Geri Dön

A. thaliana G protein y-subunit gene : Cloning, characterization and expression

A. thaliana G proteini y-alt birimi geni: Klonlama, karakterizasyon ve ekspresyonu

  1. Tez No: 139591
  2. Yazar: ÇAĞDAŞ SEÇKİN
  3. Danışmanlar: DOÇ. DR. ZEHRA SAYERS
  4. Tez Türü: Yüksek Lisans
  5. Konular: Biyoloji, Biology
  6. Anahtar Kelimeler: Belirtilmemiş.
  7. Yıl: 2003
  8. Dil: İngilizce
  9. Üniversite: Sabancı Üniversitesi
  10. Enstitü: Mühendislik ve Fen Bilimleri Enstitüsü
  11. Ana Bilim Dalı: Biyoloji Ana Bilim Dalı
  12. Bilim Dalı: Belirtilmemiş.
  13. Sayfa Sayısı: Belirtilmemiş.

Özet

ÖZET Bu projenin amacı AGG1 geninin klonlanması, karakterizasyonu ve yapı çalışmalı için tek basma veya alfa ve beta altbirimleri ile birlikte ekspresyonudur. A. thaliana G proteini gamma alt birimi proteinini sentezleyen AGG1 geni polimeraz zincir reaksiyonu ile çoğaltılıp cDNA sekansının verifikasyonu ve analizi amacıyla E coli hücrelerine klonlanmıştır. Verifikasyonu takiben AGG1 geni, rekombinant proteinin yüksek miktarda üretimi için farklı ekspresyon vektörlerine yerleştirilmiştir. Bu vektörler pGEX-4T2, pGFPuv, pTrcHis-TOPO and pT7/NT-TOPO vektörleridir. Farklı E. coli tipleri olan BL21(DE3) and BL21(DE3)pLysS konak hücre olarak kullanılmıştır. AGGl-his işretli proteininin sentezi pTrcHis-TOPO vektörü kullanılarak BL21(DE3)pLysS tipi hücrelerde gösterilmiştir. AGG1 proteini Western transfer yöntemiyle ve Komassi boyama ile poliakrilamid jeller üzerinde gösterilmiştir. Bu çalışma AGG1 geninin ekspresyonunu ve gen ürünü olan proteinin bakteri hücrelerinde sentezini göstermesi açısından ilktir ve AGG1 geninin farklı vektörlere yerleştirilerek karakterizasyonu sağlanmıştır. AGG1 geninin daha verimli ekspresyonunu sağlamak için farklı canlı sistemlerin de denenmesi gerekmektedir.

Özet (Çeviri)

ABSTRACT The aim of this thesis was to characterize, clone and express AGG1 gene product for structural studies either on its or own together with beta and alpha subunits. The AGG1 gene coding for the Arabidopsis thaliana G protein gamma subunit was amplified by PCR and subcloned in E. coli for verification and analyses of the cDNA sequence. Following source sequence verification AGG1 was inserted into different expression vector for overexpression of the recombinant protein. These vectors included pGEX-4T2, pGFPuv, pTrcHis-TOPO and pT7/NT-TOPO. Different E. coli strains including BL21(DE3) and BL21(DE3)pLysS, were tried as host cells. Expression of AGGl-his tag fusion protein using pTrcHis-TOPO in BL21(DE3)pLysS cells was demonstrated. AGG1 protein was detected by Western blotting and coomassie blue staining of polyacrylamide gels. This study is the first report of AGG1 expression and synthesis of the gene product in a bacterial cell and it provides characterization of different AGG1 gene containing constructs. Further work is needed for more efficient expression of AGG1 in other host systems.

Benzer Tezler

  1. Tez No

    128510

    Structure prediction A. thaliana G protein alpha subunit using bioinformatics tools based on sequence alignments

    Dizi eşleşmelerine bağlı biyoinformatik araçlar kullanılarak A. thaliana G protein alfa alt biriminin yapısının belirlenmesi

    MERT ŞAHİN

    Yüksek Lisans

    İngilizce

    İngilizce

    2002

    BiyolojiSabancı Üniversitesi

    Biyoloji Ana Bilim Dalı

    DOÇ. DR. ZEHRA SAYERS

    YRD. DOÇ. DR. UĞUR SEZERMAN

  2. Tez No

    152830

    Investigation of cloning strategies for A.thaliana G protein α-subunit gene in Pichia pastoris

    A.thaliana G-proteini α-alt birimi geninin pichia pastoris'de klonlama yöntemlerinin incelenmesi

    BURCU KAPLAN

    Yüksek Lisans

    İngilizce

    İngilizce

    2004

    BiyokimyaSabancı Üniversitesi

    PROF. DR. ZEHRA SAYERS

  3. Tez No

    139590

    Cloning, characterization and expression of Arabidopsis thaliana G protein alpha subunit gene for structural studies

    Arabidopsis thaliana'daki G protein alfa altbirim geninin yapısal çalışmada kullanılmak üzere klonlanması, karakterizasyonu ve ekspresyonu

    EMİNE SÜPHAN BAKKAL

    Yüksek Lisans

    İngilizce

    İngilizce

    2003

    BiyolojiSabancı Üniversitesi

    Biyoloji Ana Bilim Dalı

    DOÇ. DR. ZEHRA SAYERS

  4. Tez No

    178682

    Arabidopsis Thaliana lipases: Cloning and expression in Pichia pastoris

    Arabidopsis Thaliana lipazları: Klonlama ve Pichia pastoris'te ekspresyonu

    EBRU KAYMAK

    Yüksek Lisans

    İngilizce

    İngilizce

    2008

    BiyolojiSabancı Üniversitesi

    Biyoloji Bilimleri ve Biyomühendislik Ana Bilim Dalı

    DOÇ. DR. UGUR SEZERMAN

  5. Tez No

    177594

    Expression and analysis of endo beta?1,4-mannanase of Aspergillus fumigatus in heterologous hosts

    Aspergillus fumigatus endo beta-1,4-mannanazının heterolog ev sahibi organizmalarda ekspresyonu ve analizi

    GÖKHAN DURUKSU

    Doktora

    İngilizce

    İngilizce

    2007

    BiyoteknolojiOrta Doğu Teknik Üniversitesi

    Biyoteknoloji Ana Bilim Dalı

    PROF. DR. UFUK BAKIR

    PROF. DR. ZÜMRÜT BEGÜM ÖGEL

Geri Dön