Geri Dön

TİMP-2 ve GFP genlerini kodlayan plazmitin hazırlanması ve primer düz kas hücreleri hücre kültür ortamında polimerik vektörler kullanılarak transfeksiyonu

Preparation of plasmid encoding TİMP-2 and GFP and transfection of primary smooth muscle cell in cell culture using polymeric vectors

PDF İndir

  1. Tez No: 216375
  2. Yazar: NELİSA TÜRKOĞLU
  3. Danışmanlar: PROF.DR. ERHAN BİŞKİN, PROF.DR. TÜLİN KUTSAL
  4. Tez Türü: Doktora
  5. Konular: Biyomühendislik, Kimya Mühendisliği, Kardiyoloji, Bioengineering, Chemical Engineering, Cardiology
  6. Anahtar Kelimeler: Katyonik, eşboyutlu, stiren, polietilenglikol etil eter metakrilat, nanopartikül, poli(NİPA-ko-MAH), uyarı-cevap, DKH, restenoz, GFP, TİMP-2, Cationic, monosize, styrene, polyethyleneglycol ethyl ether methacrylate, nanoparticle, poly(NIPA-co-MAH), smart polymers, SMC, restenosis, GFP, TIMP- 2
  7. Yıl: 2007
  8. Dil: Türkçe
  9. Üniversite: Hacettepe Üniversitesi
  10. Enstitü: Fen Bilimleri Enstitüsü
  11. Ana Bilim Dalı: Biyomühendislik Ana Bilim Dalı
  12. Bilim Dalı: Belirtilmemiş.
  13. Sayfa Sayısı: Belirtilmemiş.

Özet

Anjiyoplasti ve stent operasyonları sonrası restenoz oluşumu her iki yöntem içinde engelleyici ana etkendir. Restenozun önlenmesi için birçok ilaç terapisi kullanılmaktadır, ancak genellikle yeterli olmamaktadır. Bu çalışmada amaç hasar gören primer düz kas hücrelerinin, TİMP-2 (21kDa protein, matriks metalloproteinaz 2 enziminin inhibitörü) kodlayan plazmitin, non-viral vektör kullanılarak transfekte edilmesi ve TİMP-2 proteinin erken ekspresyonunun sağlanmasıdır. İlk olarak, primer düz kas hücrelerinin transfeksiyonunda suda çözünen sıcaklığa duyarlı polikatyonik non-viral vektör poli(N-izopropilakrilamit-ko- 2-metakrilamidohistidin) kopolimeri (Poli(NİPA-ko-MAH)) kullanılmıştır. Tüm denemelere karşın bu polimerik taşıyıcılar ile yapılan çalışmalar çok başarılı olmayınca, araştırma grubumuzda başka bir tez kapsamında üretilen polikatyonik nanopartiküllerle çalışmaya devam edilmiştir. Polikatyonik eşit boyutlu nanopartiküler poli(stiren/poli(etilenglikol)etileter metakrilat/N-[3- (dimetilamino)propil] metakrilamid) {poli(St/PEG-EEM/DMAPM}, iki farklı boyda 78 nm ve 200 nm (kısa adları EEM 78 ve EEM 200) mikroemülsiyon polimerizasyon yöntemiyle üretilmiştir. EEM 78 ve EEM 200 nanopartiküllerin DKH'leri üzerindeki sitotoksitesi, sırasıyla % 4 ve % 15 olarak belirlenmiştir. Poli(NİPA-ko-MAH) kopolimeri için canlı hücre oranı % 90 civarında tespit edilmiştir. Daha sonra EEM 78/pEGFP-N2, EEM 200/pEGFP-N2 ve Poli(NİPA-ko-MAH)/pEGFP-N2 konjugatları hazırlanmıştır. Poli(NİPA-ko-MAH)'ın DKH içine alımı % 85 iken, Poli(NİPA-ko-MAH)/pEGFPN2' nin gen ekspresyon verimi kopolimerin düşük zeta-potansiyel yükünden dolayı azdır. EEM 78/ pEGFP-N2 ve EEM 200/pEGFP-N2 konjugatları ile yapılan transfeksiyon çalışmalarında sırasıyla % 68 ve % 64 oranında gen ekspresyonu tespit edilmiştir. Hazırlanan EEM 78/pBLAST TİMP-2 konjugatı transfeksiyon çalışmasında kullanılmıştır ve TİMP-2 protein ekspresyonu western blot yöntemi ile tespit edilmiştir. Transfekte edilen hücrelerin 64. saat lizatından elde edilen 21kDa büyüklüğündeki bant protein ekspresyonunun gerçekleştiğini göstermiştir.

Özet (Çeviri)

Restenosis after angioplasty or stenting remains the major limitation of both procedures. A vast array of drug therapies has been used to prevent restenosis, but they have proven to be predominantly unsuccessful. It was our hypothesis in this study; the plasmid encoding TIMP-2 (21 kDa protein known as metalloproteinase inhibitor 2) by using a nonviral vector (which is designed in our labouratory) transfer to SMCs immediately after injury that would result in increased levels of TIMP-2 and its earlier expression. Firstly, poly(Nisopropylacrylamide- co-2-methacrylamidohistidine) copolymer (Poly(NIPA-co- MAH)) as water-soluble thermo- sensitive polycationic non-viral vector for gene transfection of primary aortic smooth muscle cells. Then highly charged monosized poly(styrene/ poly(ethylene glycol) ethyl ether methacrylate)/ N-[3- (dimethylamino)propyl] methacrylamide/ [poly(St/PEG-EEM/DMAPM)] cationic nano- particles with different particle size and charges were synthesized by emulsifier-free emulsion polymerization. Experimental data for In-vitro cytotoxicity (primary SMCs) of nanoparticules EEM 78 and 200 showed cytotoxity around 4 % and 15 %. Cell viability for the Poly(NIPA-co-MAH) was around 90 %. Conjugates of EEM 78/ pEGFP-N2, EEM 200/pEGFP-N2 and Poly(NIPA-co-MAH)/pEGFP-N2 conjugates were prepared. Poly(NIPA-co-MAH) uptake efficiency in SMCs were around 85 %, but gene expression efficiency were low with Poly(NIPA-co-MAH)/pEGFP-N2 because of low zeta potential of copolymer. GFP expression efficiencies after SMC transfections by conjugates EEM 78/pEGFP-N2 and EEM 200/pEGFP-N2 were 68 % and 64 %, respectively. EEM 78/pBLAST TIMP-2 conjugate was prepared and used for transfection of SMCs. To investigate TIMP-2 protein expression we used western blot method. A clearly detectable 21 kDa band was noted in transfected cells collected 64 hours later.

Benzer Tezler

  1. Tez No

    192809

    Respiratuar distresli preterm yenidoğanlarda metalloproteinaz-2-8-9, doku proteinaz inhibitörü-2 ve endotelin-1'in plazma düzeylerinin belirlenmesi

    Determining the plazma level of metallopoteinases-2-8-9,metalloproteinases inhibitör-2 and endotelin-1 in newborn infants with respiratory distress syndrome

    DENİZ KAHRAMAN

    Tıpta Uzmanlık

    Türkçe

    Türkçe

    2006

    Çocuk Sağlığı ve HastalıklarıAfyon Kocatepe Üniversitesi

    Çocuk Sağlığı ve Hastalıkları Ana Bilim Dalı

    Y.DOÇ.DR. AYŞEGÜL BÜKÜLMEZ

  2. Tez No

    132571

    Gebeliğin erken dönemlerinde insan endometriyumunda matriks metalloproteinaz-2, -9 (MMP-2, -9)'un ve doku inhibitörlerinin (TIMP-1, -2) dağılımı ve etki mekanizmaları

    The distribution and effects of matrix metalloproteinase-2,-9(MMP-2, - 9) and their tissue inhibitors (TIMP-1, -2) in the human endometrium during early pregnancy

    YASEMİN SEVAL

    Yüksek Lisans

    Türkçe

    Türkçe

    2003

    MorfolojiAkdeniz Üniversitesi

    Histoloji ve Embriyoloji Ana Bilim Dalı

    PROF. DR. MEVLÜT ASAR

  3. Tez No

    164478

    Pseudoeksfoliatif glokom ve pseudoeksfoliatif sendromlu hastaların hümör aköz ve serumlarında matriks metalloproteinaz-2 (MMP-2),doku matriks metalloproteinaz-inhibitörü-2 (TİMP-2), transforming growth faktör Beta-1(TGFB-1) ve homosistein düzeyleri

    Başlık çevirisi yok

    SELÇUK KARA

    Tıpta Uzmanlık

    Türkçe

    Türkçe

    2005

    Göz HastalıklarıEskişehir Osmangazi Üniversitesi

    Göz Hastalıkları Ana Bilim Dalı

    PROF.DR. NİLGÜN YILDIRIM

  4. Tez No

    107680

    Akciğer kanserli olgularda serum ve bronkoalveolar lavaj sıvısında matriks metalloproteinaz-2 ve matriks metalloproteinaz doku inhibitörü-2 düzeylerinin tümör belirleyicisi olarak değerlendirilmesi

    Evaluation of levels of serum and brochoalveolar lavage fluit matrix metalloproteinase-2 and tissue inhibitor of metalloproteinase-2 as tumor markers of lung cancer subjects

    DEFNE ÖZBEK

    Tıpta Uzmanlık

    Türkçe

    Türkçe

    2001

    BiyokimyaDokuz Eylül Üniversitesi

    Biyokimya Ana Bilim Dalı

    PROF.DR. GÜL GÜNER

  5. Tez No

    156893

    Karsinomalı ve normal akciğer doku fibroblast kültürlerinde bazik fibroblast büyüme faktörü(bFGF)'nün kollagen ve matriks metalloproteinaz-2 (MMP-2)düzeyleri üzerine etkisi

    Effect of basic fibroblast growth factor(bFGF)on collagen and matrix metalloprotenase (MMP-2)levels in normal and carcinoma lung cell cultures

    CAN NAKOMAN

    Doktora

    Türkçe

    Türkçe

    2004

    BiyokimyaDokuz Eylül Üniversitesi

    Biyokimya Ana Bilim Dalı

    PROF.DR. GÜL GÜNER

Geri Dön