M125-4 aktinomiset izolatı kullanılarak keratinöz atıklardan keratinaz üretim optimizasyonu ve karakterizasyonu
Optimization of the keratinase production from actinomycetes m125-4 using keratinous wastes and characterization of keratinase
- Tez No: 315657
- Danışmanlar: DOÇ. DR. E. ESİN HAMEŞ KOCABAŞ
- Tez Türü: Yüksek Lisans
- Konular: Biyoteknoloji, Biotechnology
- Anahtar Kelimeler: Belirtilmemiş.
- Yıl: 2012
- Dil: Türkçe
- Üniversite: Ege Üniversitesi
- Enstitü: Fen Bilimleri Enstitüsü
- Ana Bilim Dalı: Biyoteknoloji Ana Bilim Dalı
- Bilim Dalı: Belirtilmemiş.
- Sayfa Sayısı: Belirtilmemiş.
Özet
Tez çalışmasında, mevcut aktinomiset izolatlarının proteaz ve keratinaz aktivitesi açısından taranarak seçilen izolattan keratinöz atık kullanılarak keratinaz üretiminin optimizasyonu ve karakterizasyonun yapılması amaçlanmıştır.Bu kapsamda; ilk aşamada, 180 adet alkalifilik aktinomiset izolatı proteaz aktivitesi açısından taranmış ve seçilen iyi üreticiler substrat olarak keratinöz atıklar (tavuk tüyü, koyun yünü) kullanılarak derin kültür fermentasyon çalışmasına alınmıştır. Fermentasyon sıvıları keratinaz aktiviteleri açısından değerlendirilerek izolat M125-4 ve substrat olarak tavuk tüyü ileri çalışmalar için seçilmiştir. Çeşitli özellikleri incelenen izolatın S. albidofalavus grubunda yer aldığı belirlenmiştir. Daha sonra pH, inokulum miktarı ve zaman değişkenlerinin keratinaz üretiminde birbirleri ile olan etkileşimi yanıt yüzeyi yöntemi (YYY) ile incelenmiş ve buna göre keratinaz üretimi için optimum koşullar pH 7.0, 30°C ve 4 gün olarak belirlenmiştir. Ardından substrat miktarınının optimizasyonu YYY ile elde edilen koşullar altında gerçekleştirilerek, en iyi enzim üretiminin 15g/L tavuk tüyü ile 12 U/ml olduğu belirlenmiştir. Optimizasyon çalışmaları sonucunda enzim üretimi, % 50 oranında arttırılmış ve fermentasyon süresi 2 gün kısaltılmıştır. Enzim iyon değişim kromatografi kolonundan elüsyon sonucu % 13.7 verimlilik ile 44.1 kat saflaştırılmıştır. Enzimin optimum aktivite gösterdiği sıcaklık ve pH değeri 37°C, pH 9.0 olarak belirlenmiş, 1 saat süre sonunda 45°C'de % 80 ve pH 12'de ise % 84 aktivitesini koruduğu tespit edilmiştir. Keratinazın moleküler kütlesi 20 kDa olarak tahmin edilmiştir. Bunu takiben; çeşitli substratların, inhibitörlerin, deterjanların ve organik solventlerin farklı derişimlerde enzimatik reaksiyona etkisi belirlenmiştir.
Özet (Çeviri)
The aim of the thesis is to optimize the production of keratinase using keratin based wastes from actinomycete isolates that screened for their ability to produce proteases and to perform enzymes? purification and characterization.In this study primarily a total of 180 actinomycetes isolate were investigated for their extracellular protease producing capacities and the best producers were evaluated for keratinase production in shake flask fermentation. Isolate M125-4 which have a potential to produce keratinase in specified level of literature or more than that was chosen for further studies. The selected isolate was identified in Streptomyces albidoflavus clade on the basis of its various characteristics. In the second step of the thesis based on preliminary studies three variables; temperature, initial pH and incubation time were selected and optimized by Response Surface Methodology (RSM). Also amount of substrate in fermentation was optimized using One variable at a time (OVAT) method. For the production of keratinase optimum conditions were determined as pH 7.0, 30°C, 4 days and 15 g/L chicken feather. As a result of optimization studies, the enzyme production was increased 50 % and also the fermentation time of the enzyme was shortened 2 days. Following the optimization, enzyme was purified 44.1 fold by ion exchange chromography with 13.7 % yield. The optimal temperature and pH for the keratinolytic activity were determined 37ºC and 9.0 respectively. Temperature and pH stability of the keratinase after 1 hour at 45°C and pH 12 were defined as 80 % and 84 % respectively. The enzyme molecular mass was estimated 20 kDa by SDS-PAGE analysis. Finally for the determination of the various substrates, inhibitors, detergents and organic solvents effects of enzyme activity they added to enzymatic reaction to certain concentrations.
Benzer Tezler
- Mikrobiyal biyoçimento üretimine yönelik üreaz enzimi üretiminin optimizasyonu
Optimization of urease production for the production of microbial biocement
TAYMAZ AZARNO
Yüksek Lisans
Türkçe
2013
BiyoteknolojiEge ÜniversitesiBiyoteknoloji Ana Bilim Dalı
PROF. DR. MURAT ELİBOL
- Çocukluk çağı akut lösemilerinde ve malign lenfomalarında serum interlökin 2, solubl interlökin 2 reseptör, interlökin 4, tümör nekroz faktör alfa ve ferritin düzeylerinin incelenmesi
Serum ınterleukin 2, soluble interleukin 2 receptor, interleukin 4, tumour necrosis factor alfa and ferritin levels in childhood acute leukemias and malignant lymphomas
EMEL ÜNAL
Tıpta Uzmanlık
Türkçe
1999
Çocuk Sağlığı ve HastalıklarıAnkara ÜniversitesiÇocuk Sağlığı ve Hastalıkları Ana Bilim Dalı
PROF. DR. ŞÜKRÜ CİN
- Antalya araştırma ormanlarındaki (Bük-Lütfi Büyükyıldırım ve Elmalı Sedir) behçe kızılkuyruğu (Phoenicurus phoenicurus L. ) popülasyonları üzerine biyolojik araştırmalar
Biological studies on common redstart (Phoenicurus phoenicurus L. ) populations in research forests (Bük-Lütfi Büyükyıldırım and Elmalı Sedir) near Antalya
M. SÜLEYMAN KAÇAR
- Synthesis, characterization, and application of a novel thin film composite (TFC) forward osmosis (FO) membrane for seawater desalination
Deniz suyu arıtımı için yeni ince film kaplamalı ileri osmoz (İO) membranı üretimi, karakterizasyonu ve uygulanması
RAED M S ELKHALDI
Doktora
İngilizce
2018
Çevre Mühendisliğiİstanbul Teknik ÜniversitesiÇevre Mühendisliği Ana Bilim Dalı
PROF. DR. İSMAİL KOYUNCU