required to detect the environmental samples with anthrax spores contamination without the need of a trained professional staff. Development of such test system may be possible by using antibodies with high affinity. Within the scope of the thesis; A high affinity monoclonal antibody was developed against B. anthracis spore. This developed monoclonal antibody was produced in mass amount and purification and characterization studies were performed. For this purpose, 6-8-week-old Balb/c female mice were immunized intraperitoneally with 34F2 live spore vaccine. The immune response of the mice was controlled by an ELISA (Enzyme-linked immunosorbent test). Lymph and spleen cells of mice with high immune response were fused with mouse myeloma cells using the hybridoma technique. The characterization studies of the antibodies obtained from these fusions were completed. 6 hybrid cell clones were obtained from fusion studies, but repeated ELISA tests showed that there were 2 hybridoma cells that specifically responded to B. anthracis active spore. Characterization studies have shown that the 7A11 monoclonal antibody has similar detection limit (LOD) to commercial antibodies. The specificity, sensitivity and affinity of 7A11 monoclonal antibody was found sufficient to be used to develop a diagnosis and detection kit.
Benzer Tezler
- Gazi Üniversitesi İç Hastalıkları Hematoloji Yoğun Bakım Ünitesi'nde yatan, hematopoetik kök hücre nakli yapılan hastalarda enfeksiyonlar ve enfeksiyon etkenlerinin araştırılması
Investigation of infections and infectious agents in hematopoietic stem cell recipients admitted to the adult Hematology Intensive care unit in Gazi University Hospital
TUĞBA BARLAS
Tıpta Uzmanlık
Türkçe
2019
HematolojiGazi Üniversitesiİç Hastalıkları Ana Bilim Dalı
PROF. DR. ŞAHENDER GÜLBİN AYGENCEL BIKMAZ
- BIOPHYSICAL STABILITY EVALUATION OF A VACCINE CANDIDATE CONTAINING PA, EF, AND LF TOXINS AND CONFORMATIONAL STUDIES ON RECOMBINANT PROTECTIVE ANTIGEN
PA, EF VE LF TOKSİNLERİNİ İÇEREN BİR AŞI ADAYININ BİYOFİZİKSEL STABİLİTESİNİN DEĞERLENDİRİLMESİ VE REKOMBİNANT KORUYUCU ANTİJEN ÜZERİNE KONFORMASYONEL ÇALIŞMALAR
ENES FURKAN SAKAR
Yüksek Lisans
İngilizce
2025
BiyoteknolojiGebze Teknik ÜniversitesiBiyoteknoloji Ana Bilim Dalı (disiplinlerarası)
PROF. DR. ELİF DAMLA ARISAN
PROF. DR. ŞEBNEM ERÇELEN CEYLAN
- N. benthamiana bitkisinin kurutulmuş yapraklarında Bacillus anthracis'in koruyucu antijeni'nin (PA83) deglikosile edilmiş ve mutant formunun stabilite ve fonksiyon aktivite değerlendirilmesi
Evaluation of stability and functional activity of deglycosylated and mutant forms of protective antigen (PA83) of Bacillus anthracis in dried leaves of Nicotiana benthamiana
SONER AKBURU
Yüksek Lisans
Türkçe
2020
BiyoteknolojiAkdeniz ÜniversitesiTarımsal Biyoteknoloji Ana Bilim Dalı
PROF. DR. TARLAN MAMMEDOV
- Clostridium botulinum toksininin kantitatif olarak saptanmasında kullanılacak kanatlı immunoglobulinlerine (IGY) dayalı bir immuno real-time pcr testinin geliştirilmesi
Development an immuno real-time pcr assay for the quantitative determination of clostridium botulinum toxin by using poultry immunoglobulins (IGY)
ALİ ABDELKAREEM
Doktora
Türkçe
2015
Mikrobiyolojiİstanbul ÜniversitesiTıbbi Mikrobiyoloji Ana Bilim Dalı
PROF. DR. KENAN MİDİLLİ
- Hiperimmün at plazmasindan yüksek verimlilikte immünoglobülinG (IgG) elde edilmesinde yöntem optimizasyonlarinin sağlanmasi
Providing method optimization in high efficiency immunoglobulin G (IgG) from hyperimmune horse plasm
ÖZGE AKSOY
Yüksek Lisans
Türkçe
2021
Allerji ve İmmünolojiGebze Teknik ÜniversitesiMoleküler Biyoloji ve Genetik Ana Bilim Dalı
PROF. DR. UYGAR HALİS TAZEBAY
DR. ARZU EKİZ