Geri Dön

Heterologous expression of an isoenzyme of Pycnoporus sanguineus laccase in yeast Saccharomyces cerevisiae

Pycnoporus sanguineus lakkaz izoenziminin Saccharomyces cerevisiae mayasında heterolog ekspresyonu

PDF İndir

  1. Tez No: 291886
  2. Yazar: ESRA VARIŞLI
  3. Danışmanlar: PROF. DR. CANDAN TAMERLER
  4. Tez Türü: Yüksek Lisans
  5. Konular: Biyoteknoloji, Biotechnology
  6. Anahtar Kelimeler: Belirtilmemiş.
  7. Yıl: 2010
  8. Dil: İngilizce
  9. Üniversite: İstanbul Teknik Üniversitesi
  10. Enstitü: Fen Bilimleri Enstitüsü
  11. Ana Bilim Dalı: İleri Teknolojiler Ana Bilim Dalı
  12. Bilim Dalı: Belirtilmemiş.
  13. Sayfa Sayısı: Belirtilmemiş.

Özet

Beyaz küf mantarları lignini degrade edebilme özellikleri sayesinde global karbondöngüsünde önemli rol oynayan ökaryotik organizmalardır. Ligninolitik extraselülerenzimler olan lakkazlar (EC 1.10.3.2, p-difenol: dioksijen oksidoredüktazlar)moleküler oksijeni akseptör olarak kullanarak farklı aromatik bileşikleri oksideedebilirler.Lakkazların kağıt ve tekstil endüstrilerinden gelen atık suların detoksifikasyonu,biyoremediasyon, tekstil boyalarının ekspresyonu gibi farklı biyoteknolojikproseslerde birçok uygulaması bulunmaktadır. Günümüzde bu uygulamalardarekombinant teknoloji ile organizmalardan yüksek verimde lakkaz üretimi amacıylamayalar kullanılmaktadır. Ancak rekombinant yöntemlerle yüksek verimde enzimeldesi için yüksek maliyet, tüketici kabulu ve toksikoloji testleri gibi aşılmasıgereken bazı önemli engeller bulunmaktadır. Böylece, yönlendirilmiş evrimleüretilen enzimler endüstriyel uygulamalarda daha geniş olarak kullanılabilecektir.Yapılan çalışmada Pycnoporus sanguineus lakkaz-2 cDNA 'sının Saccharomycescerevisiae mayasında heterolog ekspresyonu gerçekleştirilmiştir. Bu amaçla, ~1600amino asitlik ve ~60 kDa moleküler ağırlığında olan matür bir lakkaz izoenziminikodlayan, tam boyda bir Lcc2 cDNA 'sı, bakırla indüklenebilen CUP1 promotörütaşıyan pSAL4 ekspresyon vektörüne klonlanmıştır. Rekombinant plazmid, lityumasetat protokolü kullanılarak S. cerevisiae W303-1A suşuna aktarılmış vetransformant koloniler 0.2 mM ABTS ve 0.6 mM CuSO4 içeren seçici besiyerindesubstratı okside edebilme özelliklerine göre seçilmiştir. Pozitif transformant kolonilerarasında yapılan tarama deneyleri ile en yüksek aktivite gösteren koloni seçilmiş vesonrasında optimum ekspresyon koşullarının eldesi için karbon kaynağına ve bakırkonsantrasyonlarına göre farklı besiyerilerinin etkileri tespit edilmiştir.

Özet (Çeviri)

White-rot fungi (WRF) are eukaryotic organisms which have an important role inglobal carbon cycle with the ability of lignin degradation. Laccases (EC 1.10.3.2, pdiphenol:dioxygen oxidoreductases) are ligninoliytic extracellular enzymes that mayoxidise different aromatic compounds using molecular oxygen as acceptor.Laccases have many applications in different biotechnological processes such asdetoxification of waste-waters of paper and textile industries, bioremediation, andexpression of textile dyes. Currently yeasts are useful in these applications for thepurpose of producing high-yielded laccases from the organisms with recombinantmethodology. But there are some important obstacles to obtain high-yielded enzymewith recombinant processes such as high cost, consumer acceptance and toxicologytests that should be overcome. Thus, enzymes which are produced with directedevolution will be used more extensively in industrial applications.In this study, heterologous expression of Pycnoporus sanguineus laccase-2 cDNA inyeast Saccharomyces cerevisiae was performed. For this aim, a full length laccase-2(Lcc2) cDNA, encodes for a mature laccase isoenzyme of ~1600 amino acid residueswith a predicted molecular weight of ~60 kDa, was cloned into the pSAL4expression vector which bear copper-inducible CUP1 promoter. Recombinantplasmid was transferred into the S. cerevisiae W303-1A strain via using lithiumacetate protocol and transformed colonies were selected in terms of the properties ofoxidizing the substrate in selective medium supplemented with 0.2 mM ABTS and0.6 mM CuSO4. The colony which shows the highest activity was selected withscreening assays between the positive transformant colonies, and then the effects ofdifferent media in terms of the carbon source and copper concentrations weredetermined for obtaining the optimum expression conditions.

Benzer Tezler

  1. Tez No

    309399

    Apsergillus niger as an expression system for heterologous production of ROL and BTL2

    ROL ve BTL2 lipazlarının heterolog üretimi için bir ekspresyon sistemi olarak aspergillus niger

    SEDEF DİNÇER

    Yüksek Lisans

    İngilizce

    İngilizce

    2010

    BiyomühendislikSabancı Üniversitesi

    Biyoloji Bilimleri ve Biyomühendislik Ana Bilim Dalı

    DOÇ. DR. OSMAN UĞUR SEZERMAN

  2. Tez No

    313774

    Heterologous expression, characterization, and optimization of production of alpha-galactosidase from aspergillus fumigatus in aspergillus sojae

    Aspergillus fumigatus alfa-galaktosidazinin aspergillus sojaede heterolog üretimi, karakterizasyonu ve üretiminin optimizasyonu

    SÜMEYRA GÜRKÖK

    Doktora

    İngilizce

    İngilizce

    2012

    BiyoteknolojiOrta Doğu Teknik Üniversitesi

    Biyoteknoloji Ana Bilim Dalı

    PROF. DR. ZÜMRÜT BEGÜM ÖGEL

    PROF. DR. UFUK BÖLÜKBAŞI

  3. Tez No

    223154

    Heterologous expression of two putative glutamate synthase subunits from Pyrococcus horikoshii

    Pyrococcus horikoshii iki putatif glutamat sentaz küçük altünite homologlarının heterolog ekspresyonu

    HANDE AKÇE

    Yüksek Lisans

    İngilizce

    İngilizce

    2006

    Biyolojiİstanbul Teknik Üniversitesi

    İleri Teknolojiler Ana Bilim Dalı

    DOÇ.DR. BENAN DİNÇTÜRK BOTOFTE

  4. Tez No

    166993

    PCR cloning and heterologous expression of scytalidium thermophilum laccase gene in aspergillus sojae

    Scytalidium thermophilum lakkaz geninin PCR tekniği ile klonlanması ve Aspergillus Sojae'de heterolog ekspresyonu

    GÜLDEN KOÇLAR

    Yüksek Lisans

    İngilizce

    İngilizce

    2005

    BiyoteknolojiOrta Doğu Teknik Üniversitesi

    Biyoteknoloji Ana Bilim Dalı

    PROF. DR. ZÜMRÜT BEGÜM ÖĞEL

    PROF. DR. UFUK BAKIR

  5. Tez No

    166997

    Analysis of self-processing mechanism of galactose oxidase by site-directed mutagenesis and heterologous expression in Escherichia coli

    Galaktoz oksidazın kendini işleme mekanizmasının alan-hedefli mutajenezle analizi ve Escherichia colide heterolog ekspresyonu

    BURÇAK GENÇER

    Yüksek Lisans

    İngilizce

    İngilizce

    2005

    BiyoteknolojiOrta Doğu Teknik Üniversitesi

    Biyoteknoloji Ana Bilim Dalı

    PROF. DR. ZÜMRÜT BEGÜM ÖGEL

    PROF. DR. MİCHAEL MCPHERSON

Geri Dön