Geri Dön

Mezbahadan toplanan ovaryumlardan elde edilen sığır oositlerinin in vitro maturasyonu ve fertilizasyonu

In vitro maturation and fertilization of bovine oocytes aspirated from the slaugthered ovaries

  1. Tez No: 123740
  2. Yazar: MUSTAFA ÜN
  3. Danışmanlar: PROF.DR. ŞÜKRÜ KÜPLÜLÜ
  4. Tez Türü: Doktora
  5. Konular: Veteriner Hekimliği, Veterinary Medicine
  6. Anahtar Kelimeler: Fertilizasyon, in vitro, maturasyon, oosit, sığır, Bovine, fertilization, in vitro, maturation, oocyte
  7. Yıl: 2002
  8. Dil: Türkçe
  9. Üniversite: Ankara Üniversitesi
  10. Enstitü: Sağlık Bilimleri Enstitüsü
  11. Ana Bilim Dalı: Veterinerlik Doğum ve Jinekolojisi Ana Bilim Dalı
  12. Bilim Dalı: Belirtilmemiş.
  13. Sayfa Sayısı: Belirtilmemiş.

Özet

73 6. ÖZET Mezbahadan Toplanan Ovaryumlardan Elde Edilen Sığır Oositlerinin İn Vitro Maturasyonu ve Feritilizasyonu Bu çalışmada, mezbahadan toplanan ovaryumlardan elde edilen sığır oositlerinin maturasyon ve fertilizasyon oranlarının follikül çapı ile ilişkilendirilerek ortaya konması amaçlanmıştır. Çalışma materyali olarak Ankara ili Çubuk ilçe mezbahasında kesilen hayvanlardan toplanan 575 ovaryum kullanıldı. Ovaryumlar, içerisine penisilin (100 IU/ml), dihidrostreptomisin (50 mg/ml) ve amphotericin-B (50 mg/ml) katılan ve ortalama 30°C sıcaklıktaki serum fizyolojik içinde laboratuvara ulaştırıldıktan sonra yıkandı. Ovaryumların üzerlerindeki yüzeysel folliküller çaplarına göre (2-7 mm-Grup I ve 7-10 mm-Grup E) sayıldı. Tüm folliküllerin 18 G'luk iğne ile punksiyonlan yapılarak oositler aspire edildi. Aspire edilen cumulus-oosit kompleksleri morfolojilerine (<4 kat cumulus hücre katmanı ve kumlu ooplazma görüntüsü I. kalite, 3-4 kat cumulus hücresi ve hafif kumlu ooplazma görüntüsü n. kalite, 1-2 kat cumulus hücresi ve homojen ooplazma görüntüsü m. Kalite ve çıplak oositler IV. Kalite) göre sınıflandırıldı. Yanlızca I. ve II. kalite oositler in vitro maturasyon vasatına (TCM-199+%10 (v/v) FCS+%0.6 BSA) aktarılarak, 39°C sıcaklıkta %5 C02 atmosferinde 22-24 saat inkübe edildi. İnkubasyon sonrası perivitellin boşlukta I. kutup hücresi ve cumulus ekspansiyonu görülen oositler mature olarak kabul edilerek in vitro fertilizasyon vasatına (Tyrode'nin Albumin Laktat Rruvat vasati- TALP) aktarıldı. Fertilizasyon, swim-up testi ile immotil spermatozoon populasyonundan ayrıştırılmış, final konsantrasyonu 50xl05 spermatozoon/ml olan spermadan 1-2 ul'nin (lxl04) fertilizasyon vasatina aktrarılması ve vasata heparin (10 ug/ml) eklenerek kapasitasyonun sağlanması ile 39°C sıcaklıkta %5 C02 atmosferinde 18-19 saatte gerçekleştirildi. Fertilizasyon kültürünün bitmesini takiben yapılan mikroskopik incelemede her iki gamete ait pronukleusların görülmesi ile fertilizasyon belirlendi. Çalışmanın her basamağına ait veriler kaydedilerek Student's T testi ile istatistiki değerlendirmesi yapıldı. Çalışma sonucunda Grup I'de yeralan 2941 (5.11 ± 2.39) ve Grup II'de yeralan 1501 (2.72±1.58) follikülden aspire edilen toplam ve ovaryum başına ortalama oosit sayıları sırasıyla 2745 (4.77±2.09) ve 1377 (2.5 ± 1.87) olarak kaydedildi. Aspirasyon başarılan ise Grup I'de %93.3 ve Grup II'de %91.7 olarak hesaplandı. Morfolojik sınıflandırma Ne Grup I'de elde edilen 2745 oositin 1030 adetinin I. kalite (%37.5), 881 adetinin n. kalite (%32.09), 538 adetinin m. kalite (%19.59) ve 296 adetinin IV. kalite (%10.78) olduğu, Grup II'de yeralan 1377 oositin ise 677 adetinin I. kalite (%49.16), 430 adetinin H kalite (%31.2), 151 adetinin m. kalite (%10,96) ve 118 adetinin IV. kalite (%8.56) olduğu görüldü. Grup I'de aspirasyondan sonra I ve II. kalite olduktan belirlenen toplam 1911 ve Grup II'de 1108 cumulus-oosit kompleksinin maturasyon kültürü sonrası Grup I'de 1327 ve Grup II'de ise 823'ünde maturasyonun şekillendiği saptandı. Grup I ve II'de elde edilen maturasyon yüzdeleri ise sırasıyla %69.44 ve %74.2 olarak belirlendi (p>0.05). Grup I ve II'ye ait mature oositler (Grup 1: 1327 ve Grup II: 823) in vitro fertilizasyon işlemi için kullanıldı. 6u oositlerden Grup I'de 576 (%43.4)'sında ve Grup II'de 419 (%51)'unda, fertilizasyon kültürü sonrası mikroskopik incelemede,74 hem erkek hem de dişi pronukleus görülerek fertilize oldukları kabul edildi. Grup I'de 654 oositte hiçbir pronukleus tespit edilemezken, 40 oositin (%3) mikroskobik incelemesinde parthenogenezis, 46 oositte (%3.4) polispermi ve 11 (%0.8) oositte ise fertilizasyon dejenerasyonu belidendi. Grup II'ye ait oositlerin 336'sının (%40.8) fertilize olmadığı tespit edilirken, geriye kalan 68 oosititen 22 adetinde (%2.7) parthenogenez, 39 (%4.7) adetinde polispermi ve 7 (%0.85) adetinde ise fertilizasyon dejenerasyonu bulundu. Sonuç olarak, mezbahadan toplanan sığır ovaryumları in vitro embriyo üretiminde iyi bir kaynak olduğu, ancak toplanan ovaryumların yüzeyindeki folliküllerden aspire edilen oositlerin maturasyon ve fertilizasyon kapasiteleri oldukça değişkenlik gösterdiği ve in vitro çalışmalarda kullanılabilecek oositierin elde edildikleri follikülierin çaptan ile oositlerin maturasyon ve fertilizasyon başarılan arasında kuvvetli bir ilişki olduğu, follikül ölçüsü arttıkça fertilizasyon oranının yükseldiği sonucuna varıldı.

Özet (Çeviri)

75 7. SUMMARY In vitro maturation and fertilization of bovine oocytes aspirated from the slaugthered ovaries The aim of this study was to determine the maturation and fertilization capacities of bovine oocytes aspirated from slaugthered ovaries in relation with the follicle diameter. A number of 575 ovaries collected from the slaugthered cows at the Municipal slaugterhouse of Çubuk, Ankara were used as the material. Ovaries were pooled and carried to laboratory in a thermos filled with antibiotic (peniciiine -100 IU/ml, dihydrostreptomicine-50 mg/ml and amphotericine-B-50 mg/ml) added, app. 30 Oheat saline and washed with fresh saline. Peripheral follicles were counted according to die their diameters (2-7 mm-Group I and 7-10 mm-Group n). Whole follicles were punctured with an 18 G needle hold on a 5 ml syringe and aspirated cumulus'oocyte complexes were classified in regard to their morphological apperance (<4 cumulus layers and sandy ooplazm vision Grade I, 3-4 cumulus layers and slightly sandy ooplazm vision Grade n, 1-2 cumulus layers and homogen ooplazma vision Grade m and naked oocytes Grade IV). Only Grade I and n oocytes were then placed in maturation medium (TCM-199+%10 (v/v) FCS+BSA) and incubated under an atmosphere of %5 C02 at 39 C° for 22-24 hr. At the end of the maturation period the oocytes that extruded first polar body to the perivitelline space and had an appereance of expanded cumulus cells were mentioned as 'mature' and transfered to the fertilization media (Tyrode's Albumine Lactate Pyruvate Medium-TALP) for in vitro fertilization. Fertilization was achieved by adding 1-2 pi (lxlO4), swim-up seperated sperm having a final concentration of 50x10s spermatozoa/ml to the fertilization media. Heparine (10 fig/ml) was used as the capacitating agent. Incubation was held under an atmosphere of %5 C02 at 39 C° for 18-19 hr. The detection of both male and female pronucleus was defined as the sign of the fertilization. The datas obtained at the all stages were recorded and statistical evaluation was done with the Students T test At the end of the study, 2941 (5.11 ± 2.39) follicles in Group I and 1501 (2.72±1.58) follicles in Group n were punctured and overall and mean aspirated oocytes were 2745 (4.77±2.09) and 1377 (2.5 ± 1.87) respectively. Aspiration rates were 93.3% in Group I and 91.7% in Group II. According to the morphological classification, overall and mean oocyte rates in the study groups were recorded as 1030 Grade I (37.5%), 881 Grade H (32.09%), 538 Grade m (19.59%) and 296 Grade IV oocytes (10.78%) in Group I, 677 Grade I (49.16%), 430 Grade H (31.2%), 151 Grade m (10.96%) and 118 Grade IV (8.56%) oocytes in Group II. After the maturation period 1327 of 1911 oocytes in Group I and 823 of 1108 oocytes in Group n were found as mature. The maturation rates observed in the study groups were 69.44% and 76.5% respectively (p>0.05). Mature oocytes (Group 1: 1327 and Group II: 823) were used in in vitro fertilization manner. In 576 of these in Group I (43.4%) and 419 oocytes in Group II (51%), both male and female pronudeuses were detected and these oocytes were recorded as fertilized. Contrary to this, no signs of fertilization could be detected in 654 oocytes in Group I and 336 ooctes in Group II, where as 40 oocytes (3%) in Group I and 22 oocytes76 (2.7%) in Group n showed parthenogenezis in the microscopic examination. An incidans of 3.4% (6 ooctytes) in Group I and 4.7% polyspermia (39 oocytes) in Group II were observed. Fertilization degenerations were recorded as 0.8% (11) and 0.85% (7) respectively in study groups. As a conclusion, it was evident that the ovaries collected from the slaugtherhouse are sufficient potentials for in vitro embryo production, although a great variation between the maturation and fertilization capacities of oocytes aspirated from the peripheral follicles could be observed. It was also obvious that there is a significiant relation between the follide diameter and maturation and fertilization capacities of oocytes since the fertilization rates increases as the follicle diameter rises.

Benzer Tezler

  1. Tez No

    156695

    Kızgınlık gösteren ineklerin serumunda bulunan östradiol-17beta düzeylerinin inek oositlerinin in vitro olgunlaşma ve döllenmesine etkisi

    The effects of estradiol-17beta levels in estrous cow sera on in vitro maturation and fertilization of cow oocytes

    NUMAN AKYOL

    Doktora

    Türkçe

    Türkçe

    2004

    FizyolojiAnkara Üniversitesi

    Fizyoloji Ana Bilim Dalı

    PROF.DR. NESRİN SULU

  2. Tez No

    194093

    Sığırlarda embriyo kültür medyumuna ilave edilen protein kaynaklarının embriyonik gelişim üzerine etkileri

    Effects of the protein sources added to the bovine embryo culture medium on embryonic development

    MEHMET YAĞMUR

    Doktora

    Türkçe

    Türkçe

    2005

    BiyoteknolojiUludağ Üniversitesi

    Dölerme ve Suni Tohumlama Ana Bilim Dalı​

    PROF.DR. MUSTAFA KEMAL SOYLU

  3. Tez No

    79475

    İnek oositlerinin in-vitro olgunlaştırılmasında farklı vasatların etkileri

    Effects of different medium and supplements in-vitro maturation bovine oocytes

    RAMAZAN KONUŞ

    Doktora

    Türkçe

    Türkçe

    1998

    Veteriner HekimliğiUludağ Üniversitesi

    Veterinerlik Doğum ve Jinekolojisi Ana Bilim Dalı

    DOÇ. DR. E. FATİH ÜNAL

  4. Tez No

    123724

    Östrustaki sığır serumu ve fetuinin sığır oositlerinin in vitro maturasyonu üzerine etkileri

    The effects of estrous cow serum (ECS) and fetuin on in vitro maturation of bovine oocytes

    ZEYNEP PINAR KAYA

    Doktora

    Türkçe

    Türkçe

    2002

    Veteriner HekimliğiAnkara Üniversitesi

    Veterinerlik Doğum ve Jinekolojisi Ana Bilim Dalı

    PROF.DR. HAKKI İZGÜR

  5. Tez No

    9394

    Bursa yöresinde mezbahada kesilen ineklerde rastlanan mastitis lezyonlarının makro-ve mikroskopik incelenmesi

    Macroscopic and microscopical evaluation of bovine mastitis lesions in the slaughtered animals around Bursa

    SELDA ÖZBİLGİN(AKYÜREK)

    Doktora

    Türkçe

    Türkçe

    1990

    Veteriner HekimliğiUludağ Üniversitesi

    Patoloji Ana Bilim Dalı

    PROF. DR. ERDOĞAN ERTÜRK

Geri Dön