İnsan irisin proteininin domates - Solanum lycopersicum L. - meyve dokusunda ekspresyonu
Expression of human irisin protein in tomato - Solanum lycopersicum L. - fruit tissue
- Tez No: 971016
- Danışmanlar: DOÇ. DR. ŞENAY VURAL KORKUT, PROF. DR. SEMİHA ERİŞEN
- Tez Türü: Yüksek Lisans
- Konular: Biyoteknoloji, Biotechnology
- Anahtar Kelimeler: Belirtilmemiş.
- Yıl: 2025
- Dil: Türkçe
- Üniversite: Yıldız Teknik Üniversitesi
- Enstitü: Fen Bilimleri Enstitüsü
- Ana Bilim Dalı: Moleküler Biyoloji ve Genetik Ana Bilim Dalı
- Bilim Dalı: Moleküler Biyoloji ve Genetik Bilim Dalı
- Sayfa Sayısı: Belirtilmemiş.
Özet
İrisin, ilk kez 2012 yılında keşfedilen ve FNDC5'in proteolitik bir ürünü olan miyokin benzeri bir peptit hormonudur. Farklı doku ve organlarda hücre yüzey reseptörlerine bağlanıp sinyal yolaklarına katılarak çeşitli fizyolojik fonksiyonlar sergilemektedir. En önemli fonksiyonları arasında beyaz adipositleri esmerleştirme, glikoz metabolizmasını düzenleme, osteoblast proliferasyonunu artırma ve kanser hücrelerinin metastazını azaltma bulunmaktadır. Yapılan çalışmalar, irisinin özellikle obezitenin tedavisinde potansiyel bir farmasötik protein olarak işlev gördüğünü göstermiştir. Günümüzde bu sağlık sorununa bağlı olarak gelişen kardiyovasküler hastalıkların sıklığında artış görülmektedir. Bu bağlamda, irisinin adipoz dokulardaki UCP1 geninin ekspresyonundaki artışı sağlayarak termogenez ve kilo kaybını takiben enerji metabolizmasının düzenlenmesinde anahtar bir rol oynadığı kanıtlanmıştır. Bu bilgiler ışığında,“Gateway Klonlama Sistemi”kullanılarak irisin dizisinin pdonor207 ve pK7WGF2 vektörlerine yüksek verimlilikte klonlanması sağlanmıştır. E.coli DH5α transformasyonu ve koloni PCR ile doğrulama çalışmalarının ardından Sanger dizileme ile insert oryantasyonunun analizi gerçekleştirilmiştir. Geçici bitki transformasyonu için, A.tumefaciens GV3101 transformasyonunu takiben ticari satıcıdan temin edilen küçük ve orta boy domates meyvelerine şırınga enjeksiyonu gerçekleştirilmiştir. Agroinfiltrasyon çalışması, protein ekspresyon verimliliğinin artırılması amacıyla optimizasyon sonuçları baz alınarak tasarlanmıştır. Protein ekspresyonunun ardından, standart PCR reaksiyonu ile irisin sekansının domates meyvesine aktarımının kalitatif doğrulaması yapılmıştır. Bununla birlikte, Real-Time PCR çalışması ile domates meyvelerinin mRNA ekspresyon seviyeleri karşılaştırılmış ve bulgular istatistiksel olarak desteklenmiştir. Sonuçlar, küçük boy domates meyvelerindeki irisin ekspresyon seviyesinin daha yüksek olduğunu göstermiştir. Transkripsiyon düzeyinde doğrulamanın ardından, Western Blot analizi gerçekleştirilmiştir. Sonuçlar, irisinin beklenen moleküler ağırlıkta eksprese edildiğini ve glikozile formunun üretildiğini kanıtlamıştır. Bu bağlamda, yenilebilir bir bitki dokusu kullanılarak; sürdürülen farmasötik araştırmalar için alternatif bir yaklaşım sunulmuştur.
Özet (Çeviri)
Irisin is a myokine-like peptide hormone that was first discovered in 2012 and is a proteolytic product of FNDC5. It exhibits various physiological functions by binding to cell surface receptors and participating in signaling pathways in different tissues and organs. Its most important functions are browning white adipocytes, regulating glucose metabolism, increasing osteoblast proliferation and reducing metastasis of cancer cells. Studies demonstrated that irisin functions as a potential pharmaceutical protein, particularly in the context of obesity treatment. Nowadays, there is an increase in frequency of the cardiovascular diseases associated with this health issue. In this context, it has been proven that irisin plays a key role in the regulation of energy metabolism following thermogenesis and weight loss by increasing expression of UCP1 gene in adipose tissue. In the light of this information, high efficiency cloning of irisin sequence into pdonor207 and pK7WGF2 vectors was achieved using“Gateway Cloning System”. After E. coli DH5α transformation and colony PCR validation studies, insert orientation analysis was performed by Sanger sequencing. For transient plant transformation, syringe injection was performed into small and medium-sized tomato fruits obtained from commercial supplier following A.tumefaciens GV3101 transformation. Agroinfiltration study was designed based on optimization results to increase protein expression efficiency. Following protein expression, qualitative validation of transferring irisin sequence to tomato fruit was performed by standard PCR reaction. In addition, mRNA expression levels of tomato fruits were compared using Real-Time PCR and findings were statistically supported. The results demonstrated that irisin expression level was higher in small-sized tomato fruits. After validation at transcription level, Western Blot analysis was performed. The results proved that irisin was expressed at the expected molecular weight and its glycosylated form was produced. In this context, an alternative approach was presented for ongoing pharmaceutical research using an edible plant tissue.
Benzer Tezler
- İnsan ve doğal kaynaklı afetlerde kimliklendirmede dental görüntüleme tekniklerinden panoramik röntgen kullanımı
The use of panoramic X-ray from dental imaging techniques for identification in human-related and natural disasters
HAKAN BİŞİRİCİ
Yüksek Lisans
Türkçe
2023
Adli TıpHitit ÜniversitesiAdli Bilimler Ana Bilim Dalı
DOÇ. DR. AYŞEGÜL ŞARBAK
- İnsan yüzü imgelerinde dairesel hough dönüşümü kullanılarak göz durumu tespiti
Eye state detection in human faces by using circular hough transform
ÖMER FARUK SÖYLEMEZ
Yüksek Lisans
Türkçe
2012
Bilgisayar Mühendisliği Bilimleri-Bilgisayar ve KontrolFırat ÜniversitesiBilgisayar Mühendisliği Ana Bilim Dalı
YRD. DOÇ. DR. BURHAN ERGEN
- Senil kataraktlı insan lens ve ön kamera sıvısında meydana gelen değişimlerin moleküler biyolojisi
Molecular biology of changes formed in senile human cataractous lens and aqueous humor
İRFAN EMRE
- Anaerobik eşikteki iş gücünde yapılan egzersizin irisin, nesfatin-1 ve oksidatif stres üzerine olan etkilerinin belirlenmesi
Anaerobik eşikteki iş gücünde yapilan egzersizin irisin, nesfatin-1 ve oksidatif stres üzerine olan etkilerinin belirlenmesi determination of the effects of exercise corresponded to work rate at the anaerobic threshold on irisin, nesfatin-1 and oxidative stress
MUSTAFA DENİZ
- Polikistik over sendromu'nda insülin direncinde irisin, bakır ve çinkonun rolü
The role of irisin, copper and zinc levels on insulin resistance in polycystic ovary syndrome
MUSTAFA BAYRAKTAR
Yüksek Lisans
Türkçe
2020
BiyokimyaSelçuk ÜniversitesiTıbbi Biyokimya Ana Bilim Dalı
DOÇ. DR. BAHADIR ÖZTÜRK