Karbonik anhidraz II'nin homosistein ve metilglioksal ile modifikasyonunun enzim aktivitesi ve antijenik özelliklerine etkisinin incelenmesi
Investigation of the effect of modification of carbonic anhydrase II with homocysteine and methylglyoxal on enzyme activity and antigenic properties
- Tez No: 893169
- Danışmanlar: PROF. DR. AHMET ALVER
- Tez Türü: Doktora
- Konular: Biyokimya, Biochemistry
- Anahtar Kelimeler: Belirtilmemiş.
- Yıl: 2024
- Dil: Türkçe
- Üniversite: Karadeniz Teknik Üniversitesi
- Enstitü: Sağlık Bilimleri Enstitüsü
- Ana Bilim Dalı: Tıbbi Biyokimya Ana Bilim Dalı
- Bilim Dalı: Belirtilmemiş.
- Sayfa Sayısı: Belirtilmemiş.
Özet
Karbonik anhidrazlar (CA'lar), karbondioksitin hidrasyonunu geri dönüşümlü olarak katalizleyen metalloenzimlerdir. CA enzim ailesinin posttranslasyonel modifikasyonlarına (PTM'larına) dair çalışmalar genellikle veritabanlarına dayanarak değerlendirilmiştir. PTM'ler ile CA'ların fonksiyonları arasında açık bir korelasyon olduğu ifade edilse de birçok modifikasyon olayı için yeterince deneysel çalışmalar yapılmamıştır. Bu çalışmada, geniş bir doku dağılımına sahip insan karbonik anhidraz II (hCAII) izoenziminin homosistein (HCY) ve metilglioksal (MGO) ile in vitro modifikasyonlarının enzimin aktivitesi ve antijenik özellikleri üzerine etkilerinin incelenmesi amaçlanmıştır. Bu amaçla, çalışmada kullandığımız saf hCAII izoenzimi, insan eritrositlerinden afinite kromotografisi ile saflaştırıldı. Elde edilen saf hCAII izoenzimi, HCY ve MGO ile in vitro olarak modifiye edildi. Modifikasyonların varlığı western blot ile teyit edildi. Modifiye edilen hCAII izoenzimlerinin hidrataz ve esteraz aktiviteleri ölçüldü. Modifiye olan hCAII izoenzimlerinin antijenik özeliklerini belirlemek için Balb-c fareler bu enzimlerle immünize edildi ve fare serumlarındaki antikor titreleri ELISA yöntemi ile ölçüldü. Enzim aktiviteleri ölçüldüğünde, hCAII enziminin HCY ve MGO ile modifikasyonlarında, N homosisteinilasyona bağlı olarak enzim aktivitesinde dozla ilişkili olarak inhibisyona neden olurken, glikasyona bağlı etkisininin ise düşük modifikasyon dozunda önemli ölçüde aktivasyona sebep olurken yüksek modifikasyon dozunda ise inhibisyona neden oldu. MGO ile modifikasyonun Balb-c farelerde yüksek antijenik cevap oluşturduğu, HCY'nin antijeniteyi değiştirmediği gözlendi. Sonuç olarak, MGO ile modifikasyonun hCAII enziminin hem aktivite hem de antijenik özelliklerini etkilediği, HCY ile modifikasyonun ise enzimin aktivitesinde önemli etkisi olduğu gözlenirken, antijenik olarak etkisi belirlenmemiştir.
Özet (Çeviri)
Carbonic anhydrases (CAs) are metalloenzymes that reversibly catalyse the hydration of carbon dioxide. Studies on posttranslational modifications (PTMs) of the CA enzyme family have been evaluated mainly based on databases. Although there is a clear correlation between PTMs and the function of CAs, many modification events have not been adequately studied experimentally. In this study, we aimed to investigate the effects of in vitro modifications of human carbonic anhydrase II (hCAII) isoenzyme with homocysteine (HCY) and methylglyoxal (MGO) on the activity and antigenic properties of the enzyme. For this purpose, pure hCAII isoenzyme was purified from human erythrocytes by affinity chromatography. The obtained pure hCAII isoenzyme was modified in vitro with HCY and MGO. The presence of modifications was confirmed by Western blotting. Hydratase and esterase activities of the modified hCAII isoenzymes were measured. To determine the antigenic properties of the modified hCAII isoenzymes, Balb-c mice were immunised with these enzymes and antibody titres in mouse sera were measured by ELISA. When the enzyme activities were measured, modifications of hCAII enzyme with HCY and MGO caused dose-related inhibition of the enzyme activity due to N-homocysteinylation, while the glycation-dependent effect caused significant activation at low modification dose and inhibition at high modification dose. It was observed that modification with MGO induced a high antigenic response in Balb-c mice, while HCY did not alter antigenicity. In conclusion, modification with MGO affected both the activity and antigenic properties of hCAII enzyme, while modification with HCY had a significant effect on the activity of the enzyme, but no antigenic effect was determined.
Benzer Tezler
- Homosisteinin karbonik anhidraz I ve II izoenzimlerinin aktivitesi üzerine etkisinin araştırılması
Investigation of the effect of homocysteine on the activity of carbonic anhydrase I and II isoenzymes
SERA ŞAHİN
Yüksek Lisans
Türkçe
2025
BiyokimyaKaradeniz Teknik ÜniversitesiTıbbi Biyokimya Ana Bilim Dalı
PROF. DR. AHMET MENTEŞE
- Effects of some angiotensin converting enzyme-inhibitor drugs used for heart diseases on esterase activity of human carbonic anhydrase I and II
İnsan karbonik anhidraz I ve II'nin esteraz aktivitesi üzerine kalp hastalığında kullanılan bazı anjiyotensin dönüştürücü enzim-inhibitör ilaçlarının etkileri
MOHAMMED SALAH MALALLAH AL-TAMEEMI
Yüksek Lisans
İngilizce
2017
BiyokimyaYıldız Teknik ÜniversitesiKimya Ana Bilim Dalı
PROF. DR. BARBAROS NALBANTOĞLU
- Ciglitazonun glukoz 6 fosfat dehidrogenaz ve karbonik II anhidraz enzim aktiviteleri üzerine etkilerinin incelenmesi
Investigation of the effects of Ciglitazone on enzyme activities of glucose 6 phosphate dehydrogenase and carbonic anhydrase II
MUHARREM TOPAL
Yüksek Lisans
Türkçe
2009
BiyokimyaKaradeniz Teknik ÜniversitesiBiyokimya Ana Bilim Dalı
DOÇ. DR. AHMET ALVER
- Siprofibratın insan karbonik anhidraz ıı ve glukoz 6-fosfat dehidrogenaz enzimlerinin aktiviteleri üzerine etkilerinin in vitro incelenmesi
An investigation of the effects of ciprofibrate on human carbonic anhydrase ii and glucose 6- phosphate dehydrogenase enzymes activities in vitro
DİLER US
Yüksek Lisans
Türkçe
2009
BiyokimyaKaradeniz Teknik ÜniversitesiBiyokimya Ana Bilim Dalı
PROF. DR. E.EDİP KEHA
- Karbonik anhidraz I ve II izoenzimleri üzerine bazı ilaçların in vitro etkilerinin incelenmesi
Investigation of in vitro effects of some drugs on carbonic anhydrase I and II isoenzymes
MEHMET KUZUCU
Yüksek Lisans
Türkçe
2011
BiyokimyaErzincan ÜniversitesiBiyoloji Ana Bilim Dalı
YRD. DOÇ. DR. MURAT ÇANKAYA