Production of cystic fibrosis transmembrane conductance regulator (CFTR) protein in recombinant cells
Rekombinant hücrelerde kistik fibroz transmembran iletim düzenleyici (CFTR) proteininin üretimi
- Tez No: 152586
- Danışmanlar: PROF.DR. BETÜL KIRDAR
- Tez Türü: Yüksek Lisans
- Konular: Kimya Mühendisliği, Chemical Engineering
- Anahtar Kelimeler: Belirtilmemiş.
- Yıl: 2004
- Dil: İngilizce
- Üniversite: Boğaziçi Üniversitesi
- Enstitü: Fen Bilimleri Enstitüsü
- Ana Bilim Dalı: Kimya Mühendisliği Ana Bilim Dalı
- Bilim Dalı: Belirtilmemiş.
- Sayfa Sayısı: Belirtilmemiş.
Özet
ÖZET REKOMBİNANT HÜCRELERDE KISTIK FİBROZ TRANSMEMBRAN İLETİM BÜZENLEYİCİ (CFTR) PROTEİNİNİN ÜRETİMİ Rekombinant DNA teknolojisi uygulamalan, tedavi amaçlı proteinlerin büyük ölçekli üretimi ve bu proteinlerin yapılarının ve işlevlerinin belirlenmesinde temel oluşturmaktadır. Epitel hücrelerin apikal membranlarmda klor iyonunun taşınmasını düzenleyen Kistik Fibroz Transmembran İletim Düzenleyici (CFTR) proteini de Kistik Fibroz hastalığının tedavisinde kullanımı sözkonusu olan önemli bir proteindir. Bu çalışmada, CFTR geni, pYES2 plazmid vektörüne klonlandı ve hücre zarının yıkımı pMET-düzenleyici kaseti ile kontrol edilen Saccharomyces cerevisiae AS 102 hücrelerinde ekspresyonu sağlandı. Bu tez çerçevesinde, CFTR geni pBQ6.2 plazmid vektöründen izole edilerek, besiyerine galaktoz eklendiğinde yüksek düzeyde protein ekspresyonu sağlayan, GALİ promotörü altında pYES2 plazmid vektörüne klonlandı. Doğru yönde girmiş CFTR genini taşıyan rekombinant plasmid yapışım içeren iki koloni, restriksiyon enzimi analizi ile saptandı ve bu plazmidlere p57 ve p312 isimleri verildi. Daha sonra, bu iki plasmid, Saccharomyces cerevisiae AS 102 hücrelerine aktarıldı. CFTR proteirıinin sentezi ile CFTR proteinine ait protein bandı, hücre özütlerindeki protein içeriğinin SDS-Poliakrilamid Jel Elektroforezi analizi ile saptandı. pMET-düzenleyici kasetinin ekspresyonunu engelleyen metiyonin besiyerine eklendiği zaman, hücre zarının yıkımınm sağlanması sonucunda proteinlerin besiyerine bırakıldığı, besiyeri proteinlerinin analizlerinde zamana bağlı bir artış olduğunun gözlemlenmesiyîe doğrulandı.
Özet (Çeviri)
IV ABSTRACT PRODUCTION OF CYSTIC FIBROSIS TRANSMEMBRANE CONDUCTANCE REGULATOR (CFTR) PROTEIN IN RECOMBINANT CELLS The application of the recombinant DNA technology is essential for the large scale production of therapeutic proteins and for the elucidation of their structures and function. Cystic Fibrosis Transmembrane Conductance Regulator (CFTR) protein, which regulates the chloride ion transport in the apical membrane of the epithelial cells, is an important protein with a possible therapeutical function. In this study, the CFTR gene was cloned into the pYES2 plasmid vector and expressed in Saccharomyces cerevisiae AS 102 cells, in which cell lysis was controlled by pMET-regulation cassette. Within the framework of this thesis, the CFTR gene was isolated from pBQ6.2 plasmid vector, and was cloned into the pYES2 plasmid vector under the GALİ promoter, which provides high level protein expression in yeast upon addition of galactose into the culture medium. Two colonies harboring the recombinant plasmid construct containing the CFTR gene insert in correct orientation, namely p57 and p312, were identified by the restriction en2yme analysis. These plasmids were then transformed with Saccharomyces cerevisiae AS 102 cells. CFTR protein was found to be expressed and the protein band corresponding to the CFTR protein was observed when the protein content of the cellular extracts was analyzed by SDS-Polyacrylamide Gel Electrophoresis. Analysis of medium at different time intervals showed an increase in protein concentrations of medium upon methionine addition, by repression of the expression of pMET-regulation cassette, thus confirmed the release of proteins into the culture medium as a result of induced lysis.
Benzer Tezler
- Expression of recombinant CFTR protein by using two different expression systems
İki farklı ekspresyon sistemi kullanarak rekombinant CFTR proteininin ekspresyonu
NESLİHAN GÜNEL
Yüksek Lisans
İngilizce
2002
KimyaBoğaziçi ÜniversitesiKimya Mühendisliği Ana Bilim Dalı
DOÇ. DR. KUTLU ÜLGEN
PROF. DR. BETÜL KIRDAR
- Konjenital Bilateral Vas Deferens Aplazi (CBAVD)'li hastalarda kistik fibröz (CF) genindeki nokta mutasyonlarının araştırılması: CBAVD, CF ilişkisi
Researching of the cystic fibrosis (CP) gene mutations in patients with Congenital Bilateral Absnece of the Vas Deferens: CF, CBAVD relationazi (CBAVD)
SEMİRE UZUN
- Değişik klinik örneklerden izole edilen pseudomonas aeruginosa suşlarında virülans faktörleri ve bu faktörlerin sentezlenmesinde rol oynayan bakteriyel iletişim“Quorum Sensing”sistemindeki sinyal moleküllerinin hastalık patogenezindeki rolü
Başlık çevirisi yok
SÜLEYMAN ÖNAL
Tıpta Uzmanlık
Türkçe
2005
MikrobiyolojiSüleyman Demirel ÜniversitesiMikrobiyoloji ve Klinik Mikrobiyoloji Ana Bilim Dalı
DOÇ.DR. BUKET CİCİOĞLU ARIDOĞAN
- Pseudomonas aeruginosa'ya bağlı üriner sistem fonksiyonlarında infeksiyon ile virülans faktörleri arası ilişkinin gösterilmesi
Relationship between infection and virulance factors in urinary tract infections to pseudomanas aeruginasa
BURAK KIRAN
Yüksek Lisans
Türkçe
1998
MikrobiyolojiMarmara ÜniversitesiMikrobiyoloji Ana Bilim Dalı
PROF. DR. GÜNER SÖYLETİR
- Gögüs fizyoterapisi ve aerobik egzersiz eğitimi programı uygulanan kistik fibrozisli çocukların tedavi öncesi ve tedavi sonrası hemodinamik yanıtlarının karşılaştırılması
The Comparison of hemodynamic responses to chest physiotherapy and aerobic exercise training of patients with cystic fibrosis
BÜLENT ELBASAN
Yüksek Lisans
Türkçe
2002
Çocuk Sağlığı ve HastalıklarıHacettepe ÜniversitesiFizik Tedavi ve Rehabilitasyon Ana Bilim Dalı
DOÇ.DR. NUR TUNALI