Sığır rotavirus VP7 ifade eden adenovirus vektörü (rAd-VP7) ile bağışıklanan farelerde humoral ve hücresel yanıtın incelenmesi
Examination of humoral and cellular response in mice immunised with adenovirus vector (rAd-VP7) expressing cattle rotavirus VP7
- Tez No: 966060
- Danışmanlar: PROF. DR. FERAY ALKAN
- Tez Türü: Doktora
- Konular: Veteriner Hekimliği, Veterinary Medicine
- Anahtar Kelimeler: Belirtilmemiş.
- Yıl: 2025
- Dil: Türkçe
- Üniversite: Ankara Üniversitesi
- Enstitü: Sağlık Bilimleri Enstitüsü
- Ana Bilim Dalı: Veterinerlik Viroloji Ana Bilim Dalı
- Bilim Dalı: Veterinerlik Virolojisi Bilim Dalı
- Sayfa Sayısı: Belirtilmemiş.
Özet
Bu tez çalışmasında, G6 genotipine ait bovine rotavirus VP7 gen bölgesi, insan kökenli replikasyon defektif adenovirus tip 5 (Ad5) vektörüne klonlanmış ve elde edilen rekombinant Ad5-VP7 yapısının bağışıklık yanıtı üzerindeki etkileri, BALB/c fare modeli kullanılarak değerlendirilmiştir. Çalışmada üç hafta arayla iki doz intraperitoneal uygulama yapılmış ve ikinci dozdan yedi gün sonra, deneme gruplarındaki (rekombinant Ad5-VP7 vektör grubu, HuAd5 vektör kontrol grubu ve HLS negatif kontrol grubu) farelerden kan ve dalak örnekleri alınarak humoral ve hücresel bağışıklık yanıtları analiz edilmiştir. Serum örneklerinden yapılan nötralizasyon testinde, rekombinant Ad5-VP7 uygulanan grupta anlamlı düzeyde rotavirus-spesifik nötralizan antikor üretimi gözlenmiş (log2SN₅₀ = 4.33), kontrol gruplarında ise nötralizasyon saptanmamıştır. Flow sitometri temelli sitokin analizinde, rAd5-VP7 grubu farelerinde IFN-γ ve IL-4 düzeylerinde istatistiksel olarak anlamlı artış belirlenmiştir (p<0,001 ve p=0,02). IL-6 düzeyi hem boş Ad5 hem de rekombinant Ad5 gruplarında artmış, ancak iki grup arasında anlamlı fark gözlenmemiştir (p=0,003). IL-13 düzeylerinde gruplar arasında fark bulunmamış (p=0,654), IL-2, IL-5, IL-10 ve TNF-α ise tüm gruplarda saptanamamıştır. Hücresel bağışıklık yanıtını değerlendirmek amacıyla yapılan ELISPOT analizinde, rAd5-VP7 ile immünize edilen farelerden elde edilen splenositlerin rotavirus ile in vitro stimülasyonu sonucunda IFN-γ spot sayısında anlamlı artış gözlenmiştir. Bu yanıt, HuAd5 ve HLS gruplarında izlenmeyen bir artışı temsil etmiş ve antijen-spesifik T hücre yanıtının göstergesi olarak değerlendirilmiştir. Elde edilen veriler, VP7 antijeninin Ad5 vektörü aracılığıyla sunulmasının sistemik düzeyde antijen-spesifik nötralizan antikor üretimini sağladığını; ayrıca hem Th1 (IFN-γ) hem de Th2 (IL-4) hücre yanıtlarını aktive ederek çift yönlü bir immün yanıt oluşturduğunu göstermektedir. Bu bağlamda, çalışma, bovine rotavirus enfeksiyonuna karşı geliştirilen ilk Ad5-vektör temelli aşı örneği olması açısından literatürde özgün bir yer edinmektedir.
Özet (Çeviri)
In this thesis study, the bovine rotavirus VP7 gene region of the G6 genotype was cloned into the human replication defective adenovirus type 5 (Ad5) vector and the effects of the resulting recombinant Ad5-VP7 construct on the immune response were evaluated using the BALB/c mouse model. In the study, two doses were administered intraperitoneally at three-week intervals and seven days after the second dose, blood and spleen samples were taken from mice in the experimental groups (recombinant Ad5-VP7 vector group, HuAd5 vector control group and HLS negative control group) and humoral and cellular immune responses were analyzed. In the virus neutralization assay conducted on serum samples, a significant level of rotavirus-specific neutralizing antibody production was observed in the recombinant Ad5-VP7 group (log₂SN₅₀ = 4.33), while no neutralization was detected in the control groups. Flow cytometry-based cytokine analysis revealed a statistically significant increase in IFN-γ and IL-4 levels in the rAd5-VP7 group (p<0.001 and p=0.02, respectively). IL-6 levels were elevated in both the empty Ad5 and recombinant Ad5 groups, although no significant difference was observed between them (p=0.003). No significant differences were found among groups for IL-13 (p=0.654), and IL-2, IL-5, IL-10, and TNF-α levels were undetectable in all groups. To assess the cellular immune response, an ELISPOT assay was performed using splenocytes obtained from rAd5-VP7-immunized mice. Following in vitro stimulation with rotavirus, a significant increase in IFN-γ spot count was detected in the rAd5-VP7 group. This response, which was absent in the HuAd5 and HLS groups, was interpreted as an indication of an antigen-specific T cell response. The findings demonstrate that presenting the VP7 antigen via the Ad5 vector induced antigen-specific systemic neutralizing antibody production and activated both Th1 (IFN-γ) and Th2 (IL-4) immune responses. In this context, the study holds a unique position in the literature as the first Ad5 vector-based vaccine developed against bovine rotavirus infection.
Benzer Tezler
- Sığır rotavirus vp4 ve vp7 proteinlerinin lactobacillus casei'de açıklatılması
Expression of vp4 and vp7 proteins of bovine rotavirus in lactobacillus casei
EMİNE ATALAY
Yüksek Lisans
Türkçe
2021
Veteriner HekimliğiErciyes ÜniversitesiVeterinerlik Mikrobiyolojisi Ana Bilim Dalı
DR. ÖĞR. ÜYESİ İBRAHİM SÖZDUTMAZ
- Farklı hayvan türlerinde saptanan rotavirusların VP4, VP6, VP7 ve NSP4 gen bölgelerinin moleküler karakterizasyonu
Molecular characterization of VP4, VP6, VP7 and NSP4 genes of rotaviruses strains in different animal species
MEHMET ÖZKAN TİMURKAN
- İshalli neonatal buzağılarda rotavirus, coronavirus, e. coli k99 ve cryptosporidium parvum'un hızlı test kitleri ile teşhisi ve bu hastalıkların maternal immünite ile ilişkisinin araştırılması
Determination of rotavirus, coronavirus, e. coli k99, cryptosporidium parvum in neonatal calves with diarrhea by rapid diagnostic test kits and investigation of relationship between these diseases and maternal immunity.
MURAT AL
Yüksek Lisans
Türkçe
2012
Veteriner HekimliğiFırat Üniversitesiİç Hastalıkları Ana Bilim Dalı
DOÇ. DR. ENGİN BALIKCI
- Neonatal buzağı ishallerine karşı ticari bovine rotavirus aşısı ile aşılanan gebe sığırlardan doğan buzağılarda pasif bağışıklık düzeyinin araştırılması
Investigation of passive immunity level in calves from pregnant cattle vaccinated with bovine rotavirus vaccine for neonatal calf diarrhea
İBRAHİM OKTAY KURT
Yüksek Lisans
Türkçe
2023
Veteriner HekimliğiBurdur Mehmet Akif Ersoy ÜniversitesiVeterinerlik Viroloji Ana Bilim Dalı
PROF. DR. YAKUP YILDIRIM
- Manisa yöresinde neonatal buzağı ishalleri üzerine etiyolojik araştırmalar
Etiological investigations on neonatal calves in Manisa region
DURSUN BAL
Yüksek Lisans
Türkçe
2019
Veteriner HekimliğiAfyon Kocatepe ÜniversitesiVeterinerlik İç Hastalıkları Ana Bilim Dalı
PROF. DR. TURAN CİVELEK