İnsan plazmasından immunoglobulin-G ayrılması için histidin içeren pseudospesifik afinite sorbentlerin hazırlanması
Histidine incorporated pseodospecific affinity sorbents for separation of human-immunoglobulin-G from human plasma
- Tez No: 105607
- Danışmanlar: PROF. DR. ADİL DENİZLİ
- Tez Türü: Yüksek Lisans
- Konular: Kimya, Chemistry
- Anahtar Kelimeler: Afinite kromatografisi, Antikorlar, Histidin, Affinity chromatography, Antibodies, Histidine
- Yıl: 2001
- Dil: Türkçe
- Üniversite: Hacettepe Üniversitesi
- Enstitü: Fen Bilimleri Enstitüsü
- Ana Bilim Dalı: Kimya Ana Bilim Dalı
- Bilim Dalı: Belirtilmemiş.
- Sayfa Sayısı: Belirtilmemiş.
Özet
ÖZET Bu çalışmada, insan plazmasında etkin bir şekilde immunoglobulin-G ayrılması için, yeni bir adsorbent ve yaklaşım geliştirilmiştir. MAH ligand olarak seçilmiş ve metakroilklorür ile histidin kullanılarak sentezlenmiştir. Ortalama boyutları 50- 63 um olan mikroküreler MAH ile HEMA'nın radikalik süspansiyon polimerimerizasyonu ile elde edilmiştir. p(HEMA-co-MAH) mikrokürelerin spesifik yüzey alanı 17.6 m2/g"dır. Sentezlenen MAH monomeri; FTIR ve NMR, p(HEMA-co-MAH) mikroküreler; FTIR, DSC, elemental analiz ve şişme deneyleri ile karakterize edilmişlerdir. p(HEMA-co-MAH) mikroküreler, in-vitro sistemde kan ile etkileştirilmiştir. Hücre kaybı ve pıhtılaşma zamanları da incelenmiştir. Kan pıhtılaşma deneyleri sonucunda pHEMA ve p(HEMA-co- MAH) mikrokürelerin kan uyuşabilirlik özelliklerinin iyi olduğu görülmüştür. Kan ile temasta hücre kayıpları, pHEMA ve p(HEMA-co-MAH) mikroküreleri için aynı düzeydedir, %62'lık şişme oranına sahip ve gram polimer başına 11.79 umol MAH içeren p(HEMA-co-MAH) mikroküreler, sulu çözeltilerden ve insan plazmasından insan-lgG adsorpsiyonu ve desorpsiyonu için kullanılmışlardır. Maksimum insan-lgG adsorpsiyon kapasitesi sırasıyla; MES tamponu, fosfat tamponu ve izotonik çözelti için sırasıyla 64.3 mg/g, 52.5 mg/g ve 42.5 mg/g olarak bulunmuştur. İnsan plazmasının kullanıldığı deneylerde daha yüksek adsorpsiyon kapasitesine ulaşılmıştır (73.7 mg/g). Diğer kan proteinlerin adsorpsiyon kapasiteleri; fibrinojen için 3.2 mg/g, albumin için 4.6 mg/g olarak bulunmuştur. Toplam protein adsorpsiyonu 82.2 mg/g'dır. Bu afinite mikroküreleri ile insan plazmasından tek basamakta insan-lgG' nin ayrılması mümkündür. Ayrıca p(HEMA-co-MAH) mikrokürelerin insan-lgG'sinin adsorpsiyonu ve desorpsiyonu için tekrar tekrar kullanılabileceği gözlenmiştir.
Özet (Çeviri)
ABSTRACT In this study a novel and new approach was developed to obtain an efficient separation of human-IgG from human plasma. MAH was chosen as a ligand and synthesized by using methacrylochlöride and histidine. Spherical microbeads with an average size of 50-63 urn were obtained by the radical suspension polymerization of MAH and HEMA conducted in an aqueous disperion medium. Owing to the reasonably rough character of the microbead surface, p(HEMA-co-MAH) microbeads had a specific surface area of 17.6 m^/g. Synthesized MAH monomer was characterized by FTIR and NMR. p(HEMA-co-MAH) beads were characterized by swelling studies, FTIR, DSC and elemental analysis. The pHEMA and p(HEMA-co-MAH) microbeads were contacted with blood in in-vitro systems. Loss of the blood cells and the clotting times were also followed. Good blood compatibility properties of both pHEMA and p(HEMA-co-MAH) were clearly observed with blood coagulation experiments. Loss of cells in the blood contacting with pHEMA and p(HEMA-co-MAH) microbeads were same. These p(HEMA-co-MAH) microbeads with a swelling ratio of 62%, and containing 1 1.79 umol MAH/g were used in the adsorption/desorption of human-IgG from aqueous solutions and human plasma. The maximum amount of human-IgG adsorption capacity from human plasma in MES buffer at pH 6.0, in phosphate buffer at pH 7.4 and in isotonic solution were; 64.3 mg/g, 52.8 mg/g, 42.5 mg/g, respectively. Much higher amounts of human-IgG were adsorbed from human plasma (up to 73.7 mg/g). Adsorption capacities of other blood proteins were obtained as 3.2 mg/g for fibrinogen and 4.6 mg/g for albumin. The total protein adsorption was determined as 82.2 mg/g. The affinity microbeads allowed the one- step separation of human-IgG from human plasma. It was observed that human-IgG could be repeatedly adsorbed and desorbed with p(HEMA-co- MAH) microbeads without significant loss in the adsorption capacity.
Benzer Tezler
- Preparation of affinity membranes for cholesterol removal from human plasma
İnsan plazmasından kolesterol uzaklaştırılması için afinite membranların hazırlanması
ELİF BİNGÖL
- Alfa-1 proteaz inhibitorlerine yönelik antikor üretimi ve iki farklı immünoassay ortamında alfa-1 proteaz inhibitörünün düzeyinin belirlenmesinde kullanımı
Production of antibody against alpha-1 proteinose inhibitor and using for determination level of alpha-1 proteinose inhibitor in two different immunoassay medium
OYA ORTAPAMUK ÖZDEMİR
- Alfa-1 proteaz inhibitorünün elektroforetik analizinde görülen satelit bandın tanımlanması
The Identification of the satellite band that is seen in the electrophoretic analysis of alpha-1 protease inhibitor
HATİCE DİLSİZ
Yüksek Lisans
Türkçe
1999
BiyokimyaHacettepe ÜniversitesiBiyokimya Ana Bilim Dalı
PROF. DR. NİLGÜN SÜMER
- Boya takılı polimeriksorbentlere metal iyonu ve protein adsorbsiyonunun kolon sisteminde dinamik davranışının incelenmesi
Investigation of dynamic behavior of metal ions and protein adsorption on dye-attached polymeric sorbents
Ö.OGÜN OKYAR
Yüksek Lisans
Türkçe
1998
Kimya MühendisliğiHacettepe ÜniversitesiKimya Mühendisliği Ana Bilim Dalı
PROF. DR. ERHAN PİŞKİN
