Gen transferi için uyarı-cevap özellikli polimerik taşıyıcıların tasarımı, hücre kültüründe transfeksiyon ve bu polimerlerin kan elementleriyle etkileşimi
Designing of stimuli-responsive polymeric carriers for gene transfer, transfection on cell culture and interactions of these polymers with blood components
- Tez No: 130958
- Danışmanlar: PROF. DR. ERHAN BİŞKİN
- Tez Türü: Yüksek Lisans
- Konular: Biyomühendislik, Bioengineering
- Anahtar Kelimeler: Gen transferi, uyarı-cevap özellikli polimerler, hücre kültürü, transfeksiyon, kompleks stabilitesi, Gen aktarımı, Hücre kültür teknikleri, Kararlılık, Polimerler, Gene transfer, stimuli-responsive polymers, cell culture, transfection, complex stability, Cell culture techniques, Stability, Polymers
- Yıl: 2003
- Dil: Türkçe
- Üniversite: Hacettepe Üniversitesi
- Enstitü: Fen Bilimleri Enstitüsü
- Ana Bilim Dalı: Biyomühendislik Ana Bilim Dalı
- Bilim Dalı: Belirtilmemiş.
- Sayfa Sayısı: Belirtilmemiş.
Özet
GEN TRANSFERİ İÇİN UYARI-CEVAP ÖZELLİKLİ POLİMERİK TAŞIYICILARIN TASARIMI, HÜCRE KÜLTÜRÜNDE TRANSFEKSİYON VE BU POLİMERLERİN KAN ELEMETLERİYLE ETKİLEŞİMLERİ Tülin İbşirlioğlu ÖZ Bu çalışmanın amacı gen transferinde taşıyıcı olarak kullanılmak üzere katyonik uyarı-cevap özellikli kopolimerlerin sentezlenmesi, DNA ile etkileştirilmesi, oluşan komplekslerin floresanla işaretlenerek seçilen hücre hattında transfeksiyonun gerçekleştirilmesi ve komplekslerin kan elementleriyle etkileşimlerinin incelenmesidir. Karboksilik asit uçlu poli(NIPAAm) ortalama 2000 molekül ağırlığında polietilenimin (PEI) ile suda çözünen bir karbodiimid (1-etil-3-3- dimetilamino-propil)karbodiimid, (EDAC) kullanılarak kopolimerleştirilmiştir. FTIR and 1H-NMR spektrumlannda her iki polimerin karakteristik pikleri gözlenmiştir, bu da kopolimer oluşumunu ispatlamıştır. Poli(NIPAAm)'ın LCST davranışı PEI ile kopolimerizasyon sonucunda, beklendiği gibi önemli miktarda değişmiştir. PEl'dan gelen amin gruplarının zincire ilavesi, polimeri sıcaklığa daha az duyarlı hale getirmiştir. Çalışmanın ikinci bölümünde plazmid DNA ile etkileştirilen ve floresanla işaretlenen kopolimerler HeLa hücrelerine transfer edilmişlerdir. Floresan ataçmanlı mikroskop kullanılarak transfeksiyon işlemleri takip edilmiştir. Transfeksiyon için optimum N/P oranı 9 olarak tespit edilmiştir. Bu oranın üzerinde konsantrasyonlarda kopolimerlerin sitotoksik etkisi görülmüştür. Kopolimerler ile 3 farklı N/P oranında hazırlanan polimer/DNA kompleksleri albumin, serum ve plazma ile etkileştirilmiştir. Oluşan değişiklikler SDS-PAGE, agaroz jel elektroforez ve eritrosit agregasyonu ile gözlenmiştir. Katyonik kopolimerlerin anyonik kan proteinleriyle kompleks oluşturdukları, polimer/DNA komplekslerinin serum içinde kararlı halde kaldıkları gözlenmiştir.
Özet (Çeviri)
DESIGNING OF STIMULI-RESPONSIVE POLYMERIC CARRIERS FOR GENE TRANSFERJRANSFECTION ON CELL CULTURE AND INTERACTIONS OF THESE POLYMERS WITH BLOOD COMPONENTS Tülin İbşirlioğlu ABSTRACT The aim of this study is to synthesize cationic stimuli-responsive polymers as carriers for gene delivery, to examine these polymers as transfection agents with DNA using fluorescent labelling and selected cell line, and to evaluate the interactions of these complexes with blood components. Carboxylic acid-ended poly(NIPAAm) was copolymerized with polyethylene-imine (PEI) with an average molecular weight of 2000, by using a water soluble carbodiimid (EDAC). FTIR and 1H-NMR spectra of the copolymers showed characteristic peaks of both polymers, and therefore proved the formation of copolymeric structure. LCST behaviour of poly(NIPAAm) was changed by copolymerisation with PEI, as expected. LCST's of the copolymers were significantly higher than those obtained for the homopolymer. Including amine groups (coming from PEI) into the chains made polymers less sensitive to temperature. In the second part of the study, fluorescently labelled DNA/copolymer complexes were studied with HeLa cell line and their transfection abilities were obtained. Transfection was followed by inverted microscope having fluorescent attachment. The optimum N/P ratio for transfection was offered as 9, over this ratio, cytotoxicity was significant. Copolymers and DNA/copolymer complexes having 3 different N/P ratio were interacted with albumin, serum and plasma. SDS-PAGE, agarose gel electrophoresis and erythrocyte aggregation were used as main tools for observing these interactions. It was found that cationic copolymers interacted with the anionic blood proteins, and copolymer/DNA complexes were stable in the presence of serum.
Benzer Tezler
- Hücre kültüründe tümör hücrelerine akıllı polimerik taşıyıcılar ile anttisens oligonükleotit aktarımı
Transfer of antisense oligonucletide into tumor cells in cell culture by using intelligent polymeric carriers
ELA KIRSAÇ OSKAY
Yüksek Lisans
Türkçe
2005
BiyomühendislikHacettepe ÜniversitesiBiyomühendislik Ana Bilim Dalı
PROF.DR. KEVSER PİŞKİN ÖZDEN
- TİMP-2 ve GFP genlerini kodlayan plazmitin hazırlanması ve primer düz kas hücreleri hücre kültür ortamında polimerik vektörler kullanılarak transfeksiyonu
Preparation of plasmid encoding TİMP-2 and GFP and transfection of primary smooth muscle cell in cell culture using polymeric vectors
NELİSA TÜRKOĞLU
Doktora
Türkçe
2007
BiyomühendislikHacettepe ÜniversitesiBiyomühendislik Ana Bilim Dalı
PROF.DR. ERHAN BİŞKİN
PROF.DR. TÜLİN KUTSAL
- Primer endotel hücrelerin in vitro transfeksiyonu
In vitro transfection of primary endothelial cells
MUSTAFA TÜRK
Doktora
Türkçe
2004
BiyomühendislikHacettepe ÜniversitesiBiyomühendislik Ana Bilim Dalı
PROF.DR. ERHAN BİŞKİN
- Tayf çizgilerinin oluşumları ve şekilleri
Başlık çevirisi yok
ELMAS KÖROĞLU
Yüksek Lisans
Türkçe
1993
Astronomi ve Uzay BilimleriEge ÜniversitesiAstronomi ve Uzay Bilimleri Ana Bilim Dalı
PROF. DR. ÖMÜR GÜLMEN
- Gen transferinden hayvancılıkta yararlanma yolları
The Ways of using the gene transfer in animal breeding
SAİM BOZTEPE