Sığır böbrek korteksi glutatyon redüktazın saflaştırılması ve bazı özelliklerinin saptanması
Purification and characterization of bovine kidney cortex glutathione reductase
- Tez No: 267408
- Danışmanlar: PROF. DR. N. NURAY ULUSU
- Tez Türü: Doktora
- Konular: Biyokimya, Biochemistry
- Anahtar Kelimeler: Böbrek, Böbrek korteksi, Glütatyon redüktaz, Kinetik, Sığırlar, İnhibisyon, Kidney, Kidney cortex, Glutathione reductase, Kinetics, Cattles, Inhibition
- Yıl: 2010
- Dil: Türkçe
- Üniversite: Hacettepe Üniversitesi
- Enstitü: Sağlık Bilimleri Enstitüsü
- Ana Bilim Dalı: Biyokimya Ana Bilim Dalı
- Bilim Dalı: Belirtilmemiş.
- Sayfa Sayısı: Belirtilmemiş.
Özet
. Glutatyon redüktaz (GR, NADPH: okside glutatyon oksidoreduktaz, EC 1.6.4.2) antioksidan metabolizmada önemli rol oynayan bir flavoenzimdir. Bu çalışmada sığır böbrek korteks GR' si yüksek verim ve saflaştırma oranıyla saflaştırılıp, moleküler ve kinetik özelliklerinin belirlenmesi ve metal iyonları, ilaç ve doğal maddeler ile inhibisyonunun incelenmesi amaçlanmıştır. Glutatyon redüktaz ısı bozunumu, 2 ? , 5 ? - ADP- Sepharose 4B afinite ve DEAE-Sepharose Fast Flow iyon değiştirici kromatografik yöntemler kullanılarak sığır böbrek korteksinden 34 806 kez ve % 85 verimle, 727 U/mg protein özgül aktivite ile saflaştırıldı. Enzimin alt birim molekül ağırlığı, Sephadex G-200 ve SDS poliakrilamid jel elektroforezi yöntemleri ile 56 ± 2 kDa olarak bulundu. Enzimin optimum sıcaklık ve pH' sı 50 ? C ve 7,2 olarak saptandı. Enzimin izoelektrik noktası kromatofokuslama yöntemi kullanılarak 6,8 olarak belirlendi. Kinetik mekanizmasının dallı mekanizmaya uyduğu belirlenerek, KmNADPH 18 ± 3 ?M ve KmGSSG 65 ± 5 ?M olarak hesaplandı. NADP+ nın NADPH' ye karşı inhibisyonunun kompetitif ve Ki değerinin 115 ± 7 ?M olduğu, GSSG' ye karşı NADP+' nın enzimi unkompetitif olarak inhibe ettiği sonucuna varıldı ve Ki= 298 ? 10 ?M olarak hesaplandı. GSH inhibisyonunun NADPH ve GSSG' ye karşı non-kompetitif tipte sırasıyla Ki 8,055 ± 0,33 olarak Ki=7,203 ± 0,36 olarak hesaplandı. Ayrıca Cd2+, Zn2+ ve Ni2+ iyonları; Echium vulgare, Sideritis brevibracteata, Asphodelus aestivus, Eremostachys laciniata gibi bitkilerden elde edilen bileşikler ve imatinib ve kolşisin gibi ilaçların enzim üzerindeki etkisi incelendi.
Özet (Çeviri)
Glutathione reductase (GR, NADPH: oxidized glutathione oxidoreductase, EC 1.6.4.2) is a flavoenzyme which play important role in antioxidative system. The aim of this study is; purification of bovine kidney cortex GR with a high yield and purification fold, determination of molecular and kinetic properties and investigation of inhibition with metal ions, drugs and natural products. Glutathione reductase was purified from the bovine kidney cortex 34 806-fold with a final yield of 85 % and specific activity of 727 U/mg by 2 ? , 5 ? - ADP- Sepharose 4B affinity and DEAE-Sepharose Fast Flow chromatography steps and a heat denaturation step. The subunit molecular weight of the enzyme was found to be 56 ± 2 kDa by Sephadex G-200 gel filtration chromatography and SDS Poliacrylamide gel electrophoresis. Optimum temperature and pH were 50 °C and 7.2 respectively. The isoelectric point of the enzyme was found to be 6,8 by chromatofocusing. Kinetic characterization of bovine kidney cortex GR is branched mechanism, KmNADPH 18 ± 3 ? M and KmGSSG 65 ± 5 ? M were determined. The inhibition by NADP+ was competitive with respect to NADPH and (Ki) of NADP+ as 115 ± 7 ? M. NADP+ inhibition type was found to be uncompetitive with respect to GSSG, and Ki was calculated as 298 ± 10 ? M. GSH was found to be a noncompetitive inhibitor with respect to both substrates, GSSG and NADPH and Ki was calculated as 8.055 ± 0.33 mM, 7.203 ± 0.36 respectively. Effects of Cd2+, Zn2+ and Ni2+ ; compounds isolated from Echium vulgare, Sideritis brevibracteata, Asphodelus aestivus, Eremostachys laciniata and drugs such as imatinib and colchicine on bovine kidney cortex GR was also investigated.
Benzer Tezler
- İzmir'de bazı yolların kapatılarak yaya bölgeleri oluşturma da kent peyzajını geliştirme açısından yeniden planlanması üzerinde araştırmalar
Başlık çevirisi yok
BAHAR TÜRKYILMAZ
Yüksek Lisans
Türkçe
1985
Şehircilik ve Bölge PlanlamaEge ÜniversitesiŞehir ve Bölge Planlama Ana Bilim Dalı
- Diesel motorları yakıt püskürtme sistemlerinin dinamik simülasyonu
Başlık çevirisi yok
İRFAN KARAGÖZ
Yüksek Lisans
Türkçe
1986
Makine MühendisliğiUludağ ÜniversitesiMakine Mühendisliği Ana Bilim Dalı
PROF. DR. OĞUZ BORAT
- Mus musculus türü farelerde gözün gelişimi
The Development of eve of the albino mus musculus species of mice
EMEL YOLAL
Yüksek Lisans
Türkçe
1984
MorfolojiCumhuriyet ÜniversitesiMorfoloji (histoloji ve Embriyoloji) Ana Bilim Dalı
DOÇ. DR. ERDOĞAN GÜRSOY
- Yahya Kemal'de bedii tefekkür unsurları: 1 Kendi Gök Kubbemiz'de duygu
Başlık çevirisi yok
MUSTAFA ÖZBALCI
Yüksek Lisans
Türkçe
1985
Türk Dili ve EdebiyatıGazi ÜniversitesiTürk Dili ve Edebiyatı Ana Bilim Dalı
DOÇ. DR. SADIK K. TURAL
- İşletmelerde genel üretim giderlerinin kontrolunda değişken ve sıfır tabanlı bütçeleme teknikleri
Başlık çevirisi yok
İBRAHİM LAZOL