Scytalidium thermophilum polyphenol oxidase: Production and partial characterization
Scytalidium thermophilum polyphenol oxidase: Üretimi ve kısmi karakterizasyonu
- Tez No: 143459
- Danışmanlar: PROF. DR. ZÜMRÜT ÖĞEL, PROF. DR. UFUK BAKIR
- Tez Türü: Yüksek Lisans
- Konular: Biyoteknoloji, Biotechnology
- Anahtar Kelimeler: Polifenol oksidaz, lakkaz, termofilik fungus, Scytalidium thermophilum, Hıanicola insolens l, Polyphenol oxidase, laccase, thermophilic fungi, Scytalidiwn thermophilwn, Hvmicola insolens
- Yıl: 2003
- Dil: İngilizce
- Üniversite: Orta Doğu Teknik Üniversitesi
- Enstitü: Fen Bilimleri Enstitüsü
- Ana Bilim Dalı: Biyoteknoloji Ana Bilim Dalı
- Bilim Dalı: Belirtilmemiş.
- Sayfa Sayısı: Belirtilmemiş.
Özet
Birçok doğal üründe ve bazı endüstriyel atık sularda çeşitli fenolik maddeler bulunmaktadır. Endüstriyel atık sularda bulunan fenollerin birçoğu mikroorganizmalar ve omurgalı canlılar için oldukça toksik olmaları nedeniyle son derece zararlıdırlar. Polifenol oksidazlar moleküler oksijen varlığında monofenollerin hidroksilasyonu ve difenollerin oksidasyonunu katalizleyen önemli bir grup enzimi teşkil etmektedir. Bu çalışmada termofilik bir küf olan Scytalidium thermophilum'un Humicola insolens tipi hücre dışı polifenol oksidaz üretimi incelenmiş ve çeşitli tarım kaynaklı lignosellülozik yan ürünlerin, indükleyici maddelerin ve fermentasyon başlangıcındaki spor miktarının enzim üretimi üzerine etkisi araştırılmıştır. En yüksek enzim aktivitesi karbon kaynağı olarak glukoz ve üzüm cibresi, indükleyici olarak ise gallik asit eklenen, 5 mg/ml spor içeren ortamda 150 U/ml olarak tespit edilmiştir. Humicola insolens tarafından üretilen bu hücre dışı polifenol oksidaz' in türü lakkaz olarak belirlenmiştir. Biyokimyasal karakterizasyon çalışmaları için, polifenol oksidaz aktivite boyaması sonrası, poliakrilamid j elden elektroforetik ayırma metotlarıyla geri kazanılmıştır. Polifenol oksidaz aktivitesi için en uygun sıcaklık ve pH sırasıyla 65°C ve 7.5 olarak belirlenmiştir. 60 °C de 30 dakikalık bir inkübasyon periyodu sonrasında enzim alrtivitesinin %50'sinin, pH 9'da 1 saatlik inkübasyon sonrasında da %46'sımn korunmuş olduğu gözlenmiştir. Polifenol oksidaz'ın moleküler ağırlığı 83 kDa, izoelektrik noktası ve izoenzim modeli ise 5.4 civarında bir izolektrik noktasına sahip, asidik ve tek izoform olarak belirlenmiştir.
Özet (Çeviri)
Various phenolic compounds are present in a wide variety of natural products and several types of industrial wastes. Many of the phenolic compounds found in industrial wastewaters are extremely harmful as they are highly toxic both towards microorganisms and vertebrates. Polyphenol oxidases are a group of important enzymes that catalyze o- hyroxylation of monophenols and the oxidation of o-diphenols to o-quinones in the presence of molecular oxygen. In this study, production of extracellular polyphenol oxidase by the thermophilic fungus Scytalidiwn thermophilum type culture Humicola insolens was analysed and the effect of different lignocellulosic and phenolic agricultural by-products, inducers and initial spore load on enzyme production was investigated. The highest enzyme activity was recorded as 150 U/ml in a medium containing 5 mg/1 initial spore load, glucose and grape pomace as carbon source and gallic acid as the inducer. The type of extracellular polyphenol oxidase was determined as laccase. For biochemical characterization studies, polyphenol oxidase was recovered from polyacrlyamide gel by electrophoretic elution after activity staining. The temperature and pH optima of the polyphenol oxidase activity were determined to be 65°C and pH 7.5, respectively. More than 50% of its initial activity was retained when incubated at 60 °C for 30 min. The enzyme also retained 46% of its initial activity after preincubation at pH 9.0 for 1 hour. The molecular weight of polyphenol oxidase was estimated to be 83 kDa and the isoelectric point and the isoenzyme pattern of the enzyme were determined as single acidic isoform with a pi of about 5.4.
Benzer Tezler
- Optimization of culture conditions for scytalidium thermophilum endoglucanase production on lignocellulosic biomass
Lignoselülozik biyokütle üzerinde scytalidium thermophilum endoglukanaz üretimi için kültür koşullarının optimize edilmesi
KADRİ KIVANÇ YARANGÜMELİ
Yüksek Lisans
İngilizce
2001
BiyoteknolojiOrta Doğu Teknik ÜniversitesiBiyoteknoloji Ana Bilim Dalı
DOÇ. DR. ZÜMRÜT BEGÜM ÖZEL
DOÇ. DR. UFUK BAKIR
- Utilization of Scytalidium Thermophilum phenol oxidase in biorganic syntheses
Scytalidium Thermophilum fenol oksidazının biyoorganik sentezlerde kullanılması
YELDA KAPTAN
Yüksek Lisans
İngilizce
2004
BiyoteknolojiOrta Doğu Teknik ÜniversitesiBiyoteknoloji Ana Bilim Dalı
PROF. DR. ZÜMRÜT ÖGEL
PROF. DR. UFUK BAKIR
- PCR cloning and heterologous expression of scytalidium thermophilum laccase gene in aspergillus sojae
Scytalidium thermophilum lakkaz geninin PCR tekniği ile klonlanması ve Aspergillus Sojae'de heterolog ekspresyonu
GÜLDEN KOÇLAR
Yüksek Lisans
İngilizce
2005
BiyoteknolojiOrta Doğu Teknik ÜniversitesiBiyoteknoloji Ana Bilim Dalı
PROF. DR. ZÜMRÜT BEGÜM ÖĞEL
PROF. DR. UFUK BAKIR
- Cloning of the Scytalidium thermophilum bifunctional catalase/phenol oxidase gene and expression in Aspergillus sojae
Scytalidium thermophilum çift aktiviteli katalaz/fenoloksidaz geninin klonlanması ve Aspergillus sojae'de heterolog ifadesi
HATİCE ÖZLEM ERÇİN
Yüksek Lisans
İngilizce
2008
BiyoteknolojiOrta Doğu Teknik ÜniversitesiGıda Mühendisliği Ana Bilim Dalı
PROF. DR. UFUK BAKIR
PROF. DR. ZÜMRÜT BEGÜM ÖGEL
- Purification, characterization, crystallization and preliminary x-ray structure determination of scytalidium thermophilum bifunctional catalase and identification of its catechol oxidase activity
Scytalıdıum thermophılum çift fonksiyonlu katalazının saflaştırılması, karakterizasyonu, kristalizasyonu, ilk aşama x-ışını yapısının belirlenmesi ve katekol oksidaz aktivitesinin tanımlanması
DİDEM SUTAY
Doktora
İngilizce
2007
Kimya MühendisliğiOrta Doğu Teknik ÜniversitesiKimya Mühendisliği Ana Bilim Dalı
PROF. UFUK BAKIR
PROF. ZÜMRÜT BEGÜM ÖGEL