Geri Dön

Hedefe yönelik kanser tedavisi için tek zincirli değişken fragman-anti mikrobiyal peptit füzyon proteininin rekombinant üretimi ve karakterizasyonu

Recombinant production and characterization of single-chain variable fragment-antimicrobial peptide fusion protein for targeted cancer therapy

PDF İndir

  1. Tez No: 983471
  2. Yazar: SÜMEYYE ELİF ÖZTÜRK
  3. Danışmanlar: DOÇ. DR. EMEL ORDU
  4. Tez Türü: Yüksek Lisans
  5. Konular: Biyoteknoloji, Biotechnology
  6. Anahtar Kelimeler: Terapötik protein ve peptidler, Kanser, Rekombinant DNA Teknolojisi, Antikanser, DNA-rekombinant, Therapeutic proteins and peptides, Cancer, Recombinant DNA Technology, Anticancer, DNA-recombinant
  7. Yıl: 2025
  8. Dil: Türkçe
  9. Üniversite: Yıldız Teknik Üniversitesi
  10. Enstitü: Fen Bilimleri Enstitüsü
  11. Ana Bilim Dalı: Moleküler Biyoloji ve Genetik Ana Bilim Dalı
  12. Bilim Dalı: Moleküler Biyoloji ve Genetik Bilim Dalı
  13. Sayfa Sayısı: Belirtilmemiş.

Özet

Kanser, ülkemizde ve dünyada başlıca ölüm nedenlerinden biri olup, halk sağlığı açısından önemi giderek artan küresel bir sağlık sorunudur. Normal fizyolojik koşullarda hücre proliferasyonu, belirli sinyal yolakları ve düzenleyici moleküler mekanizmalar aracılığıyla sıkı bir şekilde kontrol edilmektedir. Ancak bu mekanizmaların bozulması, hücrelerde proliferasyonun denetimden çıkmasına ve kontrolsüz çoğalmaya yol açarak kanser hücrelerinin gelişimine zemin hazırlamaktadır. Kanser tedavisinde radyoterapi, kemoterapi ve cerrahi girişimler uzun yıllar boyunca temel tedavi yaklaşımları olarak kullanılagelmiştir. Bununla birlikte, son yıllarda moleküler biyoloji ve immünoloji alanındaki ilerlemeler sayesinde hedefe yönelik tedaviler ve immünoterapiler ön plana çıkmıştır. Bu yenilikçi stratejiler, farklı tedavi modellerinin optimal kombinasyonlarıyla birlikte kullanıldığında, tedavi etkinliğini anlamlı derecede artırma potansiyeline sahiptir. Geleneksel kemoterapi ajanlarına ek olarak terapötik proteinler ve peptitlerin kanser tedavisindeki önemi giderek artmaktadır. Bu grupta yer alan monoklonal antikorlar, enzimler, interferonlar, interlökinler, büyüme faktörleri, Fc füzyon proteinleri, pıhtılaşma faktörleri, hormonlar ve mühendislik ürünü protein iskeleleri gibi biyomoleküller, klinik uygulamalarda umut vadeden sonuçlar ortaya koymaktadır. Özellikle antikor temelli füzyon proteinleri, farklı biyolojik fonksiyonları tek bir molekülde bir araya getirme yetenekleri sayesinde, hedefe yönelik kanser tedavisinde önemli bir terapötik platform olarak öne çıkmaktadır. Bu tez çalışmasında, mide kanseri, gastroözofageal bileşke kanseri ve meme kanseri hücrelerinin poliferasyonundan sorumlu olan İnsan Epidermal Büyüme Faktör Reseptörü-2'ye (HER2), karşı geliştirilmiş kimerik bir monoklonal antikor olan Margetuximab'ın hafif ve ağır zincirlerinin değişken bölgeleri ile sistein aminoasiti bakımından zengin β-Defensin 2, bağlayıcı bir peptid olan (Gly3-Ser)4 ile birleştirilerek hedefe yönelik kanser tedavisinde kullanılmak üzere bir füzyon proteini (Anti-HER2-scFv-Defensin-β2) tasarlanmıştır. Tasarlanan 948 baz çifti uzunluğundaki füzyon gen sentez edildikten sonra pQE2 ekspresyon vektörüne aktarılmasının ardından en iyi ekspresyon koşullarının seçilmesi amacıyla E.coli'nin DH5α, Rosetta, Origami ve Codon Plus BL21 suşlarında heterolog ekspresyonu gerçekleştirilmiştir. Belirlenen koşullarda gerçekleştirilen protein ekspreyonu ve izolasyonu sonuçlarının değerlendirilmesinin ardından en yüksek protein miktarının E.coli'nin Origami suşundan elde edildiği tespit edilmiştir. Protein yüksek konsantrasyon ve saflıkta elde ederken aynı zamanda renatürasyonunu sağlamak amacıyla ultrafilitrasyon, diyaliz, liyafilizatör ve kolon ile tuzdan arındırma işlemi uygulanmıştır. Elde edilen Anti-HER2-scFv-Defensin-β2 füzyon proteini farklı konsantrasyonlarda uygulayarak MTT testi ile proteinin sitotoksik etkisi incelenmiştir. Her iki hücre hattında aynı saat dilimlerinde yapılan karşılaştırmalar sonucu elde ettiğimiz veriler, Anti-HER2 scFv-Defensin-β2 füzyon proteininin HER2 ekspresyonuna bağlı olarak seçici sitotoksik etki gösterdiğini ortaya koymaktadır.

Özet (Çeviri)

Cancer is one of the leading causes of death in our country and worldwide, and is a global health problem of increasing public health importance. Under normal physiological conditions, cell proliferation is tightly controlled through specific signaling pathways and regulatory molecular mechanisms. However, disruption of these mechanisms leads to uncontrolled cell proliferation and proliferation, paving the way for the development of cancer cells. Radiotherapy, chemotherapy, and surgery have been the primary treatment approaches for cancer treatment for many years. However, in recent years, advances in molecular biology and immunology have brought targeted therapies and immunotherapies to the forefront. These innovative strategies, when used in optimal combinations of different treatment modalities, have the potential to significantly increase treatment efficacy. In addition to traditional chemotherapy agents, therapeutic proteins and peptides are increasingly important in cancer treatment. Biomolecules such as monoclonal antibodies, enzymes, interferons, interleukins, growth factors, Fc fusion proteins, clotting factors, hormones, and engineered protein scaffolds are showing promising results in clinical applications. Antibody-based fusion proteins, in particular, stand out as important therapeutic platforms in targeted cancer therapy due to their ability to combine diverse biological functions in a single molecule. In this thesis, a fusion protein (Anti-HER2-scFv-Defensin-β2) was designed for targeted cancer therapy by combining the variable regions of the light and heavy chains of Margetuximab, a chimeric monoclonal antibody developed against Human Epidermal Growth Factor Receptor-2 (HER2), which is responsible for the proliferation of gastric cancer, gastroesophageal junction cancer, and breast cancer cells, with cysteine-rich β-Defensin 2 and a binding peptide (Gly3-Ser)4. The designed 948 base pair fusion gene was synthesized and transferred to the pQE2 expression vector. Heterologous expression was performed in E.coli strains DH5α, Rosetta, Origami, and Codon Plus BL21 to select the optimal expression conditions. Following evaluation of protein expression and isolation results performed under specified conditions, it was determined that the highest protein amount was obtained from the Origami strain of E.coli. Ultrafiltration, dialysis, lyophilization, and column-based desalting were employed to achieve high protein concentration and purity while facilitating its renaturation. The resulting anti-HER2-scFv-Defensin-β2 fusion protein was applied at different concentrations and its cytotoxic effect was investigated using the MTT assay. Data obtained from comparisons made at the same time points in both cell lines demonstrate that the anti-HER2 scFv-Defensin-β2 fusion protein exhibits selective cytotoxicity dependent on HER2 expression.

Benzer Tezler

  1. Tez No

    804349

    Development of anti-cancer antibody fragments with improved characteristics through antibody engineering approaches

    Antikor mühendisliği yaklaşımları ile iyileştirilmiş özelliklere sahip anti-kanser antikor fragmanlarının geliştirilmesi

    MERVE ARSLAN

    Doktora

    İngilizce

    İngilizce

    2023

    BiyomühendislikDokuz Eylül Üniversitesi

    Genom Bilimleri ve Moleküler Biyoteknoloji Ana Bilim Dalı

    DOÇ. DR. SİNAN GÜVEN

    DR. SİBEL KALYONCU UZUNLAR

  2. Tez No

    798866

    Exploring drug loading and release capacities of hexagonal boron nitrides (hBNs) in cancer treatment

    Hegzagonal bor nitrürlerin kanser tedavisi için ilaç yükleme ve salım kapasitelerinin araştırılması

    MISRA YAMANSAVAŞÇILAR NAGANLU

    Yüksek Lisans

    İngilizce

    İngilizce

    2023

    Kimya Mühendisliğiİstanbul Teknik Üniversitesi

    Kimya Mühendisliği Ana Bilim Dalı

    PROF. DR. FATMA SENİHA GÜNER

  3. Tez No

    655808

    Metastatik renal hücreli kanserde tümör infiltre lenfositlerin prognozla ilişkisi

    The correlation of tumor infiltrating lymphocytes and prognosis in metastatic renal cell cancer

    ONUR AĞCABAY

    Tıpta Uzmanlık

    Türkçe

    Türkçe

    2021

    OnkolojiGaziantep Üniversitesi

    İç Hastalıkları Ana Bilim Dalı

    DOÇ. DR. FATİH TEKER

  4. Tez No

    899959

    Serviks kanseri hücre hatlarında tek başına ve birlikte ef24/sisplatin uygulamasının BCL-2 ilişkili mirna ekspresyonlarına etkisinin değerlendirilmesi

    Effect of EF24/cisplatin treatment in cervical cancer cell lines and the analysis of BCL-2 related mirna expressions

    ESRA İŞÇİ BOSTANCI

    Doktora

    Türkçe

    Türkçe

    2024

    Moleküler TıpGazi Üniversitesi

    Tıbbi Biyoloji ve Genetik Ana Bilim Dalı

    DOÇ. DR. HACER İLKE ÖNEN

  5. Tez No

    920855

    Meme kanseri için hedeflenebilir ilaç salım sistemi olarak ikili ilaç yüklü albümin bazlı nanopartiküllerin geliştirilmesi

    Development of dual drug loaded albumin based nanoparticles as a targetable drug delivery system for breast cancer

    EZGİ TÜRKEŞ

    Doktora

    Türkçe

    Türkçe

    2025

    BiyomühendislikHacettepe Üniversitesi

    Biyomühendislik Ana Bilim Dalı

    PROF. DR. YEŞİM SAĞ AÇIKEL

Geri Dön