Mastitisli inek sütlerinden izole edilen E. coli'nin genişletilmiş spektrumlu beta laktamaz aktivitesinin ve biofilm oluşturma özelliklerinin belirlenmesi
Determination of extended spectrum beta lactamase activity and biofilm formation properties of E. coli isolated from milk of cows with mastitis
- Tez No: 998983
- Danışmanlar: PROF. DR. SEYYAL AK
- Tez Türü: Doktora
- Konular: Mikrobiyoloji, Veteriner Hekimliği, Microbiology, Veterinary Medicine
- Anahtar Kelimeler: Belirtilmemiş.
- Yıl: 2026
- Dil: Türkçe
- Üniversite: İstanbul Üniversitesi-Cerrahpaşa
- Enstitü: Lisansüstü Eğitim Enstitüsü
- Ana Bilim Dalı: Veterinerlik Mikrobiyolojisi Ana Bilim Dalı
- Bilim Dalı: Veterinerlik Mikrobiyolojisi Bilim Dalı
- Sayfa Sayısı: Belirtilmemiş.
Özet
Bu çalışmada, Marmara bölgesinde süt sığırcılığı yapan işletmelerden alınan mastitisli süt örneklerinde beta-laktam ve çoklu ilaç dirençli Escherichia coli suşlarının fenotipik ve genotipik olarak belirlenmesi, bu izolatların biyofilm oluşturma özelliklerinin saptanması amaçlandı. Çalışmada, klinik ve subklinik mastitisli süt sığırlarından steril yöntemlerle alınan 1200 adet süt örneği kullanıldı. Mikrobiyoloji Anabilim Dalı laboratuvarına ulaştırılan mastitis şüpheli 1200 adet süt örnekleri homojenize edildi. Homojenize sütler MacConkey agarlara ekildi. Elde edilen izolatların konvansiyonel ve BD Phoneix ID otomatik identifikasyon cihazı ile identifikasyonları sağlandı. Hedeflenen 100 E.coli izolat sayısına ulaşıldığında GSBL varlığının araştırılması için tüm izolatlar Sefotaksim Sodyum Tuzu (1mg/L) içeren MacConkey agarlara pasajlandı. Sefotaksimli MacConkey agarda üreyen E. coli suşlarında GSBL varlığının saptanması amacıyla fenotipik GSBL tarama ve doğrulama testleri yapıldı. Çoklu ilaç direncinin belirlenmesi disk difüzyon ve MİK (BD Phoenix ™ NMIC/ID-433 kitinde yer alan antimikrobiyaller) yöntemleri ile belirlendi. Disk difüzyon testinde, her bir izolata ayrı ayrı antibiyotik duyarlılık testleri uygulandı. Çoklu ilaç direncinin varlığı 10 farklı antimikrobiyal ilaç grubundan 31 bileşik kullanılarak belirlendi. Biyofilm oluşumunun belirlenmesi amacıyla elde edilen tüm E. coli izolatları MHA besiyerine pasajlandı. E. coli izolatlarının fenotipik biyofilm oluşturma yeteneklerinin belirlenmesi amacıyla cam tüp ve Kongo Red Agar yöntemleri uygulandı. Fenotipik sonuçlar dikkate alınmadan çalışmalar sonucunda elde edilen tüm E. coli izolatlarının PCR ile GSBL ve AmpC beta laktamaz direnç genlerinin varlığı araştırıldı Toplanan mastitis şüpheli 1200 adet süt örneklerinin MacConkey agarlara yapılan ekimleri sonucunda 100 adet E. coli izole ve identifiye edildi. Bu izolatların sefotaksim katkılı MacConkey agarlara ekimleri sonucunda 27'sinin sefotaksime dirençli E. coli olduğu belirlendi. Sefotaksim katkılı MacConkey Agarda Üreyen 27 adet E. coli izolatının 7'sinin GSBL doğrulama testlerinin pozitif, fenotipik AmpC testlerinin negatif olduğu belirlendi. Sefotaksimsiz MacConkey besiyerinde üreyen 100 E. coli izolatının 62'sinin genotipik olarak beta laktamaz aktivitesinin pozitif olduğu belirlendi. Fenotipik olarak pozitif olduğu saptanan 7 adet E.coli izolatı genotipik da olarak pozitifdi. İzolatlarda beta-laktamaz genlerinin ana ve alt gruplarının dağılımı belirlendi. Dağılım blaOXA 10 (n=44), blaCTX-M (n=34), blaCTX-M-1(n=20), blaTEM(7), blaCTX-M-2(n=5), blaCTX-M-9(n=3), blaCTX-M-15 (n=1), blaSHV (n=1) geni olarak saptandı. Fentotipik olarak biyofilm oluşturma özelliğinin izolatlarda %76 olarak saptandı. E. coli izolatlarının %24(n=24)'ünde çoklu ilaç dirençliliği belirlendi. Çoklu direnç gösteren suşların arasında fenotipik GSBL ve aynı zamanda genotipik pozitif de olan suşların olduğu, Fenotipik GSBL pozitif E. coli (n:7) suşlarınn tümünün çoklu ilaç direncine sahip olduğu saptandı. Ayrıca çoklu ilaç dirençli 26 E. coli izolatının 15'inin biyofilm oluşturduğu belirlendi. Elde edilen sonuçlar süt sığırlarından izole edilen fenotipik ve/veya genotipik beta laktamaz üreten kommensal E. coli suşlarının çeşitli yollarla insanlara bulaşabilmesi nedeniyle hayvan sağlığı dışında insan sağlığı açısından da değerlendirilmesi gerektiği, bu durumun önemli bir halk sağlığı riski oluşturabileceği olarak değerlendirildi. Özellikle çiğ süt tüketiminin yaygın olduğu bölgelerde, GSBL üreten ayrıca çoklu ilaç direncine sahip olan E. coli suşlarının insanlara geçme olasılığının yüksek olması, hayvansal ürünler yoluyla geçen antibiyotik dirençli bakterilerin üzerinde durulması gerekliliği düşünüldü.
Özet (Çeviri)
In this study, it was aimed to phenotypically and genotypically characterize beta-lactam and multidrug-resistant Escherichia coli strains isolated from mastitic milk samples collected from dairy cattle farms in the Marmara region, and to determine the biofilm-forming abilities of these isolates. A total of 1,200 milk samples were aseptically collected from cows with clinical and subclinical mastitis. Upon arrival at the Department of Microbiology laboratory, all mastitis-suspected milk samples were homogenized and inoculated onto MacConkey agar. The obtained isolates were identified using conventional methods and the BD Phoenix ID automated identification system. After reaching the targeted number of 100 E. coli isolates, all isolates were subcultured onto MacConkey agar supplemented with cefotaxime sodium salt (1 mg/L) for screening the presence of extended-spectrum beta-lactamase (GSBL). Phenotypic GSBL screening and confirmatory tests were performed on E. coli strains that grew on cefotaxime-supplemented MacConkey agar. Multidrug resistance was determined using disk diffusion and minimum inhibitory concentration (MIC) methods, employing the antimicrobial agents included in the BD Phoenix™ NMIC/ID-433 panel. In the disk diffusion assay, antimicrobial susceptibility testing was performed individually for each isolate. Multidrug resistance was evaluated using 31 antimicrobial compounds representing 10 different antimicrobial classes. For the assessment of biofilm formation, all E. coli isolates were subcultured onto Mueller–Hinton agar. Phenotypic biofilm-forming ability was evaluated using the glass tube method and Congo Red Agar assay. Independently of phenotypic results, all E. coli isolates obtained during the study were examined by PCR for the presence of GSBL and AmpC beta-lactamase resistance genes. As a result of culturing the 1,200 mastitis-suspected milk samples on MacConkey agar, 100 E. coli isolates were recovered and identified. Subsequent inoculation of these isolates onto cefotaxime-supplemented MacConkey agar revealed that 27 isolates were resistant to cefotaxime. Among these 27 E. coli isolates, 7 were positive in GSBL confirmatory tests and negative in phenotypic AmpC tests. Among the 100 E. coli isolates grown on cefotaxime-free MacConkey agar, 62 were found to be genotypically positive for beta-lactamase activity. All seven phenotypically GSBL-positive isolates were also genotypically positive. The distribution of major and subgroup beta-lactamase genes among the isolates was determined as follows: blaOXA-10 (n = 44), blaCTX-M (n = 34), blaCTX-M-1 (n = 20), blaTEM (n = 7), blaCTX-M-2 (n = 5), blaCTX-M-9 (n = 3), blaCTX-M-15 (n = 1), and blaSHV (n = 1). Phenotypic biofilm formation was detected in 76% of the isolates. Multidrug resistance was identified in 24% (n = 24) of the E. coli isolates. Among the multidrug-resistant strains, isolates that were both phenotypically GSBL-positive and genotypically positive were present. All phenotypically GSBL-positive E. coli isolates (n = 7) exhibited multidrug resistance. In addition, biofilm formation was observed in 15 of the multidrug-resistant E. coli isolates. The results indicate that phenotypic and/or genotypic beta-lactamase-producing commensal E. coli strains isolated from dairy cattle should be evaluated not only in terms of animal health but also from a human health perspective, due to their potential transmission to humans through various routes, representing a significant public health risk. Particularly in regions where the consumption of raw milk is common, the high likelihood of transmission of GSBL-producing and multidrug-resistant E. coli strains to humans highlights the necessity of addressing antimicrobial-resistant bacteria transmitted via animal-derived food products
Benzer Tezler
- Sığır ve koyun mastitislerinden izole edilen Escherichia coli'lerin çeşitli özelliklerinin araştırılması
Investigation of various characteristics of E. coli isolated from cattle and sheep mastitis
HÜRRİYET BÜLBÜL
Doktora
Türkçe
2000
Veteriner HekimliğiAnkara ÜniversitesiMikrobiyoloji Ana Bilim Dalı
PROF. DR. K. SERDAR DİKER
- Kistik ovaryumlu ineklerde kan serumunda progesteron düzeyleri ile sütün biyokimyasal ve mikrobiyolojik profilinin araştırılması
Blood progesterone concentrations and milk biochemical and microbiological profile in dairy cows with ovarian cysts
NESLİHAN GÜRKAN
Doktora
Türkçe
2014
Veteriner Hekimliğiİstanbul ÜniversitesiVeterinerlik Doğum ve Jinekolojisi Ana Bilim Dalı
PROF. DR. İSMAİL KIRŞAN
- Subklinik mastitisli inek sütlerinden izole edilen stafilokoklarda antibiyotik duyarlılığı ve plazmit varlığının araştırılması
Investigation of antibiotic susceptibility and presence of plasmids in staphylococcus isolated from cow milk with subclinical mastitis
AFŞAR ÇELİK
Yüksek Lisans
Türkçe
2008
MikrobiyolojiYüzüncü Yıl ÜniversitesiMikrobiyoloji Ana Bilim Dalı
YRD. DOÇ. DR. HASAN SOLMAZ
- Subklinik mastitisli sığır sütlerinden izole edilen staphylococcus aureus izolatlarının virulens genleri ve koagulaz gen polimorfizmine göre moleküler tiplendirilmesi
Molecular typing of staphylococcus aureus isolated from subclinic bovine mastitic milk samples on the basis of virulence genes and goagulase gene polymorphism
BESİME GÜNAYDIN
Yüksek Lisans
Türkçe
2007
Veteriner HekimliğiMustafa Kemal ÜniversitesiMikrobiyoloji Ana Bilim Dalı
Y.DOÇ.DR. ÖZKAN ASLANTAŞ
- Mastitisli inek sütlerinden izole edilen streptokok ve stafilokok etkenlerinde genetik polimorfizmin araştırılması
Investigation of genetic polymorphisms in Streptococcus and Staphylococcus agents isolated from bovine milk samples
MURAT KARAHAN
Doktora
Türkçe
2005
MikrobiyolojiFırat ÜniversitesiMikrobiyoloji Ana Bilim Dalı
DOÇ. DR. BURHAN ÇETİNKAYA