Elongasyon Faktör 2'nin aktif ADP-ribozillenme bölgeleri üzerine yapısal çalışmalar
Başlık çevirisi mevcut değil.
- Tez No: 91437
- Danışmanlar: PROF. DR. SİNA GÖKÇE
- Tez Türü: Doktora
- Konular: Biyofizik, Biophysics
- Anahtar Kelimeler: Belirtilmemiş.
- Yıl: 1999
- Dil: Türkçe
- Üniversite: İstanbul Üniversitesi
- Enstitü: Sağlık Bilimleri Enstitüsü
- Ana Bilim Dalı: Biyofizik Ana Bilim Dalı
- Bilim Dalı: Belirtilmemiş.
- Sayfa Sayısı: Belirtilmemiş.
Özet
6.0ZET EF-2 protein sentezinin elongasyon evresinde translokasyon aşamasının gerçekleşmesinden sorumlu bir G-proteinidir. EF-2, Ca2+/kalmoduline bağlı bir kinaz (protein kinaz İÜ yada EF-2 kinaz) tarafından özgün biçimde fosforillenir, difteri toksini ve Pseudomonas ekzotoksini tarafından ADP-ribozillenir. Bu reaksiyonlar sonucu modifiyeolan EF-2, protein sentezindeki etkinliğini yitirir. Toksinler tarafindan gerçekleştirilen ADP-ribozillenme reaksiyonunun hücresel bir düzenleme mekanizmasının yansıması olduğu ileri sürülmüş ve daha sonraki yıllarda EF-2'nin endojen olarak ADP-ribozillenebildiği gösterilmiştir. Bunun ötesinde sözkonusu etkinliğin EF-2'ye özgü olabileceğini ve bu reaksiyonun EF-2 üzerinde otokatalitik biçimde gerçekleştiğini düşündürmüştür. Böyle bir otokatalitik reaksiyon EF-2'nin endojen bir ADP-ribozil transferaz etkinliğini içermesini gerektirecektir. Bu tez çalışması bu sorulara yanıt aramak, ayrıca endojen ADP- ribozillenme reaksiyonunu ve de EF-2 üzerinde gerçekleştiği yeri daha ayrıntılı biçimde tanımlamak üzere gerçekleştirilmiştir. Bulgular endojen ADP-ribozillenme ile difteri toksinine bağlı ADP- ribozillenme arasında yakın ilişki, ancak aynı zamanda özgün farklılıkları ortaya koymuştur. İki aşamalı olarak yürütülen deneylerde EF-2'nin NAD ile ön ikübasyonunun (=endojen ADP-ribozillenmesinin) bir sonraki aşamada difteri toksinine bağımlı ADP-ribozillenme reaksiyonunun etkin biçimde baskıladığı görülmüştür. Bu bulgu iki reaksiyonun EF-2 üzerinde aynı yada yakın ilintili bölgelerde gerçekleştiğini ortaya koymaktadır. Ancak, aynı etkinin ön inkübasyonda NAD yerine ADP-riboz ile de gözlenmesi, endojen ADP-ribozillenmenin enzimatik olmayan yolla gerçekleştiğini sezindirmektedir. Endojen ADP-ribozillenmenin, difteri toksinine bağlı reaksiyonun aksine, tuz varlığına duyarlılık göstermesi iki reaksiyon arasındaki farklılıkları ortaya koymaktadır. Bu çalışmalarda (TCA ile çökeltme yoluyla izlenen ve kovalent bir bağın oluşuma dayanan) ADP-ribozillenmenin yam sıra, (NC filtreleme yöntemiyle) bir NAD molekülünün de EF-2'ye kompleksleşme yoluyla bağlandığı görülmüştür. Bu bulgu EF-2'nin ikinci bir bölgesi üzerinden NAD ile etkileştiğini ortaya koymaktadır. Endojen ve difteri toksinine bağlı ADP-ribozillenme ile radyoaktif işaretlenen EF-2'nin tripsinle sindirimi natif faktörün triptik pepfit profiliyle benzeşen bir profilin 66oluşumuyla sonuçlanmıştır. Endojen ADP-ribozillenme sonrası Edman amino asit dizileme işlemi, EF-2'nin 526. ve 529. konumlu kalıntılarından başlayan dolayısıyla 715. konumdaki diftamit kalıntısını da kapsayan polipeptitler varlığını ortaya koymuştur. Enzimatik olmayan reaksiyon yoluyla, büyük olasılıkla Schiff bazı oluşumuyla, gerçekleşen endojen ADP-ribozillenme ile difteri toksinine bağlı ADP- ribozil transferaz etkinliği altında gerçekleşen ADP-ribozillenmenin aynı yada yakın konumlu bölgelerde gerçekleşmesi dikkate değer bir duruma işaret etmektedir. 67
Özet (Çeviri)
7.SUMMARY Elongation factor 2 is a G-protein involved in eukaryotic polypeptide chain elongation and promotion of ribosomal translocation in protein synthesis. EF-2 is specifically phosphorylated by a Ca2+/calmodulin-dependent protein kinase (protein kinase in or EF-2 kinase) and ADP-ribosylated by diphteria toxin and Pseudomonas exotoxin. These forms are inactive in protein synthesis. It has been argued that the toxin effect may simulate a normal cellular control mechanism and later, endogenous ADP-ribosylation of EF-2 has been shown. Moreover, this activity appears to be an inherent property of EF-2 and works autocatalytically. Accordingly, this reaction should exhibit an endogenous ADP- ribosyl transferase activity. An investigation based on this working hypothesis has been initiated to answer these questions, and to shed light on endogenous ADP- ribosylation and also to define the ADP-ribosylation site on EF-2 in detail. Findings have put not only some similarity but also some specific differences between endogenous and toxin-dependent ADP-ribosylation. In two step-experiments showed that preincubation of EF-2 with NAD (endogenous ADP-ribosylation), inhibited toxin-dependent ADP-ribosylation effectively. This finding emphasizes that both reactions likely occur at the same or closely related sites. However, the same effect being observed after preincubation with ADP-ribose, instead NAD, suggests that endogenous ADP-ribosylation occurs non-enzimatically. Sensitivity of endogenous ADP-ribosylation to salt makes one of the differences which this reaction exhibits in comparison to the toxin-dependent ADP-ribosylation which is not affected by salt. These studies showed that, apart from ADP-ribosylation as traced by TCA-precipitation method of the formation of covalent bonds, NAD molecule binds to EF-2 making complex (by NC filtration method). This also shows that EF-2 interacts with NAD on a second site. Tryptic digestion of radioactively labelled EF-2 by either endogenous or diphteria toxin-dependent ADP-ribosylation, gave the same profile of tryptic digestion as that of the native factor. Edman reaction, after endogenous ADP-ribosylation of EF-2, showed that the site of endogenous ADP-ribosylation is located in the sequence starting at 526. and 529. amino acide residues respectively, and also involve the diphthamide residue. It is of interest to note that endogenous ADP-ribosylation occurs 68possibly through Schiff base formation, at a closely related site to that of diphteria toxin-dependent ADP-ribosylation. 69
Benzer Tezler
- Elongasyon faktör-2 (EF-2)'nin hücre içi dönüşüm (turnover) mekanizmaları üzerine bir çalışma: 1G2 hibridoma hücrelerinde yapılan gözlemler
A Study on intracellular turnover of EF-2: Investigation on 1G2 hybridoma cells
HANDAN TÜMER AKÇAKAYA
- Ökaryot elongasyon faktörü 2(EF-2)'nin farklı dokularda eldesi ve miktarlarının karşılaştırılması
Başlık çevirisi yok
ABDULLAH SEVİNÇ
Yüksek Lisans
Türkçe
1993
Tıbbi BiyolojiMarmara ÜniversitesiTıbbi Biyoloji ve Genetik Ana Bilim Dalı
DOÇ. DR. BEKİ KAN