Kronik myelositer lösemide BCR-ABL füzyon transkriptlerinin RT-PCR tekniği kullanılarak nicel olarak belirlenmesi
The Quantitative detection of BCR-ABL fusion transcripts by using RT-PCR technique in chronic myeloid leukemia
- Tez No: 123805
- Danışmanlar: PROF.DR. MERAL BEKSAÇ
- Tez Türü: Yüksek Lisans
- Konular: Gastroenteroloji, Hematoloji, Gastroenterology, Hematology
- Anahtar Kelimeler: Floresan In Situ Hibridizasyon, Kronik Myelositer Lösemi, Philadelphia Kromozomu, Nicel Revers Transkriptaz Polimeraz Zincir Reaksiyonu, Tanı ve Takip, Chronic Myelogenous Leukemia, Diagnosis, Fluorescein In Situ Hybridization, Philadelphia Chromosome, Quantitative Revers Transcriptase Polymerase Chain Reaction
- Yıl: 2002
- Dil: Türkçe
- Üniversite: Ankara Üniversitesi
- Enstitü: Sağlık Bilimleri Enstitüsü
- Ana Bilim Dalı: İç Hastalıkları Ana Bilim Dalı
- Bilim Dalı: Belirtilmemiş.
- Sayfa Sayısı: Belirtilmemiş.
Özet
31 6.0ZET Kronik Myelositer Lösemide BCR-ABL Füzyon Transkriptlerinin RT-PCR Tekniği Kullanılarak Nicel Olarak Belirlenmesi KML' de sıklıkla görülen Philadelphia Kromozomunu saptayan moleküler teknikler hastalığın tanısında ve izleminde çok gereklidir.. Bu çalışmada BCR-ABL transkriptlerinin RT-PCR yöntemi ile belirlenmesi ve laboratuvarımızda rutin olarak kullanılan FISH yöntemi sonuçları ile karşılaştırılması amaçlanmıştır. FISH testi mikroskobik değerlendirmeye dayanan moleküler bir teknik olup hasta kanından izole edilen hücre çekirdeklerinin spesifik probla hibridizasyonunu takiben floresan bir boya ile işaretlenmesi ve bu şekilde oluşturulan preparatların floresan mikroskopta değerlendirilmesi prensibine dayanır. RT-PCR yönteminde ise nicel bir tespit yöntemi olan LightCycler sistemi kullanılmıştır. Bu yöntemde kan veya kemik iliğinden izole edilen RNA'dan cDNA sentezini takiben cDNA' nın amplifikasyonu ve spesifik iki floresanla işaretli prob ile hibridize olması sağlanır. Sonuçların analizi ölçülen floresanın analizi ile yapılır. Yöntemde RNA kalitesinin kontrolü için internal kontrol olarak housekeeping genlerden G6PD gen ekspresyonu kullanılır. Çalışmamıza 54 olgu alınmıştır. Bu örneklerden 24'ü her iki yöntem ile analiz edildiklerinde bcr-abl negatif olarak değerlendirilmiştir. 30 olgunun bcr-abl pozitif olduğu saptanmıştır. Bunların 13' ü yeni tanı almış, 17' si ise kemoterapi alan veya kemik iliği nakli yapılmış hastalardır. Yapılan analizler sonucunda FISH testi % pozitiflik sonuçlan ile LightCycler sistemi ile yapılan RT-PCR çalışmasından elde edilen bcr-abl/G6PD oranlan arasında bir korelasyon literatürde ilk kez gösterilmiştir. Korelasyon katsayısı ise R2 : 0,9621 olarak belirlenmiştir (p<0,005). Yanıt kriterleri olarak Yanıtsızlık(>%94) RT-PCR' da 0,360(bcr-abl/G6PD)' a karşılık, Minör Yanıt(%35-%94) RT-PCR' da 0,003-0,360 (bcr-abl/G6PD)' a karşılık, Kısmi Major Yanıt (%5-%35) RT-PCR' da 0,0009-0,003 (bcr-abl/G6PD)' a karşılık, Major Yanıt (<%5) RT-PCR' da 0 (bcr-abl/G6PD)' a karşılık geldiği sonucuna varılmıştır. Yanıt gruplan analiz edildiğinde ise FISH testi için X2:42,64 (p<0,0001), RT-PCR için X2:l,19xl0-3(p<0,0001) olarak bulunmuştur. Sonuç olarak konvansiyonel sitogenetiğin başarısız olduğu durumlarda RT- PCR tedaviye cevabı izlemek amacıyla kullanılabilir.
Özet (Çeviri)
32 7.SUMMARY The Quantitative Detection of BCR-ABL Fusion Transcripts by Using RT-PCR Technique in Chronic Myeloid Leukemia. Detection of Philadelphia chromosome by molecular techniques has made an important improvement in the detection and follow up of CML. In this study, the transcripts of BCR-ABL were detected using RT-PCR method and the results were compared with the FISH method. FISH is a molecular technique in which the cell nuclei are isolated from the patient blood and hybridized with spesific probes and then marked with a fluorescein dye. Afterwards these slides are examined under fluorescein microscobe. Another molecular technique, RT-PCR is carried out by a quantitative detection system using LightCycler. For this procedure RNA is isolated synthesize cDNA. Then on LightCycler with two different fluorescein probes, cDNA is hybridized and the results are measured by fluorescense. Detection system of RNA is controlled by using as housekeeping gene G6PD gene exspression analysis as an internal control. We have studied 54 samples with two methods. 24 samples were negative for bcr-abl and 30 of them were positive. Out of the 30 patients 13 were newly diagnosed, 17 patients had recieved bone marrow transplantation or chemothreapy. The results showed a correlation between FISH results and RT-PCR bcr- abl/G6PD ratios for the first time in literature. The correlation coefficient is: R2= 0.9621 (p<0,005). The results that were obtained: Negative Response(>94%) for RT-PCR is 0.360(bcr-abl/G6PD); Minor Response(35%-94%) for RT-PCR is 0.003-0.360(bcr- abl/G6PD); Partial Major Response(5%-35%) for RT-PCR is 0.0009-0.003(bcr- abl/G6PD); Major Response(<5%) for RT-PCR is 0(bcr-abl/G6PD). The response groups of analysis were obtained for FISH is X2:42.64(p<0.0001), for RT-PCR is X2:1.19xl0"3(p<0.0001). These results enable us to quantify response to treatment by RT-PCR in situation when conventional cytogenetic is in applicable.
Benzer Tezler
- Kronik myelositer lösemide philadelphia kromozomunun floresan in situ hibridizasyon tekniği ile saptanması
Ph' chromosome detection in chronic myeloid leukemia patients using fluoroscein in situ hybridization (FISH) technique
F. AJLAN TÜKÜN
- Kronik myelositer lösemide interferon tedavisi ve hematolojik büyüme faktörlerine etkisi
Başlık çevirisi yok
HALUK KOÇ
- Kronik myelositer lösemide kromozom (1-9 nolu kromozomlar) düzensizliklerinin MLPA yöntemi ile araştırılması
Investigation of the chromosomal aberrations (chr. 1-9) in chronic myeloid leukemia by MLPA technique
CAN KILINÇARSLAN
Yüksek Lisans
Türkçe
2009
BiyolojiGaziantep ÜniversitesiTıbbi Biyoloji Ana Bilim Dalı
DOÇ. DR. SACİDE PEHLİVAN
- Kronik miyolositer lösemide (KML) BCR-ABL ve ABL-BCR hibrit genlerinin RT-PCR ve southern blot yöntemi ile gösterilmesi
Başlık çevirisi yok
YUSUF ÖZKUL
- Kronik Myelositler Lösemi' de doku grubu antijenleri
Başlık çevirisi yok
HAKAN İNCE
Yüksek Lisans
Türkçe
1994
HematolojiDicle Üniversitesiİmmünoloji Ana Bilim Dalı
PROF.DR. EKREM MÜFTÜOĞLU