İnsan adenoviral vektör aracılı SARS-COV-2 spike gen naklinin pandemik koronavirüs hastalığına karşı (COVID-19) gelişen hücresel ve hümoral bağışıklık yanıtının belirlenmesi
Identification of the cellular and humoral immune responses elicited against COVID-19 through the transfer of the SARS-COV-2 spike gene via a human adenoviral vector
- Tez No: 1007602
- Danışmanlar: PROF. DR. SALİH ŞANLIOĞLU
- Tez Türü: Doktora
- Konular: Tıbbi Biyoloji, Genetik, Medical Biology, Genetics
- Anahtar Kelimeler: Belirtilmemiş.
- Yıl: 2024
- Dil: Türkçe
- Üniversite: Akdeniz Üniversitesi
- Enstitü: Sağlık Bilimleri Enstitüsü
- Ana Bilim Dalı: Tıbbi Biyoloji ve Genetik Ana Bilim Dalı
- Bilim Dalı: Belirtilmemiş.
- Sayfa Sayısı: Belirtilmemiş.
Özet
Amaç: SARS-CoV-2 virüsünün neden olduğu COVID-19'a karşı güvenli ve etkili bir aşı geliştirme aciliyeti, çeşitli aşı platformlarının geliştirilmesine vesile olmuştur. Bu platformlar arasında, özellikle adenovirüsleri kullanan viral vektör bazlı aşılar önemli avantajlar sunmaktadır. Adenovirüs bazlı vektörler, geniş doku tropizmi, iyi karakterize edilmiş vektör genomları, yüksek transgen kapasitesi, doğal adjuvan etkisi ve transgene özgü güçlü T hücresi ve B hücresi yanıtları oluşturma yetenekleri ile dikkat çekmektedir. Bu çalışma, insan adenoviral vektörlerini kullanarak SARS-CoV-2 Spike proteinini kodlayan aşı vektörlerini (Ad5Spike) geliştirmeyi amaçlamaktadır. Yöntem: Gateway® Klonlama Teknolojisi kullanılarak SARS-CoV-2 Spike proteinini kodlayan bir insan adenoviral ekspresyon plazmidi (pAd5Spike) oluşturuldu. Ad5Spike, 293A hücrelerine pAd5Spike'ın CaCO4 aracılı geçici transfeksiyonu ile üretildi. Ardından CsCl yoğunluk gradientli ultrasantrifügasyon ile saflaştırıldı ve yoğunlaştırıldı. Bağışıklama için ilgili aşı vektörü, 10 mM Tris-Cl tamponunda farklı konsantrasyonlarda (108, 1010 ve 1012 viral partikül) 6-8 haftalık dişi BALB/c farelerine intraperitoneal olarak enjekte edildi. Hem hücresel hem de hümoral bağışıklık yanıtları, bağışıklamadan sonraki 30 ve 90 günlerde ELISA, ELISpot ve nötralizasyon testleri kullanılarak değerlendirildi. Bulgular: Aşılanan farelerin serumunda anti-spike IgG seviyelerinin yükseldiği gözlemlendi. Aşılanan farelerin T hücrelerinden TNF-α, IFN-γ ve IL-2 sitokinlerinin salınımının bariz bir şekilde arttığı görüldü. 3. nesil lentiviral bazlı bir psödovirüs kullanılarak yapılan nötralizasyon testleri, özellikle yüksek doz grubunda SARS-CoV-2'ye karşı nötralize edici antikorların varlığını gösterdi. Sonuç: Bu çalışma geliştirilen Ad5Spike vektörlerinin hem hümoral hem de hücresel bağışıklık mekanizmalarını aktive etme yeteneğinin olduğunu göstermektedir. Dolayısıyla bu aşının COVID-19'a karşı etkili bir koruyucu bağışıklık sağlayabilme potansiyelinin olduğunu söyleyebiliriz.
Özet (Çeviri)
Aim: The urgency of developing a safe and effective vaccine against COVID-19, caused by the SARS-CoV-2 virus, has led to the development of various vaccine platforms. Among these, viral vector-based vaccines, particularly those utilizing adenoviruses, offer significant advantages. Adenovirus-based vectors are notable for their broad tissue tropism, well-characterized vector genomes, high transgene capacity, natural adjuvant effect, and their ability to elicit robust transgene-specific T cell and B cell responses. This study aims to develop vaccine vectors encoding the SARS-CoV-2 Spike protein (Ad5Spike) using human adenoviral vectors. Method: A human adenoviral expression plasmid encoding the SARS-CoV-2 Spike protein (pAd5Spike) was constructed using Gateway® Cloning Technology. Ad5Spike was produced by transient transfection of pAd5Spike into 293A cells via the CaCO4-mediated method, then purified and concentrated by CsCl density gradient ultracentrifugation. For immunization, the vector was intraperitoneally injected at different concentrations (108, 1010, and 1012 viral particules) into 6-8-week-old female BALB/c mice in 10 mM Tris-Cl. Both cellular and humoral immune responses were evaluated at 30- and 90-days post-immunization using ELISA, ELISpot, and neutralization assays. Results: Elevated levels of anti-spike IgG were observed in the serum of vaccinated mice. Increased secretion of TNF-α, IFN-γ, and IL-2 cytokines from T cells of vaccinated mice was observed. Neutralization tests conducted using a third-generation lentiviral-based pseudovirus demonstrated the presence of neutralizing antibodies against SARS-CoV-2, particularly in the high-dose group. Conclusion: This study illustrates the generation of the Ad5Spike vector with the potential to activate both humoral and cellular immune systems. Thus, we can conclude that this vaccine may provide protection against COVID-19.
Benzer Tezler
- Bakuloviral vektörler aracılı sitokin ve intihar gen tedavileri
Baculoviral vector mediated cytokine and suicide gene therapies
SEDEF HANDE AKTAŞ
Doktora
Türkçe
2015
BiyoteknolojiAnkara ÜniversitesiBiyoteknoloji Ana Bilim Dalı
PROF. DR. HAKAN AKBULUT
- Replikasyon defektif tip 5 adenoviral vektörlerin tümör hücrelerinde sitokin gen ekspresyonuna etkileri
Effects of cytokine gene expression of replicative defective TYPE 5 adenoviral vectors on tumor cells
İREM ZENGİN
Yüksek Lisans
Türkçe
2023
İç HastalıklarıAnkara Üniversitesiİç Hastalıkları Ana Bilim Dalı
PROF. DR. HAKAN AKBULUT
- Kanserde damar endoteline yönelik gen tedavisi ajanları geliştirilmesi
Designing gene therapy vectors targeting tumor cell endothelium
PINAR BAYDIN
Doktora
Türkçe
2011
Tıbbi BiyolojiAnkara ÜniversitesiTıbbi Biyoloji Ana Bilim Dalı
PROF. DR. HAKAN AKBULUT
- Mezenkimal kök hücrelerinin ve kompozit iskelelerin kullanımıyla kemik doku mühendisliği
Bone tissue engineering using mesenchymal stem cells and composite scaffolds
AYSEL KOÇ
- Sığır rotavirus VP7 ifade eden adenovirus vektörü (rAd-VP7) ile bağışıklanan farelerde humoral ve hücresel yanıtın incelenmesi
Examination of humoral and cellular response in mice immunised with adenovirus vector (rAd-VP7) expressing cattle rotavirus VP7
BUKET GÜL
Doktora
Türkçe
2025
Veteriner HekimliğiAnkara ÜniversitesiVeterinerlik Viroloji Ana Bilim Dalı
PROF. DR. FERAY ALKAN