Fare embriyolarının in vitro geliştirilmesi ve vitrifikasyonunda nobiletinin etkisi
Effect of nobiletin in the in-vitro development and vitrification of mice embryo
- Tez No: 918486
- Danışmanlar: PROF. DR. SEMA BİRLER, PROF. DR. AYŞE NAZLI BAŞAK
- Tez Türü: Doktora
- Konular: Veteriner Hekimliği, Veterinary Medicine
- Anahtar Kelimeler: Belirtilmemiş.
- Yıl: 2025
- Dil: Türkçe
- Üniversite: İstanbul Üniversitesi-Cerrahpaşa
- Enstitü: Lisansüstü Eğitim Enstitüsü
- Ana Bilim Dalı: Dölerme ve Suni Tohumlama Ana Bilim Dalı
- Bilim Dalı: Belirtilmemiş.
- Sayfa Sayısı: Belirtilmemiş.
Özet
Reaktif oksijen türleri (ROS), hücrelerin normal işleyişi sırasında üretilen ve bazı metabolik süreçler için faydalı olabilen moleküllerdir. Ancak, aşırı ROS üretimi, hücrelerde oksidatif strese yol açarak apoptozu tetikleyebilir. Embriyoların in vitro kültürü sırasında ve dondurulup çözündürülmesi sonrasında aşırı ROS üretimi, hücre membranı lipidlerinin peroksidasyonuna, mitokondriyal disfonksiyona ve DNA hasarına neden olarak hücresel canlılığı ciddi şekilde tehdit eder. Bu stresi azaltmada antioksidanlar önemli bir rol oynar ve ROS ile etkileşime girerek onları zararsız hale getirir. Böylece oksidatif stresi önleyerek hücreleri korur. Nobiletin, turunçgillerden izole edilmiş polimetoksillenmiş bir flavonoiddir. Nobiletinin birçok in vitro deneyde antioksidan etkisine dair literatür bulunurken, fare embriyo gelişimi ve dondurulması konusunda kullanıldığı bir çalışma bulunamamıştır. Bu çalışmada, nobiletinin antioksidan etkisi üç aşamada incelenmiştir. İlk olarak, in vitro embriyonik hücreler üzerinde toksisite testi gerçekleştirilmiştir. Toksisite testi sonuçlarına dayanarak belirlenen 25 µM, 50 µM ve 75 µM nobiletin dozları, tek hücreli fare embriyolarının embriyo kültür medyumuna eklenmiş ve in vitro embriyo gelişimi ile embriyo kalitesi değerlendirilmiştir. Son aşamada, dondurulan embriyolar çözündürülerek, nobiletin eklenmiş medyumlarda embriyoların canlılık durumu incelenmiştir. Nobiletin kullanımı ile embriyo gelişimi oranlarında bakıldığında, doz grupları olan Nob25 (%58,15), Nob50 (%42,10) ve Nob75'in (%48,98) kontrol grubundan (%67,19) anlamlı şekilde düşük olduğu görülmüştür (p<0.05). Blastosist hücre sayılarının ortalaması açısından değerlendirildiğinde yine kontrol grubunun (53,61) diğer gruplara göre (DMSO: 45,98, Nob25 49,74; Nob50: 44,57, Nob75: 45,82) anlamlı şekilde yüksek olduğu görülmüştür. Vitrifikasyon öncesi ve sonrası nobiletinli medyumlarda kültüre edilen embriyoların çözündürmesonrası canlılık oranları Nob75 grubunda en yüksek (%61,9) olmasına rağmen diğer gruplar ile farkın (Kontrol: %53,2, DMSO: %54,2, Nob25: %42,9, Nob50: %38,1) anlamlı olmadığı saptanmıştır. Sunulan tez çalışması ile embriyoların in vitro geliştirilmesi ve uzun süreli saklanmasında in vitro kültürde kullanılabilecek yeni bir antioksidan ile protokol oluşturulmaya çalışılmıştır. Ancak çalışmanın sonuçları, tek hücreli fare embriyolarının in vitro kültüründe antioksidan olarak nobiletin kullanımının beklenen etkiyi oluşturmadığını göstermektedir.
Özet (Çeviri)
Reactive oxygen species (ROS) are molecules produced during the normal functioning of cells and can be beneficial for some metabolic processes. However, excessive ROS production can lead to oxidative stress in cells and trigger apoptosis. Excessive ROS production during in vitro culture of embryos and after vitrification can cause peroxidation of cell lipids, mitochondrial dysfunction, seriously threatening cellular viability. Antioxidants play an important role in reducing this stress rendering them harmless. Thus, they protect cells by preventing oxidative stress. Nobiletin is a polymethoxylated flavonoid isolated from citrus fruits. While there is literature on the antioxidant effect of nobiletin in many in vitro experiments, there is no study on mouse embryo development and freezing. In this study, the antioxidant effect of nobiletin was investigated in three steps. First, a toxicity test was performed on in vitro embryonic cells. Based on the toxicity test results, the doses of 25 µM, 50 µM and 75 µM nobiletin were added to the embryo culture medium of single-cell mouse embryos and in vitro embryo development and embryo quality were evaluated. In the last step, frozen embryos were thawed and the viability of the embryos was examined in media supplemented with nobiletin. Embryo development rates were significantly lower in the Nob25 (58.15%), Nob50 (42.10%) and Nob75 (48.98%) dose groups than in the control group (67.19%) (p<0.05). In terms of the mean number of blastocyst cells, the control group (53.61) was significantly higher than the other groups (DMSO: 45.98, Nob25 49.74; Nob50: 44.57, Nob75: 45.82). Although the post-thawing viability rates of embryos cultured in nobiletin media before and after vitrification were highest in the Nob75 group (61.9%), the difference with the other groups (Control: 53.2%, DMSO: 54.2%, Nob25: 42.9%, Nob50: 38.1%) was not significant. In this thesis, we tried to establish a protocol with a new antioxidant that can be used in in vitro culture for in vitro development and long-term storage of embryos. However, the results of the study show that the use of nobiletin as an antioxidant in in vitro culture of single-cell mouse embryos did'nt produce the expected effect.
Benzer Tezler
- Investigation of mechanoregulatory role of desmin protein
Investigation of mechanoregulatory role of desmin protein
NİLÜFER DÜZ
Doktora
Türkçe
2024
Tıbbi BiyolojiHacettepe ÜniversitesiTıbbi Biyoloji Ana Bilim Dalı
PROF. DR. PERVİN RUKİYE DİNÇER
- Fare embriyolarının in vitro kültüründe farklı BSA oranlarının gelişime etkisi
Effect of various BSA levels on development of mouse embryos in vitro culture
MİTHAT EVECEN
Doktora
Türkçe
1999
Veteriner Hekimliğiİstanbul ÜniversitesiDölerme ve Suni Tohumlama Ana Bilim Dalı
PROF. DR. İ. KAMURAN İLERİ
- Fare embriyolarının tip III antifreeze protein ve human heat shock protein 70 ile vitrifikasyonu ve çözdürülmesi sonrası in vitro gelişim oranlarına etkisi
The effect of TYPE III antifreeze protein and human heat shock protein 70 added to freezing vitrification mediums of mouse embryos on in vitro development rates
MUSTAFA BODU
Doktora
Türkçe
2021
Veteriner HekimliğiSelçuk ÜniversitesiDölerme ve Suni Tohumlama Ana Bilim Dalı
PROF. DR. MEHMET BOZKURT ATAMAN
DR. ALİ CİHAN TAŞKIN
- İn vitro fertilizasyon yöntemi ile elde edilen fare embriyolarının gelişimine farklı potasyum konsantrasyonlarının etkileri
Effects of various potassium levels on the development of in vitro fertilized mouse embryos
ÖZEN BANU ÖZDAŞ
Doktora
Türkçe
2001
Veteriner Hekimliğiİstanbul ÜniversitesiDölerme ve Suni Tohumlama Ana Bilim Dalı
DOÇ.DR. SERHAT PABUÇÇUOĞLU
- Fare embriyolarının dondurulmasında melatoninin embriyo canlılığı ve gelişmesi üzerindeki etkilerinin incelenmesi
Examination of the effects of melatonin on embryo viability and development in freezing mouse embryos
KÜBRA ÇAĞLAR
Yüksek Lisans
Türkçe
2019
BiyoteknolojiTekirdağ Namık Kemal ÜniversitesiTarımsal Biyoteknoloji Ana Bilim Dalı
PROF. DR. SEZEN ARAT
DR. ALİ CİHAN TAŞKIN