Cloning and chararacterization of a novel abscisic acid (ABA)-induced HVA22-like protein from Triticum turgidum spp. dicoccoides in response to drought stress
Kuraklık koşulları altında ABA ile indüklenen HVA22-türü bir proteinin yabani buğdaydan (Triticum turgidum ssp. dicoccoides) klonlanması ve karakterizasyonu
- Tez No: 309378
- Danışmanlar: DOÇ. DR. HİKMET BUDAK
- Tez Türü: Yüksek Lisans
- Konular: Biyoloji, Biyoteknoloji, Biyomühendislik, Biology, Biotechnology, Bioengineering
- Anahtar Kelimeler: Absisik asit, Abscisic acid
- Yıl: 2010
- Dil: İngilizce
- Üniversite: Sabancı Üniversitesi
- Enstitü: Mühendislik ve Fen Bilimleri Enstitüsü
- Ana Bilim Dalı: Biyoloji Bilimleri ve Biyomühendislik Ana Bilim Dalı
- Bilim Dalı: Belirtilmemiş.
- Sayfa Sayısı: Belirtilmemiş.
Özet
Uzun kuraklık koşulları altında, HVA22-türü bir proteinin yabani buğday (Triticum turgidum ssp. dicoccoides) kök dokusunda farklı olarak ekspres edildiğini göstermiştir. Bu çalışmada, yabani buğdayın kuraklığa dayanıklı olduğu önceden gösterilen TR39477 numaralı çeşidinin kök dokusundan HVA22-türü bir proteinin açık okuma çerçevesi (ORF) klonlanmış ve karakterize edilmiştir. Sekans analizi, protein ürününün dört adet olası transmembran bölgesi (domain) olduğuna işaret etmektedir. Proteinin varlığı hem E. coli'de hem de S. cerevisiae'de gerçekleştirilen ekspresyonlarla gösterilip SDS-PAGE yöntemi ile analiz edilmiştir. Proteinin hücre içindeki lokalizasyonu yeşil florosan protein (GFP) geni taşıyan bir vektörün kullanılması ile S. cerevisiae'de gözlenmiştir. Konfokal lazer mikroskobu kullanılarak elde edilen sonuçlar sadece boş vektör ile transforme edilen maya hücrelerinin galaktoz ile indüklenmesi sonrasında ekspres edilen GFP'nin hücre içinde homojen olarak dağıldığını gösterirken, HVA22-türü protein sekansını barındıran vektörün ekspresyonunun indüklenmesi sonrası GFP ile işaretlenmiş HVA22-türü proteinin hücre içinde lokalize olduğunu göstermektedir. GFP ile işaretlenmiş HVA22-türü proteinin ekspresyonu ayrıca western blot tekniği kullanılarak fare anti-GFP'si ile doğrulanmıştur. Bu tezde sunulan çalışma, HVA22-türü bir proteinin Triticum turgidum ssp. dicoccoides bitkisinden izole edilip karakterize edilmesini gösteren ilk çalışmadır.
Özet (Çeviri)
An HVA22-like protein was found to be differentially expressed in root tissue of wild emmer wheat (Triticum turgidum ssp. dicoccoides), under prolonged drought stress conditions. In this study we were able to clone and characterize the open reading frame of HVA22-like protein from root tissue of wild emmer wheat accession number TR39477, which was previously shown to be a drought-tolerant genotype. Sequence analysis indicated that HVA22-like protein product was a membrane protein and had four hypothetical transmembrane domains. Presence of the protein was shown by expressing it both in Escherichia coli and Saccharomyces cerevisiae and analyzing with sodium dodecyl sulfate polyacrylamide gel electrophoresis (SDS-PAGE) analysis. Localization of the protein in the cell was observed in S. cerevisiae utilizing a vector containing green fluorescent protein (GFP) gene. Results obtained using a confocal laser microscope indicated that the transformation of yeast cells with only the empty vector containing GFP gene yielded in a homogenous distribution of the GFP upon induction with galactose whereas the HVA22-like protein tagged with GFP was localized in the cell. Expression of GFP tagged HVA22-like protein was further confirmed with western blot analysis using mouse anti-GFP antibody. The work presented in this thesis was the first study to identify and characterize the HVA22-like protein and its protein product from Triticum turgidum ssp. dicoccoides.
Benzer Tezler
- Isolation and characterization of a novel tyrosinase enzyme from native bacterial straine, production of the enzyme by cloning, characterization of the recombinant enzyme and analysis of its biotechnological applications such as production of l-dopa and melanin
Doğal bakteri suşlarından tirozinaz enzim izolasyonu, karakterizasyonu, üretici genin klonlanması, rekombinant enzimin karakterizasyonu ve l-dopa ve melanin üretimi gibi biyoteknolojide kullanılabilirliği
EBRAHİM VALİPOUR
Doktora
İngilizce
2015
MikrobiyolojiÇukurova ÜniversitesiBiyoteknoloji Ana Bilim Dalı
PROF. DR. BURHAN ARIKAN
- Cloning, characterization and expression of a novel metallothionein gene (mt-d) from Triticum durum
Triticum durum'dan yeni bir metalotionin (mt-d) klonlanması, karakterizasyonu ve gen anlatımı
HASAN ÜMİT ÖZTÜRK
- Cloning, characterization and expression of a novel metallothionein gene from triticum durum and theoretical and experimental structure-function relationship prediction
Triticum durum'dan yeni bir melotionin geninin klonlanması karakterizasyonu ve gen anlatımı; ve teorik ve deneysel yapı-fonksiyon ilişki tahmini
KIVANÇ BİLECEN
- pRTA, yeni bir vektör ve TA klonlama: Bilinmeyen antibiyotik direnç genlerinin karakterizasyonu için yöntem
pRTA, a new vector and TA cloning: A method for characterization of novel antibiotic resistance genes
HANİFE SALİH
Yüksek Lisans
Türkçe
2020
BiyoteknolojiAydın Adnan Menderes ÜniversitesiMoleküler Biyoteknoloji Ana Bilim Dalı
PROF. DR. BÜLENT BOZDOĞAN
- Cloning and characterization of a lipase enzyme isolated from metagenomic libraries
Metagenomik kütüphanelerinden izole edilen bir lipaz enziminin klonlanması ve karakterizasyonu
FATMA FEYZA ÖZGEN
Yüksek Lisans
İngilizce
2017
Biyoteknolojiİstanbul ÜniversitesiGenetik ve Biyomühendislik Ana Bilim Dalı
PROF. DR. EMİNE ŞEKÜRE NAZLI ARDA