Meme kanseri tedavisinde miR-145-5p uygulamasının SMAD-3 ve SMAD-4 hedef genlerin ifadesine etkilerinin validasyonu
Validation of the effects of miR-145-5p application on the expression of SMAD-3 and smad-4 target genes in breast cancer
- Tez No: 588075
- Danışmanlar: DOÇ. DR. EMEL ERGENE
- Tez Türü: Yüksek Lisans
- Konular: Biyoloji, Biology
- Anahtar Kelimeler: Meme kanseri, miRNA Yerine Koyma (Replacement) Tedavi, miRNA, miR-145-5p, TGF-β, SMAD-3, SMAD-4, RT-qPCR, Western Blot, mimik transfeksiyonu, Göç testi, Breast cancer, miRNA Replacement Therapy, miRNA, miR-145-5p, TGF-β, SMAD-3, SMAD-4, RT-qPCR, Western Blot, mimic transfection, Migration test
- Yıl: 2019
- Dil: Türkçe
- Üniversite: Anadolu Üniversitesi
- Enstitü: Fen Bilimleri Enstitüsü
- Ana Bilim Dalı: Biyoloji Ana Bilim Dalı
- Bilim Dalı: Belirtilmemiş.
- Sayfa Sayısı: Belirtilmemiş.
Özet
Bu çalışmada, meme kanserinde baskılandığı Meta-analizle belirlenmiş olan, miR-145-5p tümör baskılayıcı miRNA özgül sentetik mimiği, meme kanserinde metastaz mekanizmasının önlenmesi veya geciktirilmesi amacıyla, transfeksiyonu gerçekleştirilmiştir.“Hi-Perfect Reagent Transfection Agent”yardımıyla hedef hücrenin içine in-vitro olarak transfekte edilmiştir (miRNA replecement therapy). Transfekte edilen miRNA'nın hücre çoğalmasını, farklaşmasını ve hücre ölümünü kontrol eden TGF-β sinyal yolağında etkili SMAD-3 ve SMAD-4 gen ürünlerinin (mRNA) ekspresyonlarındaki değişiklik gerçek zamanlı kantitatif PCR (RT-qPCR) analizi ile belirlenmiştir. Ardından, bu 2 adet hedef genin protein seviyesindeki değişiklikleri görmek için Western Blot analizi yapılmıştır. Ayrıca, uygulanan mimiğin hücresel metastaz üzerindeki etkisini göstermek amaçlı göç testi gerçekleştirilmiştir. Mimik uygulama sonrasında hücrelerde kontrole göre göçün durduğu görülmüştür. Aynı zamanda RT-qPCR analizinde mimik uygulanan hücrelerde kontrole göre SMAD-3 ve SMAD-4 gen ürünlerinin ekspresyonlarında azalma saptanmıştır. Son olarak, Western Blot analizinde SMAD-3 protein seviyesinin kontrolle kıyasta mimik uygulanan hücrelerde %86 azaldığı, SMAD-4 proteininin ise %100 azaldığı elde edilen bant yoğunluğu analiziyle tespit edilmiştir. Bu da RT-qPCR analizinin sonuçlarını desteklemektedir.
Özet (Çeviri)
In this study, miR-145-5p tumor suppressor miRNA specific synthetic mimic, which was determined by Meta-analysis in breast cancer, was transfected to prevent or delay the metastasis mechanism in breast cancer. In-vitro transfected into the target cell by“Hi-Perfect Reagent Transfection Agent”(miRNA replecement therapy). The change in expression of SMAD-3 and SMAD-4 gene products (mRNA) in the TGF-β signaling pathway that control cell proliferation, differentiation and cell death of transfected miRNA was determined by real-time quantitative PCR (RT-qPCR) analysis. Western Blot analysis was then performed to see changes in the protein level of these target genes. In addition, migration test was performed to show the effect of mimic on cellular metastasis. After the mimic application, migration was stopped according to the control in the cells. Also in the RT-qPCR analysis, the expression of SMAD-3 and SMAD-4 gene products decreased compared to control in mimic transfected cells. Finally, in Western blot analysis, the SMAD-3 protein level was determined by the control band and the SMAD-4 protein was reduced by 86% and the SMAD-4 protein was reduced by 100%. This supports the results of the RT-qPCR analysis.
Benzer Tezler
- Effect of doxorubicin and microrna-140-3p on pd-L1 expression in colon cancer
Kolon kanserinde doxorubıcın ve mıcrorna-140-3p'nin pd-L1 ifadesine olan etkisi
NOEL MOPOUGUINI NABA
Doktora
İngilizce
2020
Allerji ve İmmünolojiİstanbul Teknik ÜniversitesiMoleküler Biyoloji-Genetik ve Biyoteknoloji Ana Bilim Dalı (disiplinlerarası)
Assoc. Prof. Dr. AYÇA SAYI YAZGAN
- Determination of miR-155-5p expression level in Ehrlich ascites tumor-bearing mice treated with olive leaves
Zeytin yaprağı uygulanmış Ehrlich asit tümörlü farelerdemiR-155-5p'nin ekspresyon seviyesinin belirlenmesi
JIHAD HAJI SALEH
- Identification and investigation of metastasis specific miRNAs in breast cancer cells for miRNA replacement therapy
Meme kanser hücrelerınde miRNA replasman tedavisinde kullanılabilecek metastaik spesifik miRNA'ların belirlenmesi ve araştırılması
EMİLİA EKENEL
Doktora
İngilizce
2019
GenetikEskişehir Teknik ÜniversitesiBiyoloji Ana Bilim Dalı
DOÇ. DR. EMEL ERGENE
DOÇ. DR. YEŞİM AYDIN SON
- Meme kanserinin prognozunu etkileyen miRNA'lar
miRNAS that affect the prognosis of breast cancer
AÇELYA GÖKDENİZ YILDIRIM
Tıpta Uzmanlık
Türkçe
2019
OnkolojiPamukkale Üniversitesiİç Hastalıkları Ana Bilim Dalı
PROF. DR. ARZU YAREN
- Prostat adenokarsinomlarında psa değerlerinin gleason skor ve klinik evre ile ilişkisi
The relation between psa and gleason score and clinical phase in prostate adenocarsinoma
HACI HASAN ESEN
Tıpta Uzmanlık
Türkçe
2005
PatolojiSelçuk ÜniversitesiPatoloji Ana Bilim Dalı
PROF.DR. MUSTAFA CİHAT AVUNDUK