Geri Dön

Cloning and expression of a haloacid dehalogenase gene from pseudomanas sp. strain ISS ın E. coli

Pseudomonas sp. 19S suşundan bir haloasit dehalogenaz geninin E.Coli'ye klonlanması ve ekspresyonu

  1. Tez No: 38569
  2. Yazar: BUĞRAER ASLAN
  3. Danışmanlar: PROF.DR. SEMRA KOCABIYIK
  4. Tez Türü: Yüksek Lisans
  5. Konular: Biyoloji, Biology
  6. Anahtar Kelimeler: Pseudomonas, dehalogenaz, PCR, klonlama, biyodegredasyon vı, Biyolojik bozunma, Enzimler, Polimeraz zincirleme reaksiyonu, Pseudomonas, dehalogenase, PCR, cloning, biodegredation IV, Biological decay, Enzymes, Polymerase chain reaction
  7. Yıl: 1995
  8. Dil: İngilizce
  9. Üniversite: Orta Doğu Teknik Üniversitesi
  10. Enstitü: Fen Bilimleri Enstitüsü
  11. Ana Bilim Dalı: Belirtilmemiş.
  12. Bilim Dalı: Belirtilmemiş.
  13. Sayfa Sayısı: Belirtilmemiş.

Özet

oz PSEUDOMONAS SP. 19S SUSUNDAN BİR HALOASİT DEHALOGENAZ GENİNİN E. COLİ'YE KLONLANMASI VE EKSPRESYONU Aslan, Buğraer Yüksek Lisans, Biyoloji Anabilim Dalı Tez Yöneticisi : Prof. Dr. Semra Kocabıyık Nisan, 1995, 77 sayfa Bu çalışmada Pseudomonas sp. susu 19S'in çeşitli haloalkanoik asitlerin kullammmdan sorumlu bir dehalogenaz enziminin geni E. co/z'ye klonlanmış ve ekspres edilmiştir. Klonlamada izlediğimiz strrateji Polimeraz Zincir Reaksiyonu (PCR) kullanılarak, Pseudomonas dehalogenaz genine homolog bir fragmanın spesifik olarak amplifikasyonuna dayanmaktadır. Elde edilen PCR amplikon probe olarak kullanıldığında, Bam HI ile kesilmiş Pseudomonas sp. 19S total DNAsmda Southern Blot ile dehalogenaz geninin pozisyonunun saptanmasında başarılı olmuştur. Bu pozisyona karşılık gelen fragmanlar, pUC 18 vektöre bağlamp E. coli MV1190 susunda klonlanmışlardır. Dehalogenaz aktivitesi oldukça yüksek (70%) bir klon5.5 kb'lık bir fragman taşıyan bir plazmite (pUC 18.5SB) sahiptir. Rekombinant bakterinin hücre özütünde, orijinal bakterirünkinden daha yüksek dehalogenaz aktivitesi bulunmuştur. Klonlanan dehalogenaz geni, Southern Blot Hibridizasyonunda, PCR amplikon prob olarak kullanıldığında rekombinant plasmid DNA'smda gözlenmiştir. Klonlanmış deh CI ve deh CII yapısal genlerinden hazırlanmış DNA problar, kullandığımız deney koşullarında, Pseudomonas sp. 19S genini saptayamamışlardır. Southern Blot Hibridizasyonda, markalama ve sinyal oluşumunda radyoaktif olmayan Biyotin sistemi başarı ile kullamlmıştır ki radyoaktif sistemin dezavantajlarını ortadan kaldırmaktadır.

Özet (Çeviri)

ABSTRACT CLONING AND EXPRESSION OF A HALOACID DEHALOGENASE GENE FROM PSEUDOMONAS SP. STRAIN 19S IN E. COLI Aslan, Buğraer M.S., Department of Biology Supervisor: Prof. Dr. Semra Kocabıyık April, 1995, 77 page In this study a dehalogenase gene specifying the utilization of a variety of haloalkanoic acids by Pseudomonas sp. strain 19S has been cloned and expressed in E. coli. Our cloning strategy employed specific amplification of a fragment homologous to Pseudomonas dahalogenase gene by Polymerase Chain Reaction (PCR). The PCR primers were designed considering the highly conserved two aminoacid motifs of dehalogenases described so far. The PCR amplicon produced successfully acted as probe to detect the dehalogenase gene in the Southern Blot of the Bam HI digested Pseudomonas sp. 19S total DNA. Corresponding fragments were cloned into pUC 18 vector and amplified 111in E. coli MV1190. One clone with a substantial dehalogenation activity carried a recombinant plasmid (pUC 18.5SB) containing a 5.5 kb insert. Higher levels of dehalogenase activity was detected in the cell free extracts of the recombinant bacteria than the wild-type. Cloned dehalogenase gene was detected in the recombinant plasmid DNA by Southern Hybridization, using PCR amplicon as the probe. DNA probes prepared from the cloned deh cl and deh ell structural genes didn't detect the Pseudomonas sp. 19S dehalogenase gene, under the experimental conditions. In Southern Blot Hybridization, for both labelling and signal generation, non-radioactive Biotin system was used, successfully, obviating the disadvantages of the radioactive system.

Benzer Tezler

  1. Tez No

    76483

    Cloning and expression of TaqI restriction endonuclease gene using pmal-c2 vector system in different straints of escherichia coli

    TaqI restriksiyon endonükleaz geninin pmal-c2 vektör sistemi kullanılarak değişik escherichia coli suşlarında klonlanması ve ekspresyonu

    ELİF ÖZKIRIMLI

    Yüksek Lisans

    İngilizce

    İngilizce

    1998

    Kimya MühendisliğiBoğaziçi Üniversitesi

    Kimya Mühendisliği Ana Bilim Dalı

    PROF.DR. BETÜL KIRDAR

  2. Tez No

    50542

    Cloning of TaqI endonuclease gene into E.coli and isolation of the enzyme by using pMAL-p2 vector system

    pMAL-p2 vektör sistemi kullanılarak TaqI restriksiyon enzim geninin E.coli'ye klonlanması ve enzimin izolasyonu

    PEMBE HANDE ÖZDİNLER

    Yüksek Lisans

    İngilizce

    İngilizce

    1996

    BiyolojiBoğaziçi Üniversitesi

    PROF.DR. BETÜL KIRDAR

  3. Tez No

    65117

    Cloning of thermostable glucose isomerase of thermus thermophilus in escherichia coli

    Thermus themophilus'ün ısıl kararlı glikoz izomerazının escherichia colı'ye klonlanması

    BERNA SARIYAR

    Yüksek Lisans

    İngilizce

    İngilizce

    1997

    Kimya MühendisliğiBoğaziçi Üniversitesi

    PROF. DR. AMABLE HORTAÇSU

  4. Tez No

    13175

    Cloning and expression of glucose oxidase gene from aspergillus niger NRRL-3

    Başlık çevirisi yok

    FADEL AKRAM SHARİF

    Doktora

    İngilizce

    İngilizce

    1991

    BiyolojiOrta Doğu Teknik Üniversitesi

    PROF.DR. GÜRDAL ALAEDDİNOĞLU

  5. Tez No

    58584

    Bacterial cloning and expression of BRCAZ encoded proteins

    BRCAZ geninin bakteriye klonlanıp ekspresyonu

    A.EMRE SAYAN

    Yüksek Lisans

    İngilizce

    İngilizce

    1997

    Biyolojiİhsan Doğramacı Bilkent Üniversitesi

    Biyoloji Ana Bilim Dalı

    PROF. DR. MEHMET ÖZTÜRK

Geri Dön